导读:本文包含了内皮细胞分化因子论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:内皮,因子,细胞,血管,干细胞,生长因子,诱导。
内皮细胞分化因子论文文献综述
蒋星海,赵彪,吴凯,肖仁顺,王晓梅[1]（2018）在《血管内皮生长因子165、神经营养因子3、血管生成素1基因转染诱导骨髓间充质干细胞向神经元及血管内皮细胞分化》一文中研究指出背景:骨髓间充质干细胞是一种多功能间充质干细胞,具有多向分化潜能,可通过腺病毒转染等方法对其进行基因修饰,使其能够产生多种生长因子,如血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、神经营养因子3(neurotrophin 3,NT-3)、血管生成素1(angiopoietin 1,Ang-1)等,从而应用于组织工程研究中。目的:探讨VEGF165、NT-3、Ang-1基因转染大鼠骨髓间充质干细胞向神经元及血管内皮细胞诱导分化的可能性。方法:采用差速贴壁法分离培养骨髓间充质干细胞,进行流式细胞术和成骨、成脂诱导分化能力鉴定。以巨细胞病毒(CMV)作为启动子,构建2个腺病毒载体,其一为双顺反子载体,携带h VEGF165及Ang-1基因(Adv-Bic);其二为携带NT-3基因载体,即Adv NT-3。以不同感染复数值将Adv-Bic(绿色荧光)及Adv NT-3(红色荧光)同时转染大鼠骨髓间充质干细胞,转染2 d后根据荧光显微镜下绿色及红色荧光蛋白表达情况确定最佳感染复数值。将生长良好的第3代骨髓间充质干细胞分为2组,实验组以最适感染复数值转染Adv-Bic(无荧光标记)及Adv NT-3(无荧光标记);对照组以相同感染复数值转染空白对照病毒。两组分别于体外培养7 d后进行免疫荧光及q PCR检测。结果与结论:(1)间质干细胞表面分子CD29、CD44呈阳性表达,造血干细胞表面分子CD34、CD45呈阴性表达。骨髓间充质干细胞能够定向分化为成骨细胞及脂肪细胞;(2)病毒转染骨髓间充质干细胞48 h后荧光显微镜下观察有绿色及红色荧光蛋白表达,随着感染复数值增大荧光表达量逐渐增强,感染复数值为100时荧光表达最强烈;(3)免疫荧光及q PCR结果显示,实验组VEGF165、NT-3、Ang-1表达水平高于对照组,且血管内皮特异性标记物CD31、CD34表达水平高于对照组,神经元特异性标记物NSE、Nestin表达水平高于对照组;(4)结果提示,VEGF165、NT-3、Ang-1基因转染骨髓间充质干细胞,使其过表达VEGF165、NT-3、Ang-1生长因子,能够诱导骨髓间充质干细胞定向分化为神经元及血管内皮细胞。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2018年25期）
赖德芳[2]（2018）在《趋化因子SDF-1在脂肪间充质干细胞向血管内皮细胞分化过程中的作用及对次级毛乳头细胞的影响》一文中研究指出阿尔巴斯绒山羊所产山羊绒因其优异的品质被喻为“软黄金”,具有很高的经济价值。羊绒生长过程中毛囊的周期性变化带动着粗毛和绒毛的生长、脱落、再生。研究表明,当毛囊处于生长期时,由于毛囊中各种诱导因子表达的上调而导致其周围血管密度、体积增大。而血管的生成是一个趋化因子和内在因素共同调节的级联动态过程,其中基质细胞衍生因子-1(Stromal cell-derived factor-1,SDF-1)就是一种重要的趋化因子。已有实验证明SDF-1处理的脂肪间充质干细胞可以快速修复受损的伤口,表明其可能在血管网的形成和组织修复过程起关键作用。本实验在脂肪间充质干细胞(adipose derived stem cells,ADSCs)向血管内皮细胞(vessel endothelial cells,VECs)分化的诱导液中添加SDF-1趋化因子,观察其对诱导分化的影响及对血管生成(angiogenesis)的作用,并且探究诱导形成的血管内皮样细胞(vessel endothelial like cell,VECs-like)对次级毛乳头细胞(Secondary Hair Follicle-Dermal Papilla cell,SHF-DPC)生长状况的影响,以便为今后深入了解绒毛生长机制提供实验依据。一、诱导脂肪间充质干细胞向血管内皮细胞分化以ADSCs为实验材料,在诱导液中分别添加30ng/ml、50ng/ml、70ng/ml SDF-1向VECs进行诱导,分别于72h、21d对诱导形成的VECs-like进行检测发现:(1)诱导过程会触发细胞的死亡,并且死亡比例与诱导时间呈正相关性;细胞形态由梭形变为长纺锤形,细胞质颜色加深,核位置明显,但组间无明显差异。(2)对诱导72h后的VECs-like使用兔源假性血友病因子(von Willebrand factor,VWF)标记后,流式细胞仪检测荧光发现:各组诱导法均能成功,但50ng/ml SDF-1为最佳条件。(3)诱导72h的VECs-like以CD34、VWF、CXCR4为对象进行RT-q PCR检测发现:30ng/ml SDF-1最有利于VWF的表达,为对照组的1.45倍(p<0.05)。50ng/ml和70ng/ml SDF-1对CXCR4的表达促进作用明显,分别为对照组的40.85、12.96倍。CD34的表达在50ng/ml SDF-1时最高,为对照组的1.741倍(p<0.05)。(4)诱导至21d时,30ng/ml、50ng/ml SDF-1对VECs-like形成特有的管状样结构的促进作用明显;同时细胞形态变化显着,细胞间纹路明显;相比于诱导前,凋亡比例约为50%左右。(5)诱导21d后的VECs-like可观察到细胞间的丝状连接而呈现出的管腔样结构。二、诱导形成的血管内皮样细胞功能检测对诱导24h、72h后形成的VECs-like分别使用碘化丙丁(Propidium,PI)染色法、CCK-8、Annexin V-FITC/PI双染法、划痕法对VECs-like的周期、活性、凋亡、迁移能力检测后发现:(1)SDF-1会使细胞周期阻滞于S、G2期,50ng/ml SDF-1时,比例最高。(2)酶标仪连续4d检测VECs-like活性发现,各组在观察的前3d细胞活性不高,直到第4d才有所增强,且SDF-1对细胞活性无明显影响,实验组间无显着性差异。(3)50ng/ml SDF-1处理后VECs-like的存活率明显升高,进入早期凋亡的比例也明显降低。(4)对VECs-like划痕法处理后,分别在12h、24h、36h、48h进行观察,发现36h后30、50ng/ml SDF-1因子的添加明显抑制了细胞迁移的速度。叁、诱导形成的血管内皮样细胞对次级毛乳头细胞的影响首先将诱导形成VECs-like,使用ELISA因子检测法对培养24h后的VECs培养液内相关因子含量进行检测,发现ADSCs中b FGF含量最高,其次为30ng/ml SDF-1处理组。各组PDGF、IGF-1的含量无显着性差异。50ng/ml SDF-1处理组的VEGF含量最高,0ng/ml SDF-1处理组分泌量最少。其次,以培养VECs-like 24h后的上清液作为SHF-DPC的培养液来评估VECs-like分泌因子对SHF-DPC的活性和增殖能力的影响时检测发现:各实验组处理活性结果趋势相同,无明显差异;在对SHF-DPC连续计数7d的过程中,SHF-DPC于第3d开始呈指数生长,并从第4d开始,VECs-like上清处理的SHF-DPC生长速度较正常培养的SHF-DPC明显加快,说明实验组上清液中成分对增殖具促有进作用。再者,将诱导72h后形成的VECs-like(下室)与SHF-DPC(上室)以Transwell的方式进行共同培养24h、48h后,对SHF-DPC的Wnt/β-catenin蛋白水平检测发现:50ng/ml SDF-1的促进作用最为明显。上述实验研究表明:SDF-1因子虽不能显着提高诱导效率,但在一定程度上,可以提升VECs-like的功能,提高细胞的抗凋亡能力,并且对SHF-DPC的蛋白表达和增殖能力均具有积极调控作用。(本文来源于《内蒙古大学》期刊2018-05-30）
赖德芳,王青,刘东军[3]（2018）在《趋化因子SDF-1在脂肪间充质干细胞向血管内皮细胞分化过程中的作用》一文中研究指出近年来,研究发现,组织的局部缺血、肾功能不全、癌症、心脑血管等疾病的发生都与血管发生病变有着密切的联系。因此,使病变的血管减少并恢复正常的功能一度成为细胞学领域的热点。目前研究发现,来源于脂肪组织的脂肪间充质干细胞(adipose derived stem cells,ADSCs)能被有效地诱导成为血管内皮细胞(vessel endothelial cells,VECs),并且诱导过程中具有关键作用的趋化因子也不断地被发现,如血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor,b FGF)、类胰岛素一号增长因子(insulin-like growth factors-1,IGF-1)、基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1,SDF-1/CXCL12)等;诱导因子的含量、诱导时间都直接影响着结果;体外培养的ADSCs也可以分泌一定含量的趋化因子来进一步促进血管的形成。该文对近年来关于趋化因子SDF-1对血管生成影响的相关研究进行了综述,希望为模式动物的建立及人类疾病的研究提供理论依据。(本文来源于《中国细胞生物学学报》期刊2018年05期）
王子杰[4]（2018）在《肾微血管内皮细胞转分化在移植肾间质纤维化形成中的作用及肝细胞生长因子的干预研究》一文中研究指出背景:肾移植是治疗终末期肾病的最佳方法。然而,随着外科技术及新型免疫抑制剂的不断发展,肾移植术后远期移植肾的存活率并未得到显着提升。慢性移植肾失功(Chronic allograft dysfunction,CAD)是影响远期移植肾存活率的主要因素,而慢性移植肾间质纤维化是引起CAD的决定性因素,但其机制尚不完全清楚。血管内皮细胞向间充质细胞转分化(Endothelial-to-mesenchymal transition,End MT)近来被证实可引起多种组织纤维化形成。本研究探讨了肾微血管End MT在慢性移植肾间质纤维化形成中的作用及分子机制,以及肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor,HGF)对其的影响和可能机制。方法:首先,从脐带中提取原代人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs),采用倒置显微镜下细胞形态观察和CD31间接免疫荧光染色的方法鉴定该细胞。其次,使用重组人转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)细胞因子体外刺激原代HUVECs,采用蛋白质印迹法(Western Blot assay)法和实时荧光定量聚合酶链反应(Quantitative real-timepolymerase chain reaction,q RT-PCR)法检测与肾微血管End MT过程相关标志物【α-平滑肌肌动蛋白(α-smoothing muscular actin,α-SMA),血管内皮钙粘蛋白(VE-Cadherin),CD31和胶原蛋白-Ⅰ(Collagen-Ⅰ)】的表达,并用酶联免疫吸附实验、细胞划痕实验和细胞侵袭实验探究其对内皮细胞功能的影响。接下来,采用各种特异性细胞内信号转导通路抑制剂探索TGF-β1体外诱导肾微血管End MT过程的相关机制,并在诊断为CAD患者的移植肾组织中进一步验证上述实验结果。最后,为探索HGF在移植肾间质纤维化形成过程中的作用及可能机制,我们采用HGF和/或TGF-β1体外刺激原代HUVECs和人肾小球内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HRGECs)株,收集细胞,采用Western Blot法与q RT-PCR法检测肾微血管End MT过程相关标志物的表达;并采用酶联免疫吸附实验、细胞划痕和细胞侵袭实验探究其对内皮细胞功能的影响。并采用各种特异性细胞内信号转导通路抑制剂预处理细胞,探索HGF对TGF-β1诱导肾微血管End MT过程影响的相关机制。此外,本研究还在同种异体肾移植大鼠慢排模型中验证上述实验结果。结果:TGF-β1在原代HUVECs细胞中显着提高α-SMA和Collagen-Ⅰ的表达,显着抑制VE-Cadherin和CD31的表达,且这一现象呈现浓度和时间依赖性;TGF-β1还可显着提升HUVECs细胞分泌细胞外基质的能力以及细胞迁徙和侵袭的能力。进一步体外实验表明,TGF-β1可通过激活TGF-β/Smad和Akt/m TOR/p70S6K信号通路诱导HUVECs发生End MT现象,而这一分子机制在人移植肾间质纤维化的肾组织中也得到了证实。此外,给予HGF处理则可在HUVECs和HRGECs两种血管内皮细胞中显着抑制由TGF-β1介导的End MT过程,且这种作用也呈现出浓度依赖性方式;HGF还可显着减轻由TGF-β1诱导的血管内皮细胞分泌细胞外基质、细胞迁徙和侵袭能力增强的现象;且进一步体外实验表明HGF是通过抑制TGF-β/Smad和Akt/m TOR/p70S6K信号通路活性进而发挥其抑制TGF-β1诱导的肾微血管End MT进程这一作用的。而且,在同种异体大鼠肾移植慢排模型中,我们的研究也证实HGF质粒可通过上述机制显着抑制移植肾间质纤维化的发生,进而延缓CAD的发生与发展。结论:肾微血管End MT过程存在于慢性移植肾间质纤维化发生和CAD发展过程中,并起到重要作用:TGF-β1可通过激活TGF-β/Smad和Akt/m TOR/p70S6K信号通路诱导肾微血管End MT发生,进而参与慢性移植肾间质纤维化的发生和发展;而HGF则可通过抑制TGF-β/Smad和Akt/m TOR/p70S6K信号通路活性阻断由TGF-β1介导的肾微血管End MT过程,从而减缓慢性移植肾间质纤维化及CAD的发生发展。(本文来源于《南京医科大学》期刊2018-01-01）
王翡,刘雪梅[5]（2017）在《分化型甲状腺癌组织XRCC1和血管内皮细胞生长因子C(VEGF-C)的表达及临床意义》一文中研究指出目的研究X线修复交叉互补基因1(XRCC1)与分化型甲状腺癌发生发展的关系,探讨XRCC1基因蛋白与血管新生的相关性。方法收集40例分化型甲状腺癌患者癌组织及对应癌旁组织,采用Western blot法检测癌组织及对应癌旁组织中XRCC1基因蛋白水平,采用免疫组织化学染色法分别检测XRCC1蛋白及血管内皮细胞生长因子C(VEGF-C)蛋白的表达情况,采用Pearson相关分析法分析XRCC1蛋白表达与分化型甲状腺癌患者临床病理特征的关系及VEGF-C表达的相关性,同时比较XRCC1蛋白阳性表达病例甲状腺癌组织与正常甲状腺组织中微血管密度(MVD)之间的差异。结果在分化型甲状腺癌患者癌组织XRCC1、VEGF-C蛋白高表达,Pearson相关分析显示分化型甲状腺癌患者癌组织中XRCC1蛋白的表达与VEGF-C表达呈正相关(r=0.728),分化型甲状腺癌患者癌组织中XRCC1、VEGF-C蛋白表达阳性率均与淋巴结转移以及TNM分期正相关。XRCC1阳性表达癌组织的MVD值高于癌旁正常组织、XRCC1阴性表达癌组织。结论在分化型甲状腺癌XRCC1、VEGF-C高表达且呈正相关,可能参与分化型甲状腺癌的转移。(本文来源于《细胞与分子免疫学杂志》期刊2017年11期）
杨光正,唐艳梅,张文杰,蒋欣泉[6]（2017）在《Runx2、Osterix转录因子过表达驱动内皮细胞成骨分化的机制探讨》一文中研究指出目的:探讨Runx2和Osterix(OSX)过表达对人脐静脉内皮细胞(human umbilieal vein endothelial eells,HUVECs)成骨分化的调控作用。方法:通过慢病毒载体,将Runx2-GFP和Osterix-DsRED基因分别转染入HUVECs。通过碱性磷酸酶(ALP)染色、半定量活性检测,探讨过表达Runx2和Osterix对HUVECs成骨分化的影响。通过实时荧光定量PCR检测、蛋白免疫印迹、免疫荧光染色检测成骨相关标志物Runx2、OSX、ALP、骨涎蛋白(本文来源于《第十一次全国口腔修复学学术会议论文汇编》期刊2017-10-22）
杨光正,唐艳梅,张文杰,蒋欣泉[7]（2017）在《Runx2、Osterix转录因子过表达驱动内皮细胞成骨分化的机制探讨》一文中研究指出目的:探讨Runx2和Osterix(OSX)过表达对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)成骨分化的调控作用。方法:通过慢病毒载体,将Runx2-GFP和Osterix-DsR ED基因分别转染入HUVECs。通过碱性磷酸酶(ALP)染色、半定量活性检测,探讨过表达Runx2和Osterix对(本文来源于《2017全国口腔生物医学学术年会论文汇编》期刊2017-10-13）
齐鹏鹏[8]（2017）在《血管内皮细胞生长因子对人胎盘源干细胞增殖与成骨分化影响的研究》一文中研究指出背景与目的:由牙周病、外伤、肿瘤、和先天畸形等造成的牙列缺损、牙列缺失、畸形、颌面部畸形是人类常见、多发的疾病。这些疾病造成咀嚼、语言、吞咽功能的障碍、影响人们的心理健康。此外,还引起一系列的并发症,如牙体松动、移位、咬合紊乱、颞下颌关节疾病,甚至对消化系统,循环系统等造成损害。因此,及早、正确地修复这些缺损对维持口腔及全身健康至关重要。随着口腔修复学、口腔种植学的发展,口腔修复和种植成为解决牙体或牙列缺损或缺失的主要方法。患者口腔中良好的的牙槽嵴状况是保障口腔修复或种植工作能够顺利进行的重要前提。患者长期缺牙、牙周炎、全身疾病将导致牙槽嵴萎缩;外伤、先天畸形、肿瘤手术后造成的牙槽骨缺损等,都会给口腔修复或种植带来极大的困难。然而,近几年来,备受人们关注的骨组织工程技术为解决这一难题带来了希望。但是传统的组织工程骨技术在应用于大范围骨缺损的修复时常因骨组织中心血运不足而发生缺血性坏死。因此,如何研制出具有成血管能力的组织工程骨是目前研究的焦点。其中,利用具有成血管作用的细胞因子与种子细胞联合培养的方法是目前研究的热点。本实验中种子细胞采用人胎盘源间充质干细胞(Human placenta derived mesenchymal stem cells,HPMSCs),以血管内皮细胞生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)作为细胞因子将二者联合培养。人胎盘来源间充质干细胞(HPMSCs)取材于废弃的胎盘组织,作为种子细胞有以下优点:(1)来源丰富;(2)取材方便;(3)无伦理学约束;(4)免疫原性低。血管内皮生长因子(VEGF)能够发挥诱导血管形成和骨形成的双重作用。但是研究发现,浓度过高的VEGF会导致血管畸形、微渗漏等情况的发生,反而不利于成骨。因此本实验采用梯度浓度的VEGF与HPMSCs联合培养,观察血管内皮细胞生长因子(VEGF)对人胎盘源间充质干细胞(HPMSCs)增殖与成骨分化的影响。实验方法:在无菌超净台内,采用组织块剪碎结合胰蛋白酶消化法,分离提取人胎盘来源间充质干细胞(HPMSCs),并常规培养分离提取的原代细胞。培养至第3代时,进行检测以证明所提取的细胞为人胎盘来源间充质干细胞。(1)倒置显微镜下观察细胞的形态,MTT法检测第叁代细胞的增殖情况,连续检测8天。(2)第叁代细胞分别于成脂、成骨条件下诱导培养,分别诱导2周后油红O染色,3周后茜素红染色。观察细胞成骨,成脂分化的情况。(3)取第3代人胎盘来源间充质干细胞(HPMSCs),随机分为两大组即实验组与对照组。对照组中不加VEGF,实验组根据细胞液中加入VEGF的浓度不同分为3组。在培养第1、3、5、7天,分别采用MTT试剂盒,I型胶原蛋白ELISA试剂盒,ALP试剂盒检测各组细胞的增殖和成骨分化的情况。结果:1.MTT结果显示:各个细胞培养组的吸光度(OD)值随着培养时间的延长而逐渐增加,且增长曲线呈“S”型,表明其符合干细胞的增殖特点。2.茜素红染色见红色钙结节,油红染色见红色脂滴,表明分离提取的细胞具有成脂和成骨分化的能力。3.MTT、ELISA、ALP结果显示:实验组细胞增殖与成骨能力均明显优于对照组,且当VEGF的浓度<100μg/L时随着浓度的增大促进效果增强,但当其浓度为200μg/L时与100μg/L没有显着性差异。结论:血管内皮细胞生长因子(VEGF)可促进人胎盘源间充质干细胞(HPMSCs)增殖与成骨分化,而且与浓度有关。在一定的浓度范围内(0~100μg/L)作用效果与浓度正相关。但是,随着浓度的继续增大,作用效果并没有显着提高。(本文来源于《吉林大学》期刊2017-05-01）
文礼湘,王瑞瑞,熬守良,屈波[9]（2015）在《护心康对内皮细胞髓样分化因子88和肿瘤坏死因子受体相关因子-6基因的影响》一文中研究指出目的:研究护心康对My D88和TRAF6的影响,探讨其抗动脉粥样硬化的机制。方法:采用雄性中国本兔14只,随机分为正常组和护心康组,分别以蒸馏水和护心康连续灌胃7 d,末次灌胃给药2 h后心脏采血分离血清。体外培养人脐静脉内皮细胞,随机分为3组:正常组,模型组,护心康组。用LPS刺激2 h后,模型组给予空白血清,护心康组给予含药血清干预24 h,收集细胞,用荧光定量PCR和Western blot分别测定My D88和TRAF6m RNA的表达。结果:LPS刺激引起My D88和TRAF6基因表达升高(P<0.01);护心康组表达较模型组低(P<0.05)。结论:护心康具有降低内皮细胞My D88和TRAF6基因表达的作用,其抗动脉粥样硬化的作用可能与此有关。(本文来源于《中医药导报》期刊2015年14期）
徐秀秀,桂鸣[10]（2014）在《生长分化因子15对过氧化氢诱导的人主动脉内皮细胞凋亡的保护作用》一文中研究指出目的研究生长分化因子15(GDF-15)对过氧化氢(H2O2)诱导的人主动脉内皮细胞凋亡的保护作用及其可能的作用机制。方法体外培养人主动脉内皮细胞,随机分为空白对照(A)组、H2O2损伤(B)组、低浓度GDF-15+H2O2(C)组、高浓度GDF-15+H2O2(D)组、低浓度GDF-15+H2O2+LY294002(E)组和高浓度GDF-15+H2O2+LY294002(F)组。采用Hoechst3258染色、流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测磷酸化Akt(p-Akt)蛋白相对表达量。结果 B组细胞凋亡率高于A组(P<0.05)。与B组相比,C组、D组细胞凋亡率降低,p-Akt蛋白表达增加,并呈剂量依赖性(P<0.05);而经LY294002预处理后,E组、F组细胞凋亡率增高,p-Akt蛋白表达减少(P<0.05)。结论 GDF-15可拮抗H2O2诱导的内皮细胞凋亡。其作用机制可能与上调p-Akt的表达有关。(本文来源于《江苏医药》期刊2014年10期）
内皮细胞分化因子论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
阿尔巴斯绒山羊所产山羊绒因其优异的品质被喻为“软黄金”,具有很高的经济价值。羊绒生长过程中毛囊的周期性变化带动着粗毛和绒毛的生长、脱落、再生。研究表明,当毛囊处于生长期时,由于毛囊中各种诱导因子表达的上调而导致其周围血管密度、体积增大。而血管的生成是一个趋化因子和内在因素共同调节的级联动态过程,其中基质细胞衍生因子-1(Stromal cell-derived factor-1,SDF-1)就是一种重要的趋化因子。已有实验证明SDF-1处理的脂肪间充质干细胞可以快速修复受损的伤口,表明其可能在血管网的形成和组织修复过程起关键作用。本实验在脂肪间充质干细胞(adipose derived stem cells,ADSCs)向血管内皮细胞(vessel endothelial cells,VECs)分化的诱导液中添加SDF-1趋化因子,观察其对诱导分化的影响及对血管生成(angiogenesis)的作用,并且探究诱导形成的血管内皮样细胞(vessel endothelial like cell,VECs-like)对次级毛乳头细胞(Secondary Hair Follicle-Dermal Papilla cell,SHF-DPC)生长状况的影响,以便为今后深入了解绒毛生长机制提供实验依据。一、诱导脂肪间充质干细胞向血管内皮细胞分化以ADSCs为实验材料,在诱导液中分别添加30ng/ml、50ng/ml、70ng/ml SDF-1向VECs进行诱导,分别于72h、21d对诱导形成的VECs-like进行检测发现:(1)诱导过程会触发细胞的死亡,并且死亡比例与诱导时间呈正相关性;细胞形态由梭形变为长纺锤形,细胞质颜色加深,核位置明显,但组间无明显差异。(2)对诱导72h后的VECs-like使用兔源假性血友病因子(von Willebrand factor,VWF)标记后,流式细胞仪检测荧光发现:各组诱导法均能成功,但50ng/ml SDF-1为最佳条件。(3)诱导72h的VECs-like以CD34、VWF、CXCR4为对象进行RT-q PCR检测发现:30ng/ml SDF-1最有利于VWF的表达,为对照组的1.45倍(p<0.05)。50ng/ml和70ng/ml SDF-1对CXCR4的表达促进作用明显,分别为对照组的40.85、12.96倍。CD34的表达在50ng/ml SDF-1时最高,为对照组的1.741倍(p<0.05)。(4)诱导至21d时,30ng/ml、50ng/ml SDF-1对VECs-like形成特有的管状样结构的促进作用明显;同时细胞形态变化显着,细胞间纹路明显;相比于诱导前,凋亡比例约为50%左右。(5)诱导21d后的VECs-like可观察到细胞间的丝状连接而呈现出的管腔样结构。二、诱导形成的血管内皮样细胞功能检测对诱导24h、72h后形成的VECs-like分别使用碘化丙丁(Propidium,PI)染色法、CCK-8、Annexin V-FITC/PI双染法、划痕法对VECs-like的周期、活性、凋亡、迁移能力检测后发现:(1)SDF-1会使细胞周期阻滞于S、G2期,50ng/ml SDF-1时,比例最高。(2)酶标仪连续4d检测VECs-like活性发现,各组在观察的前3d细胞活性不高,直到第4d才有所增强,且SDF-1对细胞活性无明显影响,实验组间无显着性差异。(3)50ng/ml SDF-1处理后VECs-like的存活率明显升高,进入早期凋亡的比例也明显降低。(4)对VECs-like划痕法处理后,分别在12h、24h、36h、48h进行观察,发现36h后30、50ng/ml SDF-1因子的添加明显抑制了细胞迁移的速度。叁、诱导形成的血管内皮样细胞对次级毛乳头细胞的影响首先将诱导形成VECs-like,使用ELISA因子检测法对培养24h后的VECs培养液内相关因子含量进行检测,发现ADSCs中b FGF含量最高,其次为30ng/ml SDF-1处理组。各组PDGF、IGF-1的含量无显着性差异。50ng/ml SDF-1处理组的VEGF含量最高,0ng/ml SDF-1处理组分泌量最少。其次,以培养VECs-like 24h后的上清液作为SHF-DPC的培养液来评估VECs-like分泌因子对SHF-DPC的活性和增殖能力的影响时检测发现:各实验组处理活性结果趋势相同,无明显差异;在对SHF-DPC连续计数7d的过程中,SHF-DPC于第3d开始呈指数生长,并从第4d开始,VECs-like上清处理的SHF-DPC生长速度较正常培养的SHF-DPC明显加快,说明实验组上清液中成分对增殖具促有进作用。再者,将诱导72h后形成的VECs-like(下室)与SHF-DPC(上室)以Transwell的方式进行共同培养24h、48h后,对SHF-DPC的Wnt/β-catenin蛋白水平检测发现:50ng/ml SDF-1的促进作用最为明显。上述实验研究表明:SDF-1因子虽不能显着提高诱导效率,但在一定程度上,可以提升VECs-like的功能,提高细胞的抗凋亡能力,并且对SHF-DPC的蛋白表达和增殖能力均具有积极调控作用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
内皮细胞分化因子论文参考文献
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