卵丘细胞论文_马志,赵慧珊,张妍,刘晓妍,郝翠芳

导读:本文包含了卵丘细胞论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:细胞,巴豆,体外,蛋白,胚胎,颗粒,成熟。

卵丘细胞论文文献综述

马志,赵慧珊,张妍,刘晓妍,郝翠芳^[1]（2019）在《多囊卵巢综合征患者卵丘颗粒细胞中特异性环状RNA的表达研究》一文中研究指出目的研究多囊卵巢综合征(PCOS)患者卵丘颗粒细胞中特异性环状RNA(circRNA)的表达,探讨circRNA在诊断PCOS中的意义。方法收集2017年5～12月期间于烟台毓璜顶医院生殖医学科行IVF-ET/ICSI助孕的6名典型PCOS患者和6名卵巢正常对照者的卵丘颗粒细胞进行circRNA芯片检测,另收集同期行IVF-ET/ICSI助孕的PCOS及正常对照者的卵丘颗粒细胞各25例进行实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证芯片结果,记录两组患者的基础内分泌及促排卵情况等临床资料,Spearman秩相关分析差异表达的circRNA与PCOS患者临床特征资料之间的相关性,并绘制受试者工作特征曲线(ROC)评估circRNA对PCOS的诊断效力。结果 circRNA芯片共检测出286个差异表达的circRNA(与正常对照相比,PCOS患者卵丘颗粒细胞中分别有167个上调,119个下调),经后续挑选和qRT-PCR验证,hsa_circ_0043533在PCOS组中显着高表达(P<0.05),而hsa_circ_0097636显着低表达(P<0.01)。Spearman秩相关分析提示PCOS患者血睾酮(T)值与hsa_circ_0043533和hsa_circ_0097636表达水平均存在正相关性(分别为r=0.399 9,P=0.047 6;r=0.507 5,P=0.009 6)。ROC曲线分析显示,联合hsa_circ_0097636和T诊断PCOS的曲线下面积(AUC)显着高于单独采用hsa_circ_0043533(0.893vs.0.709)或hsa_circ_0097636(0.893vs.0.738)。结论 circRNA在PCOS及正常患者卵丘颗粒细胞中的表达存在显着差异,经qRT-PCR验证出的两个circRNA可能为深入理解PCOS发病机制和探索诊治方法提供更为广阔的思路。(本文来源于《生殖医学杂志》期刊2019年10期）

马睿,潘阳阳,王萌,李秦,何翃闳^[2]（2019）在《胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对小鼠卵丘细胞自噬与胞吞相关因子表达的影响》一文中研究指出卵丘细胞的质量对卵母细胞的生长发育至关重要,其自噬和胞吞可调控细胞生长及营养运输,以应对恶劣环境对卵母细胞质量的威胁。从促排处理的小鼠输卵管膨大部收集卵丘—卵母细胞复合体(Cumulus oocyte complexes, COCs),分离卵丘细胞进行体外培养,并添加0、50、100、150和200 ng/mL IGF-1处理细胞,分别提取细胞总RNA和总蛋白,实时荧光定量PCR检测各处理组 Atg5、 Beclin1、 LC3、 Cav1和 Cav2 mRNA的相对表达水平。免疫荧光定位不同蛋白在细胞中的表达,并结合蛋白免疫印迹(Western-blot,WB)测定不同质量浓度IGF-1处理组Atg5、Beclin1、LC3、Cav1和Cav2的蛋白表达水平,分析IGF-1对卵丘细胞自噬和胞吞的影响。结果显示:正常培养的卵丘细胞均可表达 Atg5、 Beclin1、 LC3、 Cav1、 Cav2 mRNA和蛋白,蛋白主要定位在细胞质。IGF-1可调控小鼠卵丘细胞Atg5、Beclin1、LC3、Cav1和Cav2蛋白的表达,与对照组相比,各处理组的Atg5蛋白表达量均升高;Beclin1和LC3蛋白表达量显着降低,且在100 ng/mL IGF-1处理组中最低。Cav1和Cav2蛋白在50 ng/mL和200 ng/mL处理组的表达量均显着降低,但在该质量浓度变化范围内,随着IGF-1质量浓度增大,2种蛋白的表达量不是线性降低,而是在100 ng/mL和150 ng/mL处理组表达量有回升现象。表明IGF-1可调控小鼠卵丘细胞的自噬和胞吞相关因子的表达,调控效果与IGF-1的质量浓度有关。(本文来源于《西北农业学报》期刊2019年09期）

王庆凯,崔茂盛,杨凌,赵子墨,付永利^[3]（2019）在《卵丘细胞对猪卵母细胞成熟及发育的影响》一文中研究指出本实验旨在研究有无卵丘细胞对卵母细胞成熟及其胚胎发育能力的影响。实验分别设裸卵组、卵丘细胞与卵母细胞共培养组、卵丘-卵母细胞复合体(COCs)组(对照组),检测猪成熟卵母细胞的存活率、极体率、孤雌激活后的卵裂率、囊胚率及各组卵母细胞的谷胱甘肽合成相关基因的表达。结果表明:COCs组卵母细胞经体外培养42 h后其存活率最高(95.76%),高于裸卵组(P<0.05)和共培养组(P>0.05);COCs组第一极体排出率为71.77%,高于共培养组和裸卵组(P<0.05);COCs组在后期发育中卵裂率与囊胚率高于共培养组和裸卵组(P<0.05),而共培养组的卵裂率及囊胚率高于裸卵组(P<0.05);与COCs组相比,裸卵组显着下调了GCLM、GCLC的表达(P<0.05),共培养组中GCLM的表达与COCs组无显着差异。研究结果显示,卵丘细胞对卵母细胞的成熟及发育均有显着影响,在卵母细胞成熟过程中,卵母细胞与卵丘细胞的缝隙连接受损会对卵母细胞的成熟效率产生影响,并且在卵母细胞后期发育中,缝隙连接的完整性与否会影响后期发育能力,并可推论出随着卵丘细胞的减少和缝隙连接的破坏,会造成谷胱甘肽合成基因表达降低,从而影响卵母细胞内的谷胱甘肽合成。(本文来源于《中国畜牧杂志》期刊2019年08期）

何敏,李朋粉,赵冬梅,项云改,张丹^[4]（2019）在《人卵丘细胞PROK1表达与IVF- ET后胚胎发育及妊娠结局的关系》一文中研究指出目的:探讨人卵丘细胞前动力蛋白1(PROK1)表达与体外受精-胚胎移植(IVF-ET)后胚胎发育及妊娠结局的关系。方法:选择162例行IVF-ET的不孕症患者作为研究对象,蛋白质印迹法检测所有患者卵丘细胞PROK1表达,按照PROK1表达值分为PROK1高表达组和低表达组,比较两组患者一般资料、胚胎发育和妊娠结局,以及p53、活化型含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶1(PCK1)蛋白表达和卵丘细胞葡萄糖含量的差异。结果:高表达组基础卵泡生成激素(FSH)值、卵母细胞成熟率、受精率、卵裂胚数、可利用胚胎数、优质胚胎数、种植率、临床妊娠率均明显高于低表达组(P<0.05),活化型caspase-3、PCK1蛋白及葡萄糖含量明显低于低表达组(P<0.05)。相关性分析显示卵丘细胞活化型caspase-3、PCK1蛋白及葡萄糖含量均与PROK1表达呈显着负相关(P<0.05)。结论:卵丘细胞PROK1表达与IVF-ET患者胚胎发育、临床妊娠结局有关,PROK1高表达有利于卵母细胞成熟和胚胎发育。(本文来源于《东南大学学报(医学版)》期刊2019年03期）

胡静,张琼,张云江^[5]（2019）在《多囊卵巢综合征患者卵丘细胞凋亡与骨形成蛋白及生长分化因子表达的关系》一文中研究指出目的分析多囊卵巢综合征患者卵丘细胞凋亡与骨形成蛋白-15(BMP-15)和生长分化因子9(GDF-9)表达的关系。方法回顾性选取2016年6月至2017年12月间在云南省第二人民医院行卵细胞质内单精子注射的多囊卵巢综合征患者60例为研究组,非多囊卵巢综合征行卵细胞质内单精子注射的患者120例为对照组。比较两组患者的基础内分泌情况和控制性超促排卵周期内分泌情况。收集两组患者的卵丘细胞,免疫组化检测BMP-15、GDF-9蛋白表达; TUNEL法检测卵丘细胞凋亡情况; RT-PCR检测BMP-15、GDF-9及凋亡相关因子BAX、BCL-2 mRNA的表达及其相关性。结果研究组患者基础黄体生成素、基础孕酮明显高于对照组,差异有统计学意义(P <0. 05);研究组患者尿促性素用量明显低于对照组,穿刺卵泡数、获卵数明显高于对照组,差异有统计学意义(P <0. 05)。免疫组化显示,研究组BMP-15、GDF-9蛋白表达水平明显低于对照组,差异有统计学意义(P <0. 05)。研究组卵丘细胞凋亡率明显高于对照组,差异有统计学意义(P <0. 05)。研究组卵丘细胞凋亡相关因子BAX、BCL-2、BMP-15、GDF-9mRNA相对表达量明显低于对照组,BAX/BCL-2比值明显高于对照组,差异有统计学意义(P <0. 05)。Pearson分析显示,对照组BMP-15、GDF-9 mRNA表达水平与BCL-2 mRNA呈正相关(P <0. 05); BMP-15、GDF-9 mRNA表达水平与BAX mRNA无明显相关性(P> 0. 05)。研究组BMP-15、GDF-9 mRNA表达水平与BCL-2 mRNA呈正相关(P <0. 01);与BAX mRNA呈负相关(P <0. 01)。结论多囊卵巢综合征患者卵丘细胞BMP-15、GDF-9表达下调引发凋亡相关因子BAX、BCL-2异常表达可能是卵丘细胞凋亡率增加的原因之一。(本文来源于《临床和实验医学杂志》期刊2019年10期）

肖星星^[6]（2019）在《卵丘颗粒细胞通过增加巴豆酰化修饰促进卵母细胞体外成熟的作用》一文中研究指出【目的】探究卵母细胞体外成熟不同时期对应的卵丘颗粒细胞总体巴豆酰化修饰及催化酶的差异,进而探究巴豆酰化修饰对卵母细胞体外成熟的影响,为完善卵母细胞体外培养体系提供研究基础。【方法】1、通过GEO数据库挖掘及统计分析,比较人卵母细胞体内成熟不同时期对应的卵丘颗粒细胞巴豆酰化修饰催化酶(EP300、CBP、SIRT1、SIRT2、SIRT3、HDAC3、CDYL)的差异;2、通过收集临床样本,采用点杂交检测卵母细胞体外成熟不同时期对应的卵丘颗粒细胞总体巴豆酰化修饰差异;通过Q-PCR检测不同时期卵丘颗粒细胞巴豆酰化修饰催化酶(EP300、CBP、SIRT1、SIRT2、SIRT3、HDAC3、CDYL)的差异;以及与卵丘扩展的相关性;3、通过对原代培养的卵丘颗粒细胞进行巴豆酸钠处理,利用点杂交、PCR、WB检测巴豆酸钠对卵丘颗粒细胞巴豆酰化修饰水平及巴豆酰基转移酶EP300、CBP的影响;通过CCK8检测巴豆酰化修饰对卵丘颗粒细胞和293T细胞系增殖率的影响;通过WB检测巴豆酰化修饰对卵丘颗粒细胞和293T细胞系凋亡的影响;通过PCR检测卵丘扩展基因(HAS2、PGR、PTGS2、PTX3、TNFAIP6)的表达。4、通过小鼠IVM模型,比较巴豆酰化实验组与对照组卵母细胞体外培养成熟率。【结果】1、GEO数据库挖掘的统计分析结果显示MII期巴豆酰化修饰水合酶(CDYL)表达量明显低于GV期,表明卵母细胞体内成熟不同时期对应的卵丘颗粒细胞巴豆酰化修饰酶的表达存在差异;2、收集人IVM过程中卵母细胞成熟不同时期对应的卵丘颗粒细胞,点杂交结果显示成熟的卵丘颗粒细胞的总体巴豆酰化水平逐渐增加,Q-PCR技术检测巴豆酰基转移酶EP300在成熟卵丘颗粒细胞中显着上调;且EP300的表达量与卵丘扩展程度及巴豆酰化修饰水平存在正相关性;3、通过对原代培养的卵丘颗粒细胞进行巴豆酸钠处理,点杂交、PCR检测结果显示巴豆酸钠可促进卵丘颗粒细胞总体巴豆酰化修饰水平增加及EP300表达上调;WB检测结果显示巴豆酰化修饰可促进卵丘颗粒细胞增殖抑制其凋亡,对293T细胞的作用相类似;且可上调卵丘扩展基因的表达,加速卵丘颗粒细胞的扩展,恢复卵母细胞减数分裂进程;4、通过小鼠IVM模型,统计分析结果显示巴豆酰化实验组较对照组卵母细胞体外成熟率明显增高,表明增加巴豆酰化修饰可促进卵母细胞体外成熟。【结论】在卵母细胞体外成熟过程中,卵母细胞不同时期对应的卵丘颗粒细胞通过上调巴豆酰基转移酶EP300增强巴豆酰化修饰水平,加速卵丘扩展,促进卵母细细胞体外成熟。(本文来源于《南华大学》期刊2019-05-01）

王莉^[7]（2019）在《Ep300介导卵丘细胞EGFR Kcr修饰对卵母细胞体外成熟作用的机制研究》一文中研究指出【目的】本研究旨在探索Ep300(巴豆酰基转移酶)在卵丘细胞(CCs)成熟过程中介导的EGFR(表皮生长因子受体)Kcr(巴豆酰基化修饰)的作用以及相关的调控分子机制。【方法】1)检测Ep300对CCs增殖凋亡的影响:我们采用siRNA技术敲低Ep300的表达和特异性激活剂CTPB激活Ep300,Dot Blot(点杂交)检测细胞总Kcr的水平;其次,在Ep300低表达或激活的情况下,采用Annexin V-FITC/PI染色(细胞凋亡双染色)以及Western Blot检测凋亡标志物Fox-01A、Fox-03A验证Ep300是否抑制细胞的凋亡,同时,CCK8实验(细胞增殖实验)检测Ep300是否促进细胞增殖。2)筛选Ep300的底物并验证:对两组Kcr修饰的靶蛋白及位点取交集,KEGG通路分析,结果是巴豆酰化修饰蛋白与卵母细胞减数分裂相关,其中EGFR做为卵丘调控卵母细胞的关键因子可也被Kcr修饰,可能是Ep300的底物。首先,r-EGFR(重组EGFR)和Kcr-CoA(巴豆酰基-辅酶A)共孵育验证EGFR是否存在Kcr修饰,免疫共沉淀(Co-IP)验证内源EGFR是否存在Kcr修饰;其次,结合Co-IP及siRNA实验,验证Ep300是否与EGFR结合、并参与调控EGFR的Kcr修饰;最后,初步探索Nacr(巴豆酸钠,外源性巴豆酰化激活剂)对siEp300不同情况下Kcr修饰对EGFR以及p-EGFR(磷酸化-表皮生长因子受体)表达水平的影响。3)探索EGFR的Kcr上调EGFR和p-EGFR表达的分子机制以及对下游通路的影响。首先,验证Kcr修饰上调EGFR表达的分子机制:(1)转录水平验证:RT-PCR检测EGFR不同情况下(Nacr vs cont.)的表达情况;(2)合成水平验证:使用蛋白质合成抑制剂环己酰亚胺(CHX)处理HEK 293T(Nacr vs cont.),Western Blot检测EGFR表达情况;(3)降解水平验证:使用蛋白酶体抑制剂MG-132处理HEK 293T(Nacr vs cont.),Western Blot检测EGFR表达情况。其次,验证Kcr修饰上调p-EGFR表达的分子机制:结合Uniprot数据库分析显示,EGFR的Kcr位点也是ATP结合位点之一,由此我们将r-EGFR与不同浓度Kcr-CoA共培养,然后与ATP类似物TNP-ATP进行孵育,检测Kcr修饰对EGFR和ATP的结合能力的影响。进一步检测Kcr修饰对内源EGFR与ATP结合的影响:予以HEK 293T不同处理(Nacr vs cont.),4 h后IP EGFR,将所得的产物与TNP-ATP共同孵育,检测内源性Kcr修饰对EGFR和TNA-ATP的结合能力的影响。最后检测Ep300介导的Kcr修饰对于EGFR下游信号通路的影响,在CCs和HEK 293T中,分别予以Nacr和siEp300处理,Western Blot检测EGFR下游分子p-ERK、ERK、p-AKT、AKT的表达情况。【结果】1)siEp300后Kcr表达下降且凋亡标志物Fox-01A、Fox-03A升高,CTPB激活Ep300后Kcr表达升高且凋亡标志物Fox-01A、Fox-03A下降,Annexin V-FITC/PI染色、CCK8实验表明Ep300促进CCs及HEK 293T的增殖,抑制凋亡;2)根据数据库分析,EGFR可能是Ep300的底物。首先内源性及外源性EGFR均可被Kcr修饰,并且EGFR的Kcr修饰由Ep300介导,且Kcr修饰能上调EGFR和p-EGFR的表达;3)验证了Kcr修饰能抑制EGFR降解,上调EGFR的表达,与此同时,增强EGFR与ATP的结合能力,从而上调p-EGFR的表达;进一步的实验证实,EGFR的Kcr修饰能激活其下游通路p-ERK、p-AKT的表达。【结论】Ep300介导EGFR的Kcr修饰,上调CCs的EGFR及p-EGFR的表达,激活EGFR通路促进卵母细胞的体外成熟,为卵母细胞的体外成熟提供新的策略。(本文来源于《南华大学》期刊2019-05-01）

吕爱香^[8]（2019）在《卵丘细胞在未成熟卵母细胞玻璃化冷冻中的作用及其机制研究》一文中研究指出背景自1978年第一例试管婴儿Louise Brown在英国成功诞生以来,辅助生殖技术(Assisted reproductive technology,ART)迅速在世界范围内传播开来。1988年3月我国首例试管婴儿于北医叁院诞生。据不完全统计,目前全球约有500余万名试管婴儿诞生~([1])。叁十年来,辅助生殖技术得到了迅猛发展,目前的辅助生殖技术及其衍生技术包括:人工授精、体外受精与胚胎移植技术(IVF-ET)、卵胞浆内单精子显微注射技术(Intracytoplasmic Sperm Injection,ICSI)、胚胎植入前遗传学诊断技术(Preimplantation Genetic Diagnosis,PGD)、线粒体移植、未成熟卵体外成熟技术(In vitro maturation,IVM)、胚胎冷冻复苏技术、卵母细胞与卵巢组织冷冻技术、人工辅助孵出等。近年来随着女性生育年龄的推迟及卵巢癌、乳腺癌等疾病的影响,女性生育力保存得到了广泛的关注。目前卵母细胞玻璃化冷冻结合IVM培养技术在保存女性生育力方面取得了可喜成果,尽管如此,这些技术的安全性和可靠性仍有待进一步评估。卵丘细胞是包裹在卵母细胞外层的颗粒细胞,通过提供卵母细胞发育过程中必须的营养物质、信号分子和代谢产物调控卵泡发育,对卵母细胞成熟尤其是细胞核和胞质成熟有促进作用。之前的研究表明通过液相色谱质谱法检测卵丘细胞中蛋白组学发现可发育为囊胚组和非囊胚组蛋白表达存在差异~([2])。这些差异蛋白不仅参与卵泡发育,还可能参与部分免疫反应,在胚胎植入过程中起一定的作用~([3]),此外,卵丘细胞还可吸引、捕获甚至筛选精子、触发精子获能、顶体反应并防止透明带僵化~([4;5])。此外,人卵丘细胞还可产生胰岛素样生长因子Ⅱ(Insulin-like growth factor,IGF-Ⅱ),其与卵泡的发育、优势卵泡的选择及卵母细胞的成熟有着密切的联系~([6])。目前关于卵丘细胞对卵母细胞冷冻过程中的作用研究较少,Jin等人的研究表明卵丘细胞可显着增强成熟卵母细胞冻存后的存活率、卵裂率、优质胚胎率、着床率和临床妊娠率~([7])。然而,Minasi等人报告玻璃化冷冻解冻后卵丘细胞-卵母细胞复合物和裸卵的存活率无明显差异~([8])。国内李娜等人的研究显示卵丘细胞保留与否不影响玻璃化冻融后卵母细胞的存活率,但带有卵丘细胞的卵母细胞体外成熟率明显高于裸卵~([9])。玻璃化冷冻对未成熟卵母细胞冷冻的影响的研究较匮乏。对牛GV期卵母细胞冷冻的研究显示,相比新鲜对照组,冻融后卵母细胞内某些第二信使环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)及成熟促进因子(Maturation promoting factor,MPF)含量下降,导致体外成熟过程中GV期卵母细胞成熟率降低,可能因玻璃化冷冻过程中细胞膜损伤、胞质流失导致~([10])。卵丘细胞对未成熟卵母细胞玻璃化冷冻后发育潜能的影响仍有待进一步评估,同时关于冷冻复苏过程对卵母细胞损伤的机制需要更为深入的研究。本研究以小鼠和人类未成熟卵母细胞为研究对象,系统研究玻璃化冷冻时卵丘细胞存在与否及冷冻时期对小鼠未成熟卵母细胞解冻存活率、体外成熟率、受精率及后续胚胎发育潜能的影响。以人类未成熟卵母细胞为研究对象,研究玻璃化冷冻时卵丘细胞存在与否及冷冻时期对未成熟卵母细胞纺锤体和染色体的影响。采用高通量测序技术研究玻璃化冷冻对未成熟卵母细胞全基因组表达谱的影响,旨在寻找未成熟卵母细胞冷冻的最佳时期和冷冻保存方案,为女性生育力保存提供理论依据。第一部分卵丘细胞对小鼠卵母细胞玻璃化冷冻后发育的影响研究目的1.探讨有无卵丘细胞在玻璃化冷冻过程中对小鼠未成熟卵母细胞受精及胚胎发育的影响。2.探讨未成熟卵母细胞冷冻应先进行体外成熟再冷冻还是先冷冻再进行体外成熟。材料与方法收集小鼠未成熟卵母细胞,将其分为五组:组1:卵丘细胞-卵母细胞复合物(COC)体外成熟后冷冻;2:裸卵(DO)体外成熟后冷冻;组3:裸卵(DO)体外成熟;组4:卵丘细胞-卵母细胞复合物(COC)冷冻后体外成熟;组5:裸卵(DO)冷冻后体外成熟。以组3为对照组;将五组体外培养后得到成熟卵母细胞用同种属雄鼠精子进行体外受精并培养至囊胚期。观察比较五组的解冻存活率、成熟率、受精率、卵裂率、囊胚形成率等,并进行数据统计分析。结果1.DO体外成熟组相比其他四组,其MII率、解冻存活率、受精率、卵裂率、囊胚形成率均较高,差异有统计学意义(P<0.05)。2.COC体外成熟后冷冻组的MII率(72.33%VS60.39%)、解冻存活率(79.13%VS52.46%)均高于DO体外成熟后冷冻组(P<0.05),受精率(53.85%VS46.88%)、卵裂率(61.22%VS60.00%)、囊胚形成率(14.29%VS3.33%)两组间虽无统计学差异,但COC体外成熟后冷冻组仍有高于DO体外成熟后冷冻组的趋势。3.DO冷冻后体外成熟组与COC冷冻后体外成熟组相比,其MII率(45.57%VS62.50%)、解冻存活率(48.47%VS68.38%)均较低,差异有统计学意义(P<0.05)。4.COC体外成熟后冷冻组的MII率(72.33%VS62.50%)、解冻存活率(79.13%VS68.38%)、受精率(53.85%VS64.00%)囊胚形成率(14.29%VS25.00%)与COC冷冻后体外成熟组无明显差异(P>0.05)。5.DO体外成熟后冷冻组的解冻存活率(52.46%VS48.47%,P<0.05)高于DO冷冻后体外成熟组,但囊胚形成率(3.33%)低于DO冷冻后体外成熟组(12.00%)和DO直接体外成熟组(26.98%),差异有统计学意义。结论1.裸化未成熟卵母细胞先行体外成熟培养后再冷冻,其成熟率优于先冷冻后体外成熟,与未冷冻卵母细胞相比,冷冻过程明显降低卵母细胞随后胚胎发育潜能。2.无论在卵母细胞先行体外成熟培养后冷冻或先冷冻后体外成熟培养,卵丘细胞对卵母细胞冷冻均有保护作用,有利于提高其随后的受精、胚胎继续发育潜能。第二部分卵丘细胞在玻璃化冷冻过程中对人类未成熟卵母细胞纺锤体及染色体的影响研究目的通过比较有无卵丘细胞在人类未成熟卵母细胞玻璃化冷冻后的纺锤体和染色体分布情况,探讨卵丘细胞对未成熟卵母细胞玻璃化冷冻的过程中纺锤体及染色体的影响。材料与方法收集我中心行ICSI患者的未成熟卵母细胞,将人类未成熟卵母细胞分为先冷冻再IVM组和先IVM再冷冻组,再将两组根据有无卵丘细胞分为裸卵(DO)、卵丘细胞-卵母细胞复合物(COC)组,以新鲜裸卵直接在体外行IVM为对照,将五组卵母细胞玻璃化冻融后进行纺锤体和染色体免疫荧光染色,统计五组纺锤体及染色体正常形态率。结果1.与先冷冻再IVM DO组相比,先冷冻再IVM COC组纺锤体(60.00%VS11.76%)及染色体(45.00%%VS11.76%)正常率明显增高;2.与新鲜DO组相比,先冷冻再IVM DO组纺锤体(78.26%VS11.76%)及染色体(65.22%VS11.76%)正常率明显降低;而先IVM再冷冻DO组纺锤体(55.56%VS78.26%)和染色体(61.11%VS65.22%)正常率与新鲜DO组无统计学差异。3.与先IVM再冷冻COC组相比,先冷冻再IVM COC组纺锤体(85.71%VS60.00%)及染色体(66.67%VS45.00%)正常率无统计学差异。结论在DO未成熟卵母细胞中,先体外成熟后冷冻,对卵母细胞的纺锤体损伤较先冷冻再体外成熟培养要小,而有卵丘细胞包裹的卵母细胞,先体外成熟后冷冻还是先冷冻后体外成熟培养,纺锤体的形态均正常,卵丘细胞对未成熟卵母细胞的冷冻有保护作用,可以减缓冷冻保护剂渗透到卵母细胞的速度,减少冷冻保护剂的毒性作用。第叁部分玻璃化冷冻/解冻对人未成熟卵母细胞全基因组表达的影响研究目的通过比较人类未成熟卵母细胞玻璃化冷冻后行体外成熟培养与直接体外成熟至成熟期的全基因组表达的差异,筛选影响卵母细胞冷冻的关键基因和相应的调控通路,探讨玻璃化冷冻对未成熟卵母细胞基因表达谱的影响。材料与方法收集于我中心行卵胞浆内单精子注射患者的废弃未成熟卵母细胞,部分直接行体外成熟培养,部分先进行玻璃化冷冻再行体外成熟培养,用全基因组表达谱芯片对两组成熟期卵母细胞冷冻后基因表达谱进行分析。结果1.卵母细胞玻璃化冷冻后全基因组表达谱芯片分析中共获得2倍以上差异差异表达基因765个,其中上调基因103个,下调基因662个。2.细胞过程、代谢过程、生物调节、生物过程调节、对刺激的反应、细胞成分组织或生物发生、多细胞组织过程、定位、发育过程、信号、生物过程的积极调节、生物过程负调节、免疫系统过程等参与了冷冻后下调基因表达的生物过程调控;3.细胞、细胞器、细胞膜部分、膜封闭腔、大分子配合物、细胞外区部分等参与了冷冻后下调基因表达调控的细胞组成调控;结合、催化活性、分子功能的调整、转录活性的调节剂、转运蛋白活性、信号传导蛋白活性、分子传导蛋白活性、结构分子活性等参与冷冻后下调基因表达的分子功能调控。4.癌症通路、人类乳头瘤病毒感染通路、RNA代谢通路、Hippo信号通路、mtor信号通路、Wnt信号通路、调节干细胞多能性的信号通路、ECM受体相互作用通路参与了冷冻后基因的调控通路。结论与直接体外成熟的卵母细胞相比,在未成熟期玻璃化冷冻后体外成熟的卵母细胞存在多个差异表达基因,这些基因变化与卵母细胞质量、细胞器组成和多种调节通路有关。(本文来源于《郑州大学》期刊2019-05-01）

王庆凯^[9]（2019）在《褪黑素及卵丘细胞对猪卵母细胞体外成熟及胚胎发育的影响》一文中研究指出褪黑素作为自由基的清除剂可以通过清除卵母细胞内的活性氧从而来消除氧化应激对卵母细胞造成的不良影响,此外卵丘细胞与卵母细胞成熟联系紧密,且卵丘细胞在卵母细胞成熟和受精过程中的作用比较重要,本文主要研究了褪黑素及卵丘细胞对卵母细胞体外成熟及胚胎发育的影响。从而进一步优化卵母细胞体外成熟的培养体系。试验一主要为对照组、褪黑素组、褪黑素受体抑制剂组和褪黑素+褪黑素受体抑制剂组四组,主要检测了胚胎发育指标、活性氧含量、线粒体分布、谷胱甘肽含量及相关基因表达情况。结果发现,成熟液中添加褪黑素后其卵丘扩展指数、极体排出率、胚胎卵裂率、囊胚率要显着高于其他叁组(P<0.05)。褪黑素组谷胱甘肽含量与褪黑素+抑制剂组差异不显着,但是显着高于对照组和抑制剂组(P<0.05)。褪黑素组中线粒体均匀分布的卵母细胞比例显着高于对照组(P<0.05),且卵母细胞内活性氧水平显着低于对照组(P<0.05)。褪黑素组对卵母细胞成熟相关GDF9基因表达没有显着影响(P>0.05),但是显着降低了促凋亡基因P53和BAX的表达(P<0.05),并且提高抗氧化基因CAT和成熟相关基因BMP15的表达。结果表明:褪黑素作用于其受体来提高猪卵母细胞体外成熟发育效果并影响卵母细胞卵丘扩展情况,可促进猪卵母细胞内谷胱甘肽酶的生成和线粒体空间分布,并降低胞内活性氧含量;添加褪黑素显着降低促凋亡基因P53和BAX的表达,并提高抗氧化基因CAT和成熟相关基因BMP15的表达。试验二主要为裸卵组、共培养组和卵丘-卵母细胞复合体(cumulus-oocyte complexes,COCs)组,主要检测了胚胎发育相关指标及相关基因表达情况。结果发现,COCs组存活率显着高于裸卵组(P<0.05),COCs组和共培养组两组间的存活率差异不显着(P>0.05);COCs组第一极体率显着高于共培养组和裸卵组(P<0.05),COCs组卵裂率和囊胚率要显着高于共培养组跟裸卵组(P<0.05)。裸卵组显着下调了Gpx3、Gpx4、Gclm、Gsto1、Gclc的表达(P<0.05),但是谷胱甘肽巯基转移酶基Gstz1的表达与COCs组相比差异不显着(P>0.05)。本试验结果表明:将裸卵与卵丘细胞共培养,会显着增加裸卵的成熟率及其后期胚胎发育能力,但是其成熟效果及发育能力仍低于卵丘-卵母细胞复合体。卵丘细胞能促进卵母细胞谷胱甘肽合成代谢相关基因Gclc、Gclm、Gpx3、Gpx4、Gtso1的表达。(本文来源于《河北工程大学》期刊2019-01-01）

付瑶^[10]（2018）在《BMP15/GDF9通过BMPR2调控牛卵丘细胞增殖与凋亡机制的研究》一文中研究指出在哺乳动物卵泡发育过程中,颗粒细胞对卵母细胞起到保护并提供营养的作用,而卵母细胞并非一个被动的接受者,卵母细胞自身合成一些因子,以旁分泌的形式作用于周围的颗粒细胞,调控颗粒细胞的生理状态。卵母细胞和颗粒细胞这种双向的物质信号交流过程,促使卵泡正常有序的发育。在卵母细胞来源的因子中,TGFβ家族是非常重要的一类。骨形态发生蛋白15(Bonemorphogenetic protein 15,BMP15)和生长分化因子9(Growthdifferentiation factor9,GDF9)是由卵母细胞分泌的两个生长因子,属TGFβ超家族成员。BMP15和GDF9能与卵丘细胞上的受体结合,引起下游基因的级联反应,影响卵丘细胞的增殖和凋亡,从而调节卵泡发育与卵母细胞成熟。BMPR2是卵丘细胞上表达的TGFβⅡ型受体,BMP15和GDF9分别通过不同的Ⅰ型受体与BMPR2结合,进而调控下游代谢反应。本课题组前期研究结果已经证明,牛卵丘细胞体外培养时,添加适当浓度的BMP15和GDF9,能够促进BMPR2的表达并调控细胞增殖和凋亡,然而,二者是如何影响BMPR2的机制尚不十分明确。为了进一步探索BMP15和GDF9通过BMPR2介导对牛卵丘细胞调控的作用机制,本文进行了如下的工作研究。首先,我们利用高通量测序技术构建了BMP15和GDF9处理的卵丘细胞与对照组的mRNA差异表达谱。结果显示,单独添加BMP15有246个基因上调,183个基因下调;单独添加GDF9有218个基因上调,150个基因下调;共同添加BMP15和GDF9有228个基因上调,202个基因下调。我们对这些基因进行了统计和生物信息学分析,筛选出可能与两种细胞因子调控卵丘细胞增殖及凋亡协同效应有关的4个基因:USP42、YWHAH、SMAD6和NOG,作为后续研究的基因。接下来对筛选出的基因分别进行siRNA敲降,检测BMPR2表达变化和细胞凋亡、增殖情况。结果显示,BMP15和GDF9添加能够抑制卵丘细胞凋亡。敲降USP42和YWHAH后,BMPR2上调,细胞凋亡无显着变化,CCND2、PCNA和CDC42显着上调;敲降SMAD6和NOG后,BMPR2显着下调,细胞凋亡增加,p53显着上调,bcl-2显着下调。这些结果说明,BMP15和GDF9分别通过USP42、YWHAH、SMAD6和NOG的介导,来调控下游基因,从而调节细胞的增殖和凋亡。为了初步探索BMP15和GDF9对卵丘细胞的调控作用与非编码RNA的关系,我们对4组处理进行了circRNA差异表达谱的测序。测序得到了1706个circRNA。对这些circRNA进行了生物信息学分析并筛选出差异circRNA。通过对来源基因的功能注释和富集分析,我们发现差异circRNA与运动,生殖,生物粘附,生长,激素分泌等有关。差异基因结果显示,添加BMP15有3个circRNA上调,6个circRNA下调;添加GDF9组中12个上调,24个下调;共同添加BMP15和GDF9时,15个circRNA上调,13个下调。circ15/a_75、circ_ENSBTAG00000012691_1和circ_n/a_303在BMP15和GDF9组以联合添加组合组中都有差异。推测它们可能与BMP15和GDF9的加性效应有关。定量PCR分析表明,这叁个circRNA的表达水平与测序结果一致。我们预测了这3个circRNA的靶miRNA,通过荧光定量PCR验证,靶miRNA的表达恰好与circRNA趋势相反。这些结果说明,BMP15和GDF9可能通过circRNA作为miRNA海绵调节miRNA的表达,从而影响下游靶基因,来调控卵丘细胞的状态并影响卵泡的发育。为了进一步探讨circRNA在BMP15/GDF9对卵丘细胞调控中的作用,本研究筛选了特异靶作用于BMPR2的miRNA,通过双荧光素酶报告确定BMPR2为miR-187的靶基因;bta_circRNA_11396是特异结合miR-187的circRNA,用siRNA抑制bta_circRNA_11396后,检测miR-187和靶基因BMPR2的表达量,结果显示,敲降bta_circRNA_11396能够使miR-187表达上调,BMPR2表达下调,细胞凋亡增加。因此,bta_circRNA_11396可能作为miRNA海绵,通过抑制miR-187的活性,促进BMPR2表达,抑制细胞凋亡。综上,研究结果为进一步揭示BMP15和GDF9对牛卵丘细胞的作用机制提供分子依据,为深入研究卵泡的发育提供了一定的理论基础。(本文来源于《吉林大学》期刊2018-12-01）

卵丘细胞论文开题报告

（1）论文研究背景及目的

此处内容要求：

首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。

写法范例：

卵丘细胞的质量对卵母细胞的生长发育至关重要,其自噬和胞吞可调控细胞生长及营养运输,以应对恶劣环境对卵母细胞质量的威胁。从促排处理的小鼠输卵管膨大部收集卵丘—卵母细胞复合体(Cumulus oocyte complexes, COCs),分离卵丘细胞进行体外培养,并添加0、50、100、150和200 ng/mL IGF-1处理细胞,分别提取细胞总RNA和总蛋白,实时荧光定量PCR检测各处理组 Atg5、 Beclin1、 LC3、 Cav1和 Cav2 mRNA的相对表达水平。免疫荧光定位不同蛋白在细胞中的表达,并结合蛋白免疫印迹(Western-blot,WB)测定不同质量浓度IGF-1处理组Atg5、Beclin1、LC3、Cav1和Cav2的蛋白表达水平,分析IGF-1对卵丘细胞自噬和胞吞的影响。结果显示:正常培养的卵丘细胞均可表达 Atg5、 Beclin1、 LC3、 Cav1、 Cav2 mRNA和蛋白,蛋白主要定位在细胞质。IGF-1可调控小鼠卵丘细胞Atg5、Beclin1、LC3、Cav1和Cav2蛋白的表达,与对照组相比,各处理组的Atg5蛋白表达量均升高;Beclin1和LC3蛋白表达量显着降低,且在100 ng/mL IGF-1处理组中最低。Cav1和Cav2蛋白在50 ng/mL和200 ng/mL处理组的表达量均显着降低,但在该质量浓度变化范围内,随着IGF-1质量浓度增大,2种蛋白的表达量不是线性降低,而是在100 ng/mL和150 ng/mL处理组表达量有回升现象。表明IGF-1可调控小鼠卵丘细胞的自噬和胞吞相关因子的表达,调控效果与IGF-1的质量浓度有关。

（2）本文研究方法

调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。

观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。

实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。

文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。

实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。

定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。

定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。

跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。

功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。

模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。

卵丘细胞论文参考文献

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[3].王庆凯,崔茂盛,杨凌,赵子墨,付永利.卵丘细胞对猪卵母细胞成熟及发育的影响[J].中国畜牧杂志.2019

[4].何敏,李朋粉,赵冬梅,项云改,张丹.人卵丘细胞PROK1表达与IVF-ET后胚胎发育及妊娠结局的关系[J].东南大学学报(医学版).2019

[5].胡静,张琼,张云江.多囊卵巢综合征患者卵丘细胞凋亡与骨形成蛋白及生长分化因子表达的关系[J].临床和实验医学杂志.2019

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[7].王莉.Ep300介导卵丘细胞EGFRKcr修饰对卵母细胞体外成熟作用的机制研究[D].南华大学.2019

[8].吕爱香.卵丘细胞在未成熟卵母细胞玻璃化冷冻中的作用及其机制研究[D].郑州大学.2019

[9].王庆凯.褪黑素及卵丘细胞对猪卵母细胞体外成熟及胚胎发育的影响[D].河北工程大学.2019

[10].付瑶.BMP15/GDF9通过BMPR2调控牛卵丘细胞增殖与凋亡机制的研究[D].吉林大学.2018

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