人乳头瘤病毒31型L1病毒样颗粒在毕赤酵母中的表达及其免疫原性初步评价

人乳头瘤病毒31型L1病毒样颗粒在毕赤酵母中的表达及其免疫原性初步评价

论文摘要

目的在毕赤酵母中表达人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)31型L1病毒样颗粒(virus-like particles,VLP),并初步评价其免疫原性。方法构建HPV31 L1四拷贝重组表达质粒,电转化毕赤酵母KM71,甲醇诱导表达蛋白。将重组菌经30 L发酵罐发酵,产物分离纯化,用纯化样品免疫小鼠,采用半数有效剂量(median effective dose,ED50)初步评价表达产物的免疫原性。结果经双酶切鉴定,四拷贝重组表达质粒构建正确。表达产物可与小鼠抗HPV L1单抗发生特异性结合。纯化产物在透射电镜下为直径60 nm的VLP结构,相对分子质量约55 000,纯度达95%以上。小鼠体内效价ED50值为0. 018μg。结论成功在毕赤酵母中表达了HPV31型L1 VLP,其在小鼠体内具有良好的免疫原性。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 质粒、菌株、病毒及细胞
  •   1.2 主要试剂及仪器
  •   1.3实验动物
  •   1.4多拷贝重组质粒的构建
  •   1.5 诱导表达
  •   1.6 表达产物的鉴定
  •   1.7 发酵罐发酵培养
  •   1.8 分离纯化
  •   1.9 动物免疫
  •   1.1 0 体内效力的测定
  • 2 结果
  •   2.1 多拷贝质粒的鉴定
  •   2.2 表达产物的鉴定
  •   2.3 HPV31 L1 VLP的鉴定
  •     2.3.1 电镜观察
  •     2.3.2 SDS-PAGE分析
  •   2.4 体内效力
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 蔡蓓蓓,王文伟,仝光杰,王蓓,楼觉人,胡海涛

    关键词: 人乳头瘤病毒,病毒样颗粒,毕赤酵母,基因重组,蛋白表达

    来源: 中国生物制品学杂志 2019年10期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技,基础科学

    专业: 生物学,基础医学

    单位: 上海生物制品研究所有限责任公司

    分类号: R392

    DOI: 10.13200/j.cnki.cjb.002828

    页码: 1080-1083

    总页数: 4

    文件大小: 252K

    下载量: 53

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