（桂林医学院研究生院广西桂林541000；桂林医学院附属医院广西桂林541001）
【摘要】目的：探究毛蕊异黄酮对大鼠脑缺血再灌注炎性损伤的保护作用机制。方法：将40只SD大鼠随机分为假手术组、缺血/再灌注组、毛蕊异黄酮5g/kg组、10g/kg组、20g/kg组。采用线栓法建立大鼠中动脉脑缺血再灌注模型。按动物神经行为学评分方法评价大鼠神经功能的缺陷程度，使用ImageJ软件计算脑梗死率，采用分光光度法对大鼠脑组织中的超氧化物歧化酶（SOD）活力和丙二醛(MDA)的含量进行测定。结果：缺血/再灌注组与假手术组相比，神经功能评分显著升高，脑梗塞面积显著增加。毛蕊异黄酮组大鼠神经功能评分和脑梗死率明显低于缺血/再灌注组，同时毛蕊异黄酮能显著降低大鼠脑组织中丙二醛（MDA）含量，增加超氧化物歧化酶（SOD）抗氧化酶的活力。结论：毛蕊异黄酮可通过抑制脑组织炎症和氧化应激反应，改善大鼠脑缺血再灌注损伤，具有显著的神经保护作用。
【关键词】毛蕊异黄酮；缺血再灌注；炎症反应；氧化应激
【中图分类号】R965【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2018）24-0220-02
缺血性脑梗死是具有较高的死亡率及致残率疾病，在临床中备受重视。脑缺血再灌注损伤是最主要的病理生理性改变，产生一些有害物质会损伤神经元，更有甚者会造成神经细胞的坏死和凋亡[1-3]。脑缺血再灌注后发生的氧化应激和炎症反应进一步加重了脑损伤。因此以脑缺血再灌注后炎症反应途径为靶点的治疗是一种正确可行的治疗方案。毛蕊异黄酮具有明显的植物雌激素特点，前期研究表明具有保护心脑血管和神经细胞，舒张血管平滑肌，激素样作用等[4]。为此，我们针对毛蕊异黄酮对脑缺血再灌注损伤的保护作用机制进行以下研究。
1.材料与方法
1.1材料
1.1.1主要药品、试剂及仪器毛蕊异黄酮(中国药品生物制品检定所提供)。丙二醛(MDA)测定试剂盒(生产批号：20140117)，超氧化物歧化酶（SOD）测定试剂盒(生产批号：20140109)。全自动生化仪。
1.1.2实验动物SD大鼠（SPF级）40只，由桂林医学院实验动物中心提供，合格证号：SCXK(桂)2013-0006。喂养环境：桂林医学院病理生理学实验室，分笼喂养，予以12h昼夜节律变化，室温控制在(22±1)℃，予以自由饮水进食。
1.2方法
1.2.1实验动物分组将40只SD大鼠随机分为假手术组(n=8)；缺血再灌注组(n=8)；毛蕊异黄酮组：毛蕊异黄酮5mg/kg组（n=8)，毛蕊异黄酮10mg/kg组（n=8），毛蕊异黄酮20mg/kg组（n=8)。毛蕊异黄酮组造模前14天予以腹腔注射给药，1次/天，造模后缺血2小时再灌注24小时后断头取脑，各组未达到规定时间点死亡的SD大鼠要从实验中剔除。
1.2.2大鼠脑缺血再灌注模型动物术前禁食12小时，自由饮水，采用线栓法[5]建立大鼠中动脉脑缺血再灌注模型。
1.2.3动物神经行为学评分将苏醒后的动物放回笼内，使其自由饮食。按改良的Bederson[10]评估并记录每组大鼠神经功能缺损评分。
1.2.4脑梗死率计算以矢状面切取2mm厚度的大脑切片，用磷酸盐缓冲液配制成1%的TTC染色液，将脑组织切片置染色液中，取出脑组织切片，并用ImageJ软件计算梗死面积。
1.2.5脑组织中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）活力测定分别采用TBA法、比色法测定脑组织中过氧化产物丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶（SOD）活性，以上操作均严格按试剂盒说明书进行。
2.结果
2.1毛蕊异黄酮对大鼠缺血再灌注损伤后神经评分的影响见表1。
缺血再灌注组与假手术组相比，意识障碍程度较重（P＜0.01），毛蕊异黄酮组与缺血再灌注组相比，意识障碍程度较轻（P＜0.01或P＜0.05）。
2.2毛蕊异黄酮对大鼠脑梗死面积的影响见表1。
缺血再灌注组与假手术组相比，大鼠脑梗死率较明显（P＜0.01），与缺血再灌注组相比，毛蕊异黄酮组能显著降低大鼠脑梗死率（P＜0.01或P＜0.05）。
3.讨论
脑缺血再灌注时，脑组织缺血、缺氧在得到缓解的同时产生的活性氧（ROS）与中风相关的脑损伤中起主要作用。由于脑组织中抗氧化酶的活性较低，因此缺血再灌注损伤产生的活性氧（ROS）非常容易致使脑组织受到氧化损伤，从而导致脑脂质、蛋白质和DNA的氧化损伤，导致脑功能障碍和细胞死亡。因为活性氧（ROS）可攻击神经细胞的不饱和脂肪酸，引发的脂质过氧化作用会产生大量的丙二醛（MDA），所以脑组织中的丙二醛（MDA）含量高低可间接反映神经细胞脂质过氧化反应的程度[6、7]。同时脑组织中的超氧化物歧化酶（SOD）是活性氧（ROS）的特殊底物诱导酶，能将脑缺血再灌注时产生的活性氧（ROS）歧化为H2O2和O2，所以脑组织中超氧化物歧化酶（SOD）活性的高低也可在一定程度上反映出机体氧自由基的清除能力[8]。
通过本研究发现，毛蕊异黄酮能够显著降低缺血再灌注损伤大鼠神经功能评分、降低脑梗死率，并显著抑制由缺血再灌注损伤诱导脑组织中的MDA含量的升高及增加SOD等抗氧化酶的活力。表明毛蕊异黄酮可通过降低氧自由基水平，负性调节脑组织氧化应激反应，从而改善大鼠脑缺血再灌注后的脑梗死率及神经功能缺损症状。
【参考文献】
[1]HeronM．Deaths:leadingcausesfor2010[J].NatlVitalStatＲep，2013，62(6):1-96．
[2]HerzJ，HagenSI，BergmullerE，etal.Exacerbationofis-chemicbraininjuryinhypercholesterolemicmiceisassoci-atedwithpronouncedchangesinperipheralandcerebralim-muneresponses[J].NeurobiolDis，2014，62:456-468．
[3]ChengCY，LeeYC.Anti-inflammatoryeffectsoftradi-tionalChinesemedicinesagainstischemicinjuryininvivomodelsofcerebralischemia[J].EvidBasedComplementAlternatMed，2016，2016:5739434．
[4]李辉，朱天民．心肌缺血再灌注损伤中医病因病机浅识[J].时珍国医国药，2012,23(2):434-435.
[5]何芳雁，韩春妮，李艳，等．制作线栓法大鼠脑缺血再灌注模型的要点及体会[J].实验动物科学，2013，30(4):46-8．
[6]SOANEL，LIDAIW，FISKUMG，etal.Sulforaphaneprotectsimmaturehippocampalneuronsagainstdeathcausedbyexposuretoheminortooxygenandglucosedeprivation[J].JNeurosciRes，2010，88（6）：1355-1363.
[7]张片红，何芳，陈莹莹，等.茶色素对脑缺血再灌注损伤大鼠一氧化氮合酶表达的影响[J].浙江预防医学，2011，23（8）：14-16，34.
[8]XUHY，CAIM，ZHANGXD.EffectoftheblockadeoftheIL-23-Th17-IL-17Apathwayonstreptozotocin-induceddiabeticretinopathyinrats[J].Graefe’sArchiveforClinicalandExperimentalOphthalmology,2015,253（9）：1485-1492.
基金项目：桂林市科学研究与技术开发计划项目(NO:20150206-1-5)；2017年度广西脑与认知神经外科学重点实验室开放课题（NO：GKLBCN-20170105-04）；2015广西急诊与医学救援人才小高地开放课题（GXJZ201506）。
通讯作者：王文波（1977.11-），男，广西桂林市人，副主任医师，硕士，神经肿瘤，神经外科，桂林医学院附属医院,邮箱：wwbgxgl@163.com.