交叉引物扩增法检测食品中大肠杆菌不耐热肠毒素的研究

论文摘要

产肠毒素性大肠杆菌（enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC）可引起严重食源性疾病,建立快速、准确的检测方法对保障食品安全和人类健康具有重要意义。对ETEC不耐热肠毒素（heat-labile enterotoxin,LT）基因保守序列设计交叉引物等温扩增（cross priming amplification,CPA）特异性引物,同时对反应温度、脱氧核糖核苷三磷酸（deoxyribonucleoside triphosphate,dNTPs）浓度、Bst-DNA聚合酶大片段浓度、Mg2+浓度、甜菜碱浓度和反应时间进行优化;选取6株大肠杆菌和其他8株近源菌对CPA法进行特异性和敏感性分析;将纯培养后的产肠毒素大肠杆菌菌液稀释后随机污染46份不含LT肠毒素的生猪肉样品以评价该方法的应用效果。结果表明,CPA的最优反应温度为62℃、dNTPs浓度为0.3 mol/L、Bst聚合酶浓度为8 U/管、Mg2+浓度为2.0 mmol/L、甜菜碱浓度为0.8 mol/L、反应时间为45 min;CPA方法检测产肠毒素大肠杆菌菌液的最低检出量为40 cfu/mL,为环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）方法的2倍,且特异性较高;46份人工污染生猪肉样品中共检测出阳性样品7份,CPA扩增结果与LAMP和荧光定量聚合酶链反应结果一致,检出率均为15.2%。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 刘文鑫,袁超文,张力国,冯瑜菲

关键词: 大肠杆菌,不耐热肠毒素,交叉引物等温扩增,快速检测

来源: 食品研究与开发 2019年09期

年度: 2019

分类: 工程科技Ⅰ辑

专业: 轻工业手工业

单位: 湛江中心人民医院,东北大学生命科学与健康学院,辽宁省重大动物疫情应急中心,广东医科大学附属医院

基金: 国家自然科学基金青年科学基金(31600739,31601165),广东省自然科学基金博士启动项目(2016A030310358),广东省医学科学技术研究基金项目(B2016011)

分类号: TS207.4

页码: 143-148

总页数: 6

文件大小: 1259K

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