导读:本文包含了功能基因亚功能片段论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:人杀菌,渗透增强蛋白,定向进化,易错PCR,DNA改组
功能基因亚功能片段论文文献综述
李晶琴,孔庆利,安云庆[1]（2017）在《人杀菌/渗透增强蛋白N端功能片段基因突变文库的构建和鉴定》一文中研究指出目的为提高杀菌/渗透性增强蛋白N端功能片段BPI_(23)对内毒素(lipopolysaccharides,LPS)的亲和性,通过易错聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)和DNA改组技术,对其编码序列BPI_(600)进行突变,在大肠杆菌XL10-Gold中构建BPI_(600)基因突变体库。方法通过控制Mg2+和Mn2+的浓度进行易错PCR,获得BPI_(600)随机突变基因片段,经测序和基因比对,确定BPI_(600)的随机突变率。再对易错PCR产物进行DNA改组,将改组产物克隆至pYD1载体中,转化大肠杆菌XL10-Gold,从Amp抗性(LuriaBertani,LB)固体培养平板上任选10个单菌落,增菌后提取质粒,得到pYD1-shuffled BPI_(600)重组质粒,将质粒进行HindⅢ/XhoⅠ酶切鉴定,取5个阳性质粒进行DNA测序,通过基因和氨基酸比对鉴定突变情况。结果测序和基因比对显示,BPI_(600)经易错PCR所获突变文库的随机突变率达2.3%;改组后重组质粒的酶切结果表明,在随机选择的10个菌落所提质粒中,有6个含BPI_(600),表明构建了重组质粒pYD1-shuffled BPI_(600);在5个阳性质粒中,有4个重组质粒的BPI_(23)编码序列分别发生了6、9、11和14个碱基突变;1个不仅有10个碱基突变,还存在1个碱基的缺失。氨基酸比对表明,有2个质粒(分别有6和14个碱基突变)具有正确的读码框,能够翻译完整的蛋白质,各有4或14个氨基酸突变。3个质粒因含终止密码子而不能表达完整目的蛋白。结论成功构建pYD1-shuffled BPI_(600)重组质粒,获得库容量为2×105的突变文库,为高内毒素亲和力突变体的筛选奠定了基础。(本文来源于《首都医科大学学报》期刊2017年06期）
付茂强[2]（2014）在《转基因小麦表达Harpin蛋白功能片段Hpa1诱导对麦长管蚜的韧皮部防卫反应》一文中研究指出小麦作物在全世界各地广为栽培,全球约有四十余个国家以小麦作为主要的粮食作物。随着世界经济以及人口的快速增长,对小麦的需求量也愈加增多,但一直以来,由于不良的环境条件以及病虫害等各种因素严重影响了小麦的品质与产量。其中小麦上的蚜虫属于小麦作物上的重要虫害,不仅可以侵袭小麦叶片、茎秆、嫩穗等部位,影响小麦的生长以及产量,同时还可传播多种病毒病,对小麦造成严重的损失。根据本实验室的研究发现,harpin蛋白可以诱导植物过敏性细胞死亡以及对相关病虫害的抗性,还可以增加作物的产量。本实验室前人获得了Harpin的一个功能片段Hpal10-42,并且构建了相关载体,获得了转Hpal10-42基因的小麦,本文则进一步研究了转Hpal10-42基因小麦对抗麦长管蚜的影响以及所涉及的相关信号通路的调控机制。1.转Hpal10-42小麦对麦长管蚜的韧皮部防卫反应本实验中,我们获得了六个转Hpal10-42基因小麦株系,并对其相关的韧皮部防卫反应进行了研究。实验研究结果表明,Hpal1042在小麦植株中的表达,可以增加小麦植株对蚜虫的趋避率以及降低蚜虫的繁殖率。我们同时测定了编码韧皮部凝集素基因PP2-A以及编码葡聚糖合酶基因GSL的表达情况,我们发现当麦长管蚜取食小麦叶片时,在转基因小麦系中PP2-A以及叁个GSL (GSL2, GSLIO, GSL12)基因的表达量明显提高。我们也对麦长管蚜取食活动以及胼胝质的沉积情况进行了分析,在六小时的EPG监测中,麦长管蚜在转基因小麦株系中韧皮部取食时间缩短,同时胼胝质在筛板的沉积量增加,阻止了蚜虫的进一步刺探与取食。当对小麦生长性状以及麦粒特征进行分析时发现,Hpallo-42的表达在促进小麦植株的生长同时可以促进植株的分蘖,增加作物的产量。2.乙烯信号通路在转Hpa110-42小麦对麦长管蚜的韧皮部防卫反应中起重要作用HrpNEa是一种多功能激发子,可以激活不同的信号通路,在调控植株生长,抗病虫以及抗干旱等过程中发挥着重要的作用。本次研究内容发现,Hpa1l0-42在小麦株系中的表达可以激活乙烯信号通路,说明了乙烯信号传导因子EIN2可能参与了转基因小麦韧皮部防卫反应的调控作用。通过研究发现,转基因小麦株系中EIN2基因的表达量相对较高,而用乙烯抑制剂AgN03或者1-MCP处理以后,PP2-A以及GSL10基因的表达量出现了明显的下降,胼胝质的沉积率出现了明显的下降,麦长管蚜在转基因系韧皮部取食时间显着增加,同时蚜虫的侵袭量也有大幅度提升,这进一步说明了乙烯信号通路参与了转基因小麦系韧皮部防卫反应的调控。我们在这里对小麦的根系总长度以及分支数目进行了统计,发现了当有少量蚜虫侵袭时,转基因小麦根系总长度下降以及分支数目变少,乙烯信号通路也可能参与了这一调控作用。本文创新点首次利用本实验室前人获得的转Hpal10-42基因的小麦,对其抗麦长管蚜的韧皮部防卫机制进行了研究,为优化小麦品系以及获得高产作物提供了相关的理论以及现实依据。(本文来源于《南京农业大学》期刊2014-06-01）
李小杰,王小冰,王德福,田珊,董汉松[3]（2014）在《表达Harpin蛋白质Hpa1功能片段的转基因小麦对赤霉病的抗性(英文)》一文中研究指出来自水稻黄单胞菌的harpin蛋白质Hpa1有促进植物生长、诱导植物抗病性的功能,Hpa1序列10~42氨基酸片段(Hpa1_(10-42))的活性比全长分子高1.3~7.5倍。为研究Hpa1_(10-42)在转基因小麦体内表达以后对赤霉病的影响和评价转基因小麦抗病水平与应用潜力,对6个小麦转基因系进行了测定。结果显示,Hpa1_(10-42)在转基因系T_3~T_5代呈现稳定表达,用禾谷镰刀菌一个分离物进行接种以后,转基因系发生赤霉病的程度较非转基因小麦显着降低,且转基因系T_3~T_5代赤霉病降低的趋势一致。另外,转基因系小麦病害减轻的程度,与在非转基因小麦上使用杀菌剂的效果相当,表明Hpa1_(10-42)转基因表达对小麦赤霉病有防治作用。(本文来源于《植物保护学报》期刊2014年01期）
张建伟,王海龙,殷国荣,刘转转,刘晋平[4]（2009）在《弓形虫SAG1基因功能片段的克隆、表达与抗原性分析》一文中研究指出目的重组、表达与纯化弓形虫速殖子主要表面抗原1(SAG1)具有生物活性的功能多肽,分析其抗原性。方法根据SAG1的基因序列设计引物,截除其前端的信号肽和后端的疏水区,只扩增650bp的功能区域;将该片段重组入带有His标签的pET-30a(+)质粒,用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导其在E.coli中表达,调整诱导表达时间、IPTG浓度等条件,高效稳定地表达出目的蛋白;镍柱亲和层析法纯化目的蛋白,Western-blot检验纯化后蛋白的抗原性。结果成功构建pET-30a(+)/SAG1重组质粒,使其在E.coli中高效稳定地可溶性表达,并确定出在0.5mmol/LIPTG浓度下诱导12h为最佳表达条件,Western-blot显示纯化后的蛋白具有良好的抗原性。结论获得了可溶性的弓形虫SAG1基因功能片段表达的产物,其具有良好的抗原性。(本文来源于《山西医科大学学报》期刊2009年06期）
马现永,毕英佐,曹永长,施振旦,马静云[5]（2004）在《肌肉生长抑制素基因功能片段在大肠杆菌中的表达及多克隆抗体的制备(英文)》一文中研究指出肌肉生长抑制素是转化生长因子-β-超家族的一员,在调节肌肉生长发育方面具有重要作用。在本研究中,通过PCR技术扩增出猪肌肉生长抑制素基因的末端部分第769-1128碱基段(编码第267-375氨基酸),将其连接到pET-32a vector中,然后转化大肠杆菌菌株,通过PCR技术鉴定出阳性菌落后,在培养基中加入1mM异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达肌肉生长抑制素融合蛋白,诱导表达结束后,收获菌体,进行SDS-PAGE和Western Blot检测,结果与预期的相符。将表达的蛋白进行纯化后免疫兔子,制备多克隆抗体,结果表明蛋白表达和抗体制备成功。(本文来源于《全国首届动物生物技术学术研讨会论文集》期刊2004-05-01）
范红结,陆承平,唐家琪[6]（2004）在《猪链球菌2型mrp基因免疫功能片段的克隆、表达及动物试验》一文中研究指出根据猪链球菌 2型 (Streptococcussuistype 2 )国外分离株的溶菌酶释放蛋白 (Muramidase releasedprotein ,MRP)的基因序列 ,设计并合成一对引物 ,利用PCR技术扩增了江苏分离株的开放阅读框 2 98～ 82 7bp间 5 2 9bp的基因片段 ,并定向克隆至pET 32a(+)表达载体中。重组质粒经限制性酶切鉴定和测序 ,转化至大肠杆菌BL2 1 ,经IPTG诱导 ,可表达分子量约 4 2kD的蛋白。经过镍亲和层析柱层析 ,获得纯化的重组蛋白。以重组蛋白免疫Balb c小鼠 ,以 5LD50 猪链球菌强毒株攻击后小鼠的相对存活率达 6 2 5 %。证实所表达的MRP片段为重要的保护性抗原(本文来源于《微生物学报》期刊2004年01期）
黄俊[7]（2003）在《BMPR2基因启动子具有启动功能片段的研究》一文中研究指出背景：BMPs是TGF-β超家族成员。TGF-β家族由一组结构相关的二聚体蛋白组成。生长因子TGF-β、BMPs和相关的因子是胚胎发育，骨骼和器官形成的重要细胞因子。BMPR-Ⅱ基因编码一个跨膜Ser/Thr激酶受体，是BMP信号转导系统中重要的成员。BMPR-Ⅱ基因对家族性原发性肺动脉高血压病症的产生、骨的形成与再生、哺乳动物的早期发育、肿瘤的转移与恶化及早期神经系统的分化等具有重要作用。 BMPR2蛋白在正常细胞中的表达是受到控制，其中启动子调控是重要的一类调控。分离具有启动功能的BMPR Ⅱ基因上游片段是研究启动子调控的基础。 目的：通过将BHPR-2基因启动子上大小不同片段克隆到报道基因上游，观测这些片段是否可以在人MG-63细胞株中启动报道基因，从而研究BMPR-2基因启动子上具有转录功能的片段。 方法：PCR扩增大小不同的启动子片段，将这些片段分别克隆到含有绿色荧光蛋白基因的质粒载体上，转染到MG-63细胞株中，观测这些启动子的片段能否启动下游报道基因的表达。 结果：对靠近CDS、大约3kb的BMPR2 promoter序列进行生物信息学分析，发现GGC重复和一些顺式作用因子如Sp1、MZF1、AML-1a、c-Ets-、NRF-2、CdxA、CREB和TATA box。在启动功能片段的分离实验中，S2片段在构建的质粒pEGFP-S2中启动表达绿色荧光蛋白基因，而S1和S3片段在质粒pEGFP-S1和pEGFP-S3在MG-63细胞中没有观测到启动绿色荧光蛋白基因的表达。 结论：实验结果表明S2片段(4450-5448bp)具有转录起始功能，而S1片段(4115-5448bp)和S3片段(4757-5448bp)不具有转录起始功能。理论分析和实验证明启动子的一个关键转录序列可能处于TATA box和含有GGC重复的序列附近区域。(本文来源于《暨南大学》期刊2003-04-15）
顾海东,王以光,徐小敏,魏贤英,冯明华[8]（1996）在《利用强启动功能片段提高麦迪霉素4"-羟基丙酰化酶基因的表达》一文中研究指出利用PCR技术将本室克隆到的强启动功能片段取代麦迪霉素丙酰化酶基因(mpt)的启动子或与mpt基因自身启动子串连,获得含mPt重组质粒pCHFPE3和pCHFPE2。用含有这两个质粒的Streptomyces lividans TK24对螺旋霉素进行微生物转化,结果表明,与含有原启动子的mpt.S.lividans TK24(p.WFPE)相比,丙酰螺旋霉素的组分比例分别提高了89.02％和58.53％。含重组质粒pCHFPE2的螺旋霉素产生菌S.spiramyceticus发酵产物中丙酰螺旋霉素的组分也有较大辐度的提高。说明利用该强启动功能片段可以提高麦迪霉素丙酰化酶基因的表达。(本文来源于《生物工程学报》期刊1996年03期）
郭奕斌[9]（1995）在《Rb基因功能片段重组质粒的构建》一文中研究指出Ｒｂ基因功能片段重组质粒的构建郭奕斌（中山医科大学医学遗传学教研室；广州，５１００８９）主题词基因，抑制，肿瘤；视网膜神经母细胞瘤；质粒；基因表达；克隆，分子中图号Ｑ３３；７８视网膜母细胞瘤基因（Ｒｂ）是首先被公认的肿瘤抑制基因。它与视网膜母细胞瘤、...(本文来源于《中山医科大学学报》期刊1995年04期）
任力强,杨晓光,王秀琴,吴[10]（1995）在《RA538基因功能片段的克隆和对HL－60细胞的作用》一文中研究指出ＲＡ５３８基因是用维甲酸在体外迫使食管癌细胞系发生终未分化，建立分化前后的ｃＤＮＡ文库，进行递减杂交后分离所得。转移到食管癌细胞后可抑制其增殖，引起细胞脱落和死亡。测定和分析ＲＡ５３８ｃＤＮＡ序列，靠近５＇端有一个可能的蛋白编码区。为研究ＲＡ５３８基因的功能，用多聚酶链反应技术扩增分离了这个可能编码区ＤＮＡ序列，借逆转录病毒载体转入白血病细胞，发现对ＨＬ－６０细胞的生长有明显的抑制作用，提示它在肿瘤基因治疗中有潜在应用价值。(本文来源于《中华血液学杂志》期刊1995年05期）
功能基因亚功能片段论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
小麦作物在全世界各地广为栽培,全球约有四十余个国家以小麦作为主要的粮食作物。随着世界经济以及人口的快速增长,对小麦的需求量也愈加增多,但一直以来,由于不良的环境条件以及病虫害等各种因素严重影响了小麦的品质与产量。其中小麦上的蚜虫属于小麦作物上的重要虫害,不仅可以侵袭小麦叶片、茎秆、嫩穗等部位,影响小麦的生长以及产量,同时还可传播多种病毒病,对小麦造成严重的损失。根据本实验室的研究发现,harpin蛋白可以诱导植物过敏性细胞死亡以及对相关病虫害的抗性,还可以增加作物的产量。本实验室前人获得了Harpin的一个功能片段Hpal10-42,并且构建了相关载体,获得了转Hpal10-42基因的小麦,本文则进一步研究了转Hpal10-42基因小麦对抗麦长管蚜的影响以及所涉及的相关信号通路的调控机制。1.转Hpal10-42小麦对麦长管蚜的韧皮部防卫反应本实验中,我们获得了六个转Hpal10-42基因小麦株系,并对其相关的韧皮部防卫反应进行了研究。实验研究结果表明,Hpal1042在小麦植株中的表达,可以增加小麦植株对蚜虫的趋避率以及降低蚜虫的繁殖率。我们同时测定了编码韧皮部凝集素基因PP2-A以及编码葡聚糖合酶基因GSL的表达情况,我们发现当麦长管蚜取食小麦叶片时,在转基因小麦系中PP2-A以及叁个GSL (GSL2, GSLIO, GSL12)基因的表达量明显提高。我们也对麦长管蚜取食活动以及胼胝质的沉积情况进行了分析,在六小时的EPG监测中,麦长管蚜在转基因小麦株系中韧皮部取食时间缩短,同时胼胝质在筛板的沉积量增加,阻止了蚜虫的进一步刺探与取食。当对小麦生长性状以及麦粒特征进行分析时发现,Hpallo-42的表达在促进小麦植株的生长同时可以促进植株的分蘖,增加作物的产量。2.乙烯信号通路在转Hpa110-42小麦对麦长管蚜的韧皮部防卫反应中起重要作用HrpNEa是一种多功能激发子,可以激活不同的信号通路,在调控植株生长,抗病虫以及抗干旱等过程中发挥着重要的作用。本次研究内容发现,Hpa1l0-42在小麦株系中的表达可以激活乙烯信号通路,说明了乙烯信号传导因子EIN2可能参与了转基因小麦韧皮部防卫反应的调控作用。通过研究发现,转基因小麦株系中EIN2基因的表达量相对较高,而用乙烯抑制剂AgN03或者1-MCP处理以后,PP2-A以及GSL10基因的表达量出现了明显的下降,胼胝质的沉积率出现了明显的下降,麦长管蚜在转基因系韧皮部取食时间显着增加,同时蚜虫的侵袭量也有大幅度提升,这进一步说明了乙烯信号通路参与了转基因小麦系韧皮部防卫反应的调控。我们在这里对小麦的根系总长度以及分支数目进行了统计,发现了当有少量蚜虫侵袭时,转基因小麦根系总长度下降以及分支数目变少,乙烯信号通路也可能参与了这一调控作用。本文创新点首次利用本实验室前人获得的转Hpal10-42基因的小麦,对其抗麦长管蚜的韧皮部防卫机制进行了研究,为优化小麦品系以及获得高产作物提供了相关的理论以及现实依据。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
功能基因亚功能片段论文参考文献
[1].李晶琴,孔庆利,安云庆.人杀菌/渗透增强蛋白N端功能片段基因突变文库的构建和鉴定[J].首都医科大学学报.2017
[2].付茂强.转基因小麦表达Harpin蛋白功能片段Hpa1诱导对麦长管蚜的韧皮部防卫反应[D].南京农业大学.2014
[3].李小杰,王小冰,王德福,田珊,董汉松.表达Harpin蛋白质Hpa1功能片段的转基因小麦对赤霉病的抗性(英文)[J].植物保护学报.2014
[4].张建伟,王海龙,殷国荣,刘转转,刘晋平.弓形虫SAG1基因功能片段的克隆、表达与抗原性分析[J].山西医科大学学报.2009
[5].马现永,毕英佐,曹永长,施振旦,马静云.肌肉生长抑制素基因功能片段在大肠杆菌中的表达及多克隆抗体的制备(英文)[C].全国首届动物生物技术学术研讨会论文集.2004
[6].范红结,陆承平,唐家琪.猪链球菌2型mrp基因免疫功能片段的克隆、表达及动物试验[J].微生物学报.2004
[7].黄俊.BMPR2基因启动子具有启动功能片段的研究[D].暨南大学.2003
[8].顾海东,王以光,徐小敏,魏贤英,冯明华.利用强启动功能片段提高麦迪霉素4"-羟基丙酰化酶基因的表达[J].生物工程学报.1996
[9].郭奕斌.Rb基因功能片段重组质粒的构建[J].中山医科大学学报.1995
[10].任力强,杨晓光,王秀琴,吴.RA538基因功能片段的克隆和对HL－60细胞的作用[J].中华血液学杂志.1995