导读:本文包含了细胞传代论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:细胞,干细胞,稳定性,脂肪,转染,罗非鱼,渗透压。
细胞传代论文文献综述
孙莉,纵艳艳,魏建峰[1]（2020）在《两种传代方法影响人胚胎干细胞转染效率的比较》一文中研究指出背景:现有方法将外源分子如DNA导入到人胚胎干细胞用于科学研究的效率普遍较低,如何优化现有条件,提高转染效率显得尤为重要。目的:比较两种不同的传代方法对人胚胎干细胞系H9转染效率的影响,优化胚胎干细胞转染条件。方法:人胚胎干细胞系H9分别采用小克隆传代法和单细胞传代法进行传代,传代后继续培养细胞48h,用Lipofectamine 3000转染p AdTrack-AKT1荧光质粒2 d后,荧光显微镜下观察荧光质粒的表达,流式细胞仪检测人胚胎干细胞的转染效率;RT-qPCR和Westernblot分别检测转染后AKT1在mRNA和蛋白质水平的表达。结果与结论:①荧光显微镜下观察发现单细胞传代组表达荧光质粒的细胞数量更多,流式细胞仪检测单细胞传代法的转染效率[(47.18±2.00)%]高于小克隆传代法的转染效率[(19.52±0.86)%],差异有显着性意义(P<0.01);②单细胞传代组转染后AKT1 mRNA和蛋白的表达均高于小克隆传代组,差异有显着性意义(P <0.01);③结果表明,采用单细胞传代法,增加细胞与转染试剂脂质体的接触面积可提高人胚胎干细胞的转染效率。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2020年01期）
亢和平,段剑飞,郭建军,李春艳,程俊峰[2]（2019）在《高渗透压对BHK-21细胞悬浮培养连续传代的影响》一文中研究指出在BHK-21细胞悬浮培养过程中,溶液渗透压作为关键指标直接影响着细胞的培养效果。本试验拟通过NaCl提高营养液渗透压,观察细胞的连续传代效果。试验结果显示,溶液渗透压从330 mOsm/Kg·H2O提高到360 mOsm/Kg·H_2O左右时,细胞在反应器内第1代表现不明显,从第2代开始细胞活率明显降低、细胞结团率明显升高和细胞倍增时间明显延长。(本文来源于《当代畜禽养殖业》期刊2019年09期）
张伊丽,刘照平,陆敏依,蔡明勇,吴根鹏[3]（2019）在《CO_2分压对贴壁细胞MRC-5连续传代培养的影响》一文中研究指出研究培养过程中CO_2的使用和pH稳定性对MRC-5细胞增殖、传代培养及产毒水平的影响。采用不同浓度的NaHCO_3调节细胞培养液pH值,结合CO_2使用,监测细胞培养过程中pH变化情况,以及在连续传代过程中的细胞形态和增殖情况。接种水痘-带状疱疹病毒比较不同状态下细胞的产毒能力。采用碳酸氢盐缓冲体系时,无CO_2分压的封闭培养组细胞培养液pH波动较大,在传代培养中观察到细胞形态较差,细胞状态下滑快;细胞连续传代至35-37代;细胞在31代平均产毒水平4.64Lg PFU/mL。有CO_2分压的开放组细胞培养液pH相对平稳,在传代培养中细胞活率维持80%以上,细胞状态下滑趋势平缓,可连续传代至41代;31代细胞平均产毒水平4.83 Lg PFU/mL。采用碳酸氢盐缓冲体系的细胞培养液匹配合适的CO_2分压有助于细胞状态的优化提升。(本文来源于《生物技术通报》期刊2019年10期）
黄玉圣,吕辰菲,庄景燊,徐平,涂晨[4]（2019）在《细胞传代对SD大鼠骨髓间充质干细胞衰老的影响》一文中研究指出目的探究体外传代培养对SD大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)衰老的影响。方法全骨髓贴壁法分离培养大鼠BMSCs,待细胞汇合率达80%～90%时,进行消化传代及纯化培养。对不同代数细胞,进行倒置显微镜下观察细胞形态学及生长特性,绘制1～7 d生长曲线,流式细胞仪检测细胞表面抗原标志物(CD29、CD45和CD90)和细胞周期,β-半乳糖苷酶染色并记录阳性细胞数,Western印迹法检测衰老相关蛋白P53和P21表达情况。结果 SD大鼠BMSCs的CD29、CD90高表达(>95%),CD45低表达(<5%),细胞周期中G0/G1期占87.37%;相较于P1～5代细胞,P7～9代细胞增殖能力明显下降,β-半乳糖苷酶染色阳性细胞明显增多;随着传代次数的增加,BMSCs的P53、P21表达增高。结论体外培养传代次数的增加可导致SD大鼠BMSCs衰老。(本文来源于《中国老年学杂志》期刊2019年09期）
窦晓霞,马桂兰,乔自林,王家敏,李倬[5]（2019）在《MDCK细胞连续传代培养的生长特性研究》一文中研究指出目的:确定引进的MDCK细胞冻存保种效果。方法:复苏从ATCC引进保种冻存的MDCK细胞(P55),连续传代至P66,分别在P57、P59、P62和P66测定细胞生长曲线,计算细胞最大增殖浓度和倍增时间进行比较。结果:保种的细胞复苏活力达95.3%,最大增殖浓度分别为107.6×104、105.5×104、97×104和102.4×104(个/ml),倍增时间分别为15.8、15、15.2和15.3(h),结论:引进的MDCK细胞保种冻存后复苏活力高,能稳定连续传代培养,可用于相关研究。(本文来源于《甘肃畜牧兽医》期刊2019年04期）
胡万盛[6]（2019）在《叁维培养高传代脂肪干细胞与内皮集落形成细胞治疗慢性放射性溃疡的实验研究》一文中研究指出背景和目的:干细胞是体内一种可以自我增殖、多向分化以及具有强大的旁分泌功能的细胞。而脂肪干细胞因其大量体内脂肪组织来源,其强大的自我增殖及旁分泌能力可应用于临床,治疗多种疾病,例如糖尿病足的难愈性创面[1]。但干细胞经过体外的培养扩增过程中,细胞会出现衰老,形态会发生改变,其增殖分化潜能会明显的降低,并且细胞更容受到外界的环境影响而死亡[2]。这无疑大大影响了细胞的治疗效果。对于提升干细胞治疗潜能的方法有很多,例如人工支架材料[3]、异种生物材料[4]等。这些方法都不可避免的引入了外来材料,或者加入可能对机体有害的化学试剂[5]。本身存在相对更高的治疗成本,更是引入了相对潜在的危险因素,可能对机体造成损害。根据研究团队成员之前的实验发现可以知道,本身存在于细胞外基质中的成分透明质酸可以用于叁维的细胞培养[6]。其具有非常安全的生物性能。通过叁维培养微球的方式可以增加干细胞的干细胞潜能,细胞的干细胞标志物明显发生上调,细胞存活率大大增加[7],其增殖分化旁分泌功能得到明显提升。同时来自于外周血中的内皮细胞集落形成细胞,其具有非常强的自我增殖潜能。其中高增值潜能的内皮细胞集落形成细胞单个细胞具有集落形成能力。其与脂肪干细胞存在相互作用。一方面可以增加其干细胞潜能。另一方面可以增加脂肪干细胞的存活[8]。本实验的目的在于通过利用透明质酸叁维培养经过反复传代后的衰老脂肪干细胞和内皮细胞集落形成细胞构建叁维空间结构,从而增加脂肪干细胞的干细胞潜能,减少其在体内过快死亡,增加对疾病的治疗效果。实验方法:1、获取经过反复传代的衰老脂肪干细胞常规用直径3.5mm多侧孔吸脂针对健康女性病人腹部脂肪进行抽脂。将获取的脂肪注入血袋中,在冰水混合物中静置直至血水与上层脂肪明显分层。放出下层血水,留置上层脂肪分装于50ml离心管至一半。加入25ml磷酸缓冲盐溶液到离心管中,充分摇匀后离心机1200g离心3分钟。弃去下层液体,保留中层的脂肪,倒除上层过多的油滴。配置0.075%胶原酶I溶液消化脂肪组织,放置在37度水浴摇床30分钟。用全培中和胶原酶I,离心后去上层油滴和未消化完的脂肪组织,取下层细胞团接种于培养皿上。反复培养至第八代(即为是衰老脂肪干细胞)。2、获取内皮细胞集落形成细胞抽取健康女性外周血20毫升,1:1混合磷酸盐溶液后加入淋巴细胞分离液。低速离心30分钟。取中间白色云雾状细胞层,即血液中的单个核细胞。接种于胶原I铺板的培养皿中直至细胞集落出现。细胞个数约为2000个时传代。3、本课题实验选取的实验动物为裸鼠,自制小型圆柱形铅柱,中间留一缝隙揪出裸鼠皮肤,透明胶带固定。麻醉裸鼠后固定在放射源下,辐照15格雷。静待一个月使裸鼠皮肤发生慢性纤维化,此时用剪出剪出一个7mm的全层皮肤创面。用叁维培养后的细胞与对照组治疗创面。对照组划分为:第八代脂肪干细胞、叁维培养第八代脂肪干细胞和内皮细胞集落形成细胞、内皮细胞集落形成细胞。4、实验结果叁维培养内皮细胞集落形成细胞和脂肪干细胞的组出现类似于血管结构的空间结构,尝试单纯用第八代的脂肪干细胞叁维培养存在大量无法形成空间结构的单个细胞,其漂浮于透明质酸中发生死亡。随着创面治疗时间的推移,所有的实验组和对照组创面都趋于愈合。然而,叁维培养内皮细胞集落形成细胞和脂肪干细胞的组治疗效果最佳,其余叁组之间无明显差异。叁维培养组能更好的组织中存活下来,并且参与组成血管结构,而单纯脂肪干细胞组在宿主体内大量被代谢掉仅少量残存在间质中,也未能参与机体组织结构组成。组织的再生情况也明显不如叁维培养组。(本文来源于《南方医科大学》期刊2019-04-18）
王文广,匡德宣,陆彩霞,罕园园,李娜[7]（2019）在《树鼩肺成纤维细胞的分离、鉴定和传代培养》一文中研究指出目的建立适用于树鼩肺成纤维细胞的分离、鉴定和传代培养方法。方法分别采用组织块贴壁培养法和胰酶消化法,分离培养新生树鼩肺成纤维细胞,通过倒置显微镜观察细胞生长情况,用波形蛋白(Vimentin)对分离的成纤维细胞进行免疫荧光鉴定;传代培养并开展冻存复苏实验,采用MTS法绘制细胞生长曲线,以人胚肺二倍体成纤维细胞(KMB-17)作对照。结果通过组织块贴壁培养法和胰酶消化法均可获取树鼩肺成纤维细胞,细胞主要呈现梭形,波形蛋白免疫荧光鉴定普遍呈阳性,与KMB-17一致。树鼩肺成纤维细胞可连续传代4～5次,经冻存复苏后细胞仍能保持活力,以5×10~4细胞/mL的密度传代,细胞可在3 d左右进入对数生长期。结论组织块贴壁培养法和胰酶消化法均可有效获取树鼩的肺成纤维细胞,可为肺部相关疾病的体外研究提供实验材料。(本文来源于《实验动物与比较医学》期刊2019年02期）
温加静[8]（2019）在《罗非鱼前脂肪细胞传代培养模型的建立及诱导分化》一文中研究指出本实验以尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)为实验对象,探索罗非鱼前脂肪细胞的诱导分化及传代培养方法。本论文首先设计不同的原代培养条件:培养时间、接种密度、换液方式,探索最佳的首次传代培养条件。实现传代后,通过比较不同血清、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、谷氨酰胺(Gln)对罗非鱼前脂肪细胞传代培养的影响,探索罗非鱼前脂肪细胞的新传代培养基,并对细胞进行了冻存、复苏,从而建立了罗非鱼前脂肪细胞传代培养模型。之后,本论文分析了传代培养的罗非鱼前脂肪细胞及在其他不同离体培养条件下(24小时离体培养;原代培养汇合期;原代诱导分化)的脂肪细胞与活体中脂肪组织的脂肪酸组成差异。研究发现,细胞离体培养时间越长,脂肪酸组成成分越少、越简单,但C16:0、C18:0、C18:1n-9和C18:2这4种脂肪酸一直存在且保持较高比例。罗非鱼脂肪组织里,不饱和脂肪酸比例显着高于饱和脂肪酸,其中,单不饱和脂肪酸含量最高。然而,体外培养的脂肪细胞里,饱和脂肪酸所占比重都高于不饱和脂肪酸。最后,本文探索了传代培养的罗非鱼前脂肪细胞的诱导分化方法。本文设计了四种诱导分化培养基:(1)培养基1:15%FBS+10μg/ml胰岛素+DMEM/F12;(2)培养基2:培养基1+1.0mmol/L DEX+0.5mmol/L IBMX;(3)培养基3:培养基2+0.4mmol/L吲哚美辛;(4)培养基4:培养基2+2μg/ml鳕鱼肝油脂肪酸(甲基酯)。12天后,采用油红染色比较观察细胞的生长状况,结果发现培养基4对细胞的诱导结果最佳。本论文工作建立了较为系统的罗非鱼前脂肪细胞的传代培养和分化诱导方法,并对体外培养的脂肪细胞与脂肪组织间的脂肪酸组成有了新的认识,为进一步开展罗非鱼脂代谢提供了可靠的细胞研究平台。(本文来源于《华东师范大学》期刊2019-04-01）
寸怡娜,宋绍辉,周健,刘泽,郭琦[9]（2019）在《乙型流感病毒Vero细胞高产适应株传代稳定性研究》一文中研究指出由于能快速、大规模生产以应对随时可能暴发的流感,细胞流感疫苗已成为当今流感疫苗的主要研发方向,而选育流感病毒Vero细胞高产适应株对于细胞流感疫苗的研发至关重要。本文旨在研究流感病毒Vero细胞高产适应株BX-51BVa(By)在Vero细胞上的传代稳定性,以证明该毒株是否可以作为制备Vero细胞流感疫苗的种子批。以Vero细胞高产株BX-51BVa(By)在Vero细胞上连续传代50次,测定其血凝效价和感染性滴度,并通过型别鉴定及基因序列测定考察传代过程中生物学性状的稳定性。结果显示BX-51BVa在Vero细胞连续传代50次,血凝效价维持在256～512,感染性滴度稳定在1×107TCID50/mL左右,型别未发生改变,HA和NA氨基酸序列与流行株BX-51B相比没有发生变化。本研究发现B型流感病毒重配株能够稳定地在Vero细胞连续传代,可以作为制备Vero细胞流感疫苗的种子批。(本文来源于《病毒学报》期刊2019年02期）
张权,张亚奇,饶巍,周端鹏,韩兵[10]（2019）在《长期传代培养对人脐带间充质干细胞生物学特性的影响》一文中研究指出该课题研究长期体外传代培养对人脐带间充质干细胞重要生物学属性的影响。采用组织块法分离人脐带间充质干细胞,体外反复传代培养后比较第5、10、20代细胞的主要生物学属性:采用细胞计数法与流式细胞仪检测不同代次细胞增殖活性和表面免疫标志物;染色体常规核型分析和微阵列分析检测其基因稳定性;成脂、成骨诱导分化检测其多向分化潜能;定量RT-PCR检测端粒酶反转录基因hTERT的表达; SA-β-gal活性确定细胞老化状态。第5、10、20代脐带间充质干细胞呈现相同的增殖曲线,各代次干细胞的增殖速率无显着性差异。不同培养代次的脐带间充质干细胞表面均呈现CD105、CD90、CD44、CD73高表达, CD19、CD34、CD45及HLA-DR不表达或低表达。基因稳定性分析证实叁个代次干细胞均为正常二倍体核型,染色体基因组未发生基因拷贝数缺失、重复和大片段纯合子现象。成脂和成骨分化潜能以及hTERT表达均未见显着性差异。SA-β-gal活性检测显示,随培养代次的增加,脐带间充质干细胞开始呈现衰老征象,尤以第20代明显。体外反复传代长期培养对人脐带间充质干细胞的基本生物学属性、基因稳定性及其多向分化潜能均无显着性影响。过度长期培养有可能导致干细胞老化,活性降低。(本文来源于《中国细胞生物学学报》期刊2019年01期）
细胞传代论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
在BHK-21细胞悬浮培养过程中,溶液渗透压作为关键指标直接影响着细胞的培养效果。本试验拟通过NaCl提高营养液渗透压,观察细胞的连续传代效果。试验结果显示,溶液渗透压从330 mOsm/Kg·H2O提高到360 mOsm/Kg·H_2O左右时,细胞在反应器内第1代表现不明显,从第2代开始细胞活率明显降低、细胞结团率明显升高和细胞倍增时间明显延长。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
细胞传代论文参考文献
[1].孙莉,纵艳艳,魏建峰.两种传代方法影响人胚胎干细胞转染效率的比较[J].中国组织工程研究.2020
[2].亢和平,段剑飞,郭建军,李春艳,程俊峰.高渗透压对BHK-21细胞悬浮培养连续传代的影响[J].当代畜禽养殖业.2019
[3].张伊丽,刘照平,陆敏依,蔡明勇,吴根鹏.CO_2分压对贴壁细胞MRC-5连续传代培养的影响[J].生物技术通报.2019
[4].黄玉圣,吕辰菲,庄景燊,徐平,涂晨.细胞传代对SD大鼠骨髓间充质干细胞衰老的影响[J].中国老年学杂志.2019
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[8].温加静.罗非鱼前脂肪细胞传代培养模型的建立及诱导分化[D].华东师范大学.2019
[9].寸怡娜,宋绍辉,周健,刘泽,郭琦.乙型流感病毒Vero细胞高产适应株传代稳定性研究[J].病毒学报.2019
[10].张权,张亚奇,饶巍,周端鹏,韩兵.长期传代培养对人脐带间充质干细胞生物学特性的影响[J].中国细胞生物学学报.2019
论文知识图
