导读:本文包含了膜基质论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:基质,干细胞,细胞,骨髓,糖尿病肾病,卵黄,蛋白。
膜基质论文文献综述
李珊珊,黄茜[1]（2018）在《卵黄高磷蛋白对壳聚糖膜基质上MC3T3-E1细胞增殖的影响》一文中研究指出本研究制备了壳聚糖和氧化石墨烯/壳聚糖复合膜,并采用CCK-8法、Annexin V/PI双染法和PI染色检测了蛋黄中提取的卵黄高磷蛋白对MC3T3-E1细胞在该复合膜基质上的生理活动的影响。结果表明:壳聚糖膜对细胞无毒性影响,并通过提高S期细胞所占比例,使MC3T3-E1细胞活性提高了31.92%,抑制细胞凋亡,使凋亡率下降45.78%;氧化石墨烯/壳聚糖膜会提高细胞的凋亡率,氧化石墨烯含量越高,促进凋亡越明显,凋亡率在氧化石墨烯含量为2%时最高,为17.64%;在壳聚糖膜基质上,100μg/mL卵黄高磷蛋白对MC3T3-E1细胞促进增殖作用最显着(p<0.05),细胞活性提高81.59%,同时降低了细胞的凋亡比例;蛋白浓度为500μg/mL时,细胞活性下降4.47%,促进了细胞凋亡。综上所述,壳聚糖和低浓度卵黄高磷蛋白均能提高MC3T3-E1细胞的活性。(本文来源于《食品工业科技》期刊2018年24期）
陈澄[2]（2018）在《BMP4/Smad1信号通路在糖尿病肾病系膜基质增生中的作用研究》一文中研究指出目的:糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)为糖尿病(diabetes mellitus,DM)的常见并发症之一,可导致终末期肾病及一系列心血管并发症。DN发病机制复杂,其基本病理改变为系膜基质增生及基底膜增厚。骨形态发生蛋白4(bone morphogenetic protein 4,BMP4)属于转化生长因子β(Transforming growth factor-β,TGF-β)超家族成员之一,参与调节细胞的形态分化、增殖、迁徙、凋亡等,在神经系统、心血管系统、泌尿系统的生理及病理过程中都具有重要作用。BMP4能够通过Smad及非Smad信号通路调控目的基因的转录。最近研究发现BMP4/Smad1信号通路可能与糖尿病肾病发病密切相关,尤其在参与系膜基质增生方面。本实验将对BMP4/Smad1信号通路在糖尿病肾病系膜基质增生中的作用进行相关研究。方法:1、动物实验:40只SPF级健康雄性SD大鼠随机分为对照组(CON组,18只)、糖尿病肾病组(DN组,22只),DN组予以高脂饲料喂养4周后,予单次腹腔注射1%链脲佐菌素(STZ)溶液35mg/kg诱导糖尿病,CON组注射同等体积的0.1mmol/L柠檬酸盐缓冲液。72小时后测血糖,连续3天血糖>16.7mmol/L为糖尿病造模成功。2周后,24h尿蛋白定量>30 mg,尿量>原尿量50%者为DN模型制备成功。分别于各时间点收集各组大鼠血清及尿液进行相关指标检测,收集大鼠肾脏组织进行HE染色,PASM染色,观察肾小球的基本病理改变情况;免疫组化染色检测:BMP4、ALK3、Smad1、Col4、Col1、MMP9;2、细胞实验:将大鼠系膜细胞分组为低糖组(LG组:培养基含5.6mmol/L葡萄糖)、高糖组(HG组:培养基含30mmol/L葡萄糖)、等渗透压对照组(OP组:培养基含5.6mmol/L葡萄糖+24.4mmol/L甘露醇),分别培养24h、48h、72h,运用免疫荧光检测BMP4、Smad1、Col4表达,根据上述结果选择最佳时间点,并于最佳时间点运用CCK-8法检测系膜细胞增殖;将大鼠系膜细胞分组为低糖组(LG组)、高糖组(HG组)、高糖+BMP4-siRNA组(BMP4-siRNA组)、高糖+scramble-siRNA组(scramble-siRNA组),培养至最佳时间点,运用western bolt检测BMP4、ALK3、Smad1、Col4、Col1、MMP9的表达;NOGGIN重组蛋白为BMP4拮抗剂,为进一步验证BMP4/Smad1在糖尿病肾病系膜基质增生中的作用,将大鼠系膜细胞分组为低糖组(LG组)、高糖组(HG组)、高糖+NOGGIN组(NOGGIN组)、高糖+BSA组(BSA组),培养至最佳时间点,运用western bolt检测ALK3、Smad1、Col4、Col1、MMP9的表达。结果:1、动物实验:1)一般资料:SD雄性大鼠的一般情况:DN组雄性大鼠在注射STZ后逐渐出现饮水增多、食量增多、尿量增多。第8周出现活动量减少、反应稍迟钝、体重下降,皮毛光泽度下降;第12周出现进一步消瘦,部分大鼠出现腹部膨隆、尾部溃烂、颌下包块等症状,到16周时各种症状均加剧。CON组大鼠无明显饮水增多、食量增多、尿量增多,反应敏捷,活动量较多,体质量逐渐增加。体重:DN组大鼠体重随时间逐渐减轻,CON组大鼠体重逐渐增加。DN组大鼠体重与同时间点CON组相比明显减轻(P<0.05)。血糖:与CON组相比,DN组大鼠各时间点血糖值均显着增高(P<0.05)。24小时尿蛋白定量(24-h Upro):DN组大鼠24-h Upro各时间点均较CON组升高(P<0.05),且随时间延长逐渐升高。肾功能:血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)和胱抑素C(CysC):DN组大鼠8周、12周、16周时BUN水平、胱抑素C水平均较同期CON组显着增高(P<0.05);第8周时DN组大鼠Scr值与CON组相比无明显差异,12周及16周时DN组Scr较CON组显着升高(P<0.05)。2)肾组织:HE染色:CON组大鼠各时间点肾小球大小正常,形态正常,基底膜未见增厚,系膜基质未见增生。DN组大鼠于8周末时可见肾小球体积轻度增大,基底膜轻度增厚,系膜区增宽;12周末时可见基底膜增厚及系膜基质增生较第8周更为明显,16周末时肾组织病变加重,基底膜重度增厚,并可见节段性硬化。PASM染色:CON组大鼠各时间点未见明显异常,各时间点可见系膜区少许黑色胶原的沉积,基底膜也无增厚;DN组于第8周末与同时间点CON组相比可见系膜区黑色胶原的沉积明显增多,同时伴有基底膜增厚(P<0.05);12周末可见系膜基质增生及基底膜增厚更加明显(P<0.05);于第16周末可见DN组大鼠肾脏系膜基质明显增生,曾弥漫样或结节样分布,基底膜进一步增厚(P<0.05)。3)免疫组化染色:CON组肾组织各时间点可见少量散在BMP4、ALK3、Smad1、Col4、Col1蛋白的表达,并随时间延长无明显改变;DN组肾组织各个时间BMP4、ALK3、Smad1、Col4、Col1的蛋白表达较同期CON组明显增多,并随时间延长逐渐增多(P<0.05);而CON组各个时期MMP9无明显变化,DN组大鼠8周时MMP9的表达较同期CON组无明显变化,第12周及第16周MMP9表达水平较DN组减少(P<0.05)。2、细胞实验:1)大鼠系膜细胞免疫荧光染色:LG组及OP组大鼠系膜细胞绿色荧光表达较弱,且随时间的改变无明显变化。HG组各时间点BMP4、Smad1、Col4的表达均较LG组及OP组增强;于48h开始较LG组及OP组明显增强。据上述结果将48小时作为最佳时间点进行后续实验。CCK8法检测细胞增殖:HG组于48小时的增殖水平较LG组及OP组相比有所增加,但无明显统计学意义(P<0.05)。2)通过预实验已经筛选出最佳转染条件,通过westerm blot检测各组的相关蛋白表达情况。与LG组相比,HG组BMP4、ALK3、Smad1、Col4、Col1表达明显增多(P<0.05),而MMP9的表达减少(P<0.05)。BMP4-siRNA组与HG组相比BMP4、ALK3、Smad1、Col4、Col1表达明显减少(P<0.05),MMP9的表达增多(P<0.05);3)预实验已经筛选出最佳的NOGGIN蛋白浓度,通过westerm blot检测各组的相关蛋白表达情况,与LG组相比,HG组ALK3、Smad1、Col4、Col1表达明显增多(P<0.05),MMP9的表达减少(P<0.05),而NOGGIN组与HG组相比ALK3、Smad1、Col4、Col1表达减少(P<0.05),MMP9的表达增多(P<0.05)。结论:1.糖尿病肾病系膜基质增生时存在BMP4/Smad1信号通路的激活;2.阻断BMP4/Smad1信号通路可明显减少糖尿病肾病系膜基质增生。(本文来源于《西南医科大学》期刊2018-05-01）
杨炎林[3]（2017）在《Egr-1介导lncRNA Arid2-IR促进糖尿病肾病系膜基质沉积》一文中研究指出目的:探讨早期生长反应蛋白-1(Early growth response protein 1,Egr-1)介导长链非编码RNA(Long Noncoding RNA,lncRNA)Arid2-IR促进糖尿病肾病系膜基质沉积(extracellular matrix,ECM)。方法:体内实验:采用高糖高脂饲料喂养联合腹腔注射小剂量链脲佐菌素诱导C57BL/6J小鼠(n=15)建立2型糖尿病动物模型,同系小鼠正常饮食(n=5)作为对照。RT-qPCR和免疫组化法检测肾皮质中Egr-1、纤连蛋白(fibronectin,FN)、Ⅰ型胶原(CollangeⅠ,Col-Ⅰ)表达的变化,RT-qPCR检测Arid2-IR表达的变化。成模后的DM小鼠(n=5)采用流体动力学法分别转染shEgr-1和Egr-1质粒,使用上述方法检测Arid2-IR及下游指标表达的变化;体外实验:采用高糖刺激的小鼠肾小球系膜细胞SV40-MES-13,转染过表达Egr-1质粒并同时转染Arid2-IR小干扰RNA,RT-qPCR和Western Blot检测FN和CollangeⅠ表达的变化。各指标数据采用均数±标准误(X±SD)表示,多组数据比较采用单因素方差分析,正态分布两样本比较采用两独立样本t检验,P<0.05时被认为差异具有统计学意义。结果:与对照组相比,DM小鼠肾皮质Egr-1表达升高3.9倍、Arid2-IR表达升高2.8倍、FN表达升高2.9倍、CollangeⅠ表达升高4.3倍。转染shEgr-1质粒组小鼠肾皮质Arid2-IR表达下降91%、FN表达下降88%、CollangeⅠ表达下降74%,而过表达Egr-1小鼠肾皮质Arid2-IR表达升高1.4倍、FN表达升高1.93倍、CollangeⅠ表达升高10.87倍;Egr-1在高糖刺激SV40-MES-13后1h即升高2.1倍而后降至基线水平,而Arid2-IR在12h升高1.2倍,24h高峰1.4倍而后降至基线水平;过表达Egr-1后沉默Arid2-IR,FN、CollangeⅠ的表达部分均有所降低。以上结果均有统计学意义。结论:糖尿病小鼠模型中肾皮质Egr-1部分通过上调Arid2-IR促进肾小球系膜基质沉积,因此lncRNA Arid2-IR有望成为糖尿病肾病治疗的新靶点。(本文来源于《2017年第五次世界中西医结合大会论文摘要集（上册）》期刊2017-12-06）
李扬[4]（2017）在《Klotho通过TGF-β1/Smad3信号通路下调Egr-1抑制高糖诱导的肾小球系膜基质沉积》一文中研究指出目的:观察Klotho是否通过TGF-β1/Smad3信号通路下调Egr-1表达从而抑制高糖诱导的肾小球系膜基质沉积。方法:应用高糖刺激肾小球系膜细胞(human mesangial cells,hMCs)建立糖尿病细胞模型,瞬时转染Klotho质粒过表达Klotho,观察Egr-1、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、I型胶原蛋白(collagen type I,Col I)表达水平的变化及p-Smad3/Smad3蛋白比值的变化,瞬时转染Klotho siRNA用SB-431542预处理后再预高糖培养hMCs观察SB-431542能否减弱si-Klotho对上述指标的作用。抑制高糖诱导的肾小球系膜基质沉积。结果:高糖呈时间依赖性地抑制hMCs中Klotho的表达;瞬时转染Klotho质粒后可明显下调高糖培养的hMCs中Egr-1、FN和Col I的表达,同时下调p-Smad3/Smad3蛋白比值;相反,瞬时转染Klotho siRNA可上调高糖培养的hMCs中Egr-1、FN和Col I的表达,同时上调pSmad3/Smad3蛋白比值,而Klotho siRNA的上述作用可被TGF-β1/Smad信号通路抑制剂SB-431542明显减弱。结论:Klotho可通过TGF-β1/Smad3信号通路下调hMCs中Egr-1的表达,进而抑制高糖诱导的肾小球系膜基质沉积。(本文来源于《2017年第五次世界中西医结合大会论文摘要集（上册）》期刊2017-12-06）
赵宸,王艳,方媛,黄珍珍,任伟[5]（2016）在《雷米普利通过抑制胰岛素样生长因子-1减轻糖尿病肾病大鼠肾系膜基质聚集的研究》一文中研究指出目的探讨雷米普利对糖尿病肾病(DN)大鼠胰岛素样生长因子-1(IGF-1)表达及肾系膜基质聚集的影响。方法 SD大鼠分为健康对照组(NC组,n=12)、DN组(n=11)、DN雷米普利干预组(DN+RAM组,n=12),腹腔注射链脲佐菌素构建DN模型,DN+RAM组予雷米普利3 mg·kg-1·d-1灌胃8周,检测肾重/体质量、空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(Hb A1c)、24 h尿蛋白、血尿素氮、血肌酐;HE染色和电镜观察肾脏病理改变;免疫组织化学检测肾组织IGF-1表达;Western blot检测IGF-1、纤维连接蛋白(FN)、IV型胶原(Col-IV)和基质金属蛋白酶(MMP)-2表达。结果与NC组比较,DN组大鼠肾重/体质量、FBG、Hb A1c、24h尿蛋白、血尿素氮、血肌酐明显升高,肾小球肥大和系膜基质聚集明显,IGF-1、FN和Col-IV蛋白表达明显增加,MMP-2表达明显降低(P<0.05)。与DN组比较,DN+RAM组上述指标除FBG和Hb A1c外均明显改善(P<0.05)。IGF-1蛋白表达与24 h尿蛋白定量(r=0.937)、FN(r=0.896)和Col-IV(r=0.871)表达呈显着正相关,与MMP-2(r=-0.826)呈显着负相关(P<0.05)。结论雷米普利可通过抑制IGF-1的表达,减轻肾系膜基质聚集,发挥肾脏保护作用。(本文来源于《中国临床保健杂志》期刊2016年02期）
徐孟丹[6]（2016）在《拉布拉多犬骨髓间充质干细胞与牙周膜基质干细胞裸鼠皮下成骨能力的比较性研究》一文中研究指出目的:通过体外加入骨向诱导液进行培养,观察比较犬骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)和牙周膜基质干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)的形态特征及两者在体外成骨能力的差异;再分别与支架材料β-磷酸叁钙(β-TCP)复合并植入裸鼠皮下后,探索拉布拉多犬BMSCs和拉布拉多犬PDLSCs异位成骨能力的差异。方法:(1)犬BMSCs的培养:成年拉布拉多犬一只,将犬髂后上棘去毛后消毒,铺巾,待麻醉起效后,用骨髓穿刺针于犬髂后上棘穿刺抽取骨髓于离心管中,低速离心后将其接种于培养皿中,加入DMEM。待细胞培养至第3代后,取生长状态良好者,加入成骨向分化诱导液进行体外诱导培养;(2)犬PDLSCs的培养取成年拉布拉多犬一只,消毒铺巾麻醉起效后,拔取左下颌叁颗下前牙,用PBS缓冲液从根尖向牙冠方向反复冲洗多次,用锐利手术刀片刮取牙根中部1/3的牙周膜组织,剪碎后接种于培养皿中,添加适量DMEM,待细胞培养至第3代后,取生长状态良好者,加入成骨向分化诱导液进行体外诱导培养。(3)检测方法:MTT法检测两种基质干细胞的增殖差异;骨向诱导后1d、4d、7d、14d及21d,采用碱性磷酸酶(ALP)染色法和茜素红(ARS)染色法法检测两者成骨分化情况;骨向诱导后1d、4d、7d、14d及21d,RT-PCR检测成骨诱导后成骨相关基因表达情况。取诱导培养7d后的第叁代拉布拉多犬BMSCs和拉布拉多犬PDLSCs,分别与2mm×Φ6mmβ-TCP复合。实验分为3组,即β-TCP组,犬BMSCs/β-TCP复合体组,犬PDLSCs/β-TCP复合体组。将细胞体外与材料复合后,常规培养3d,利用扫描电镜观察细胞与材料的黏附情况。并将各组复合物植入裸鼠皮下,裸鼠常规饲养8周后取材,通过HE染色观察新骨形成情况,免疫组化检测成骨相关基因蛋白的表达。结果:(1)BMSCs原代培养7d后,在显微镜下观察可见有细胞爬出,并大量增殖,细胞呈长梭状;(2)PDLSCs原代培养7d后,显微镜下观察可见有大量细胞从牙周膜组织块中爬出,成放射状分布,细胞呈长梭状。两者在细胞形态上无明显差异;(3)MTT检测显示两者均有良好的体外增殖能力,其中BMSCs的增殖能力稍强;(4)ALP和ARS的染色结果显示两者随诱导时间的增加均有阳性显色,且阳性染色结果渐强,同一时间点BMSCs的染色比PDLSCs的深;(5)RT-PCR结果显示,在成骨诱导的过程中,成骨诱导相关基因BMP2、OCN、RUNX2、HIF-1α、VEGF、CLOOAGEN-1等都有明显的表达,与PDLSCs组相比,BMSC组BMP2基因在骨诱导1d表达显着高于PDLSCs组(P<0.01)但在骨诱导的7d和14d PDLSCs组BMP2基因表达要高于BMSC组(P<0.01)。BMSCs组OCN基因,基因在骨诱导14d时表达明显强于PDLSCs组(P<0.01)。RUNX2两组中都有高表达但是结果显示无统计学差异。BMSCs组HIF-1α,基因在骨诱导4d时表达明显低于PDLSCs组(P<0.01)。COLLAGEN-1 BMSCs组基因在骨诱导1d、4d、7d及14d时表达明显高于PDLSCs组(P<0.01)。扫描电镜结果表明犬BMSCs和犬PDLSCs均可在β-TCP支架材料上正常生长。两种细胞均以较高的细胞密度生长于β-TCP表面及孔隙中,与骨架材料结合较好。裸鼠皮下组织切片HE染色结果显示,犬BMSCs和犬PDLSCs组都有新生骨样组织形成,免疫组织化学结果显示,犬BMSCs组BMP-2和OCN表达量略高于犬PDLSCs组。结论:BMSCs和犬PDLSCs经体外诱导后都具有一定的成骨性能,其中BMSCs的成骨能力较PDLSCs的成骨能力强。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2016-03-01）
曹喜春,许杨,何庆华,刘星[7]（2015）在《同时检测动物样品中四种磺胺药物残留的膜基质免疫分析法》一文中研究指出建立了一种简便、快速、可靠的膜免疫芯片检测牛奶和猪肝样品中磺胺类药物总量的方法。以PVDF膜作为固相基质,通过优化包被抗原浓度和抗体的工作浓度,研究出了检测磺胺药物膜免疫分析法。结果表明,该法检测牛奶和猪肝样品中四种磺胺药物(磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶和磺胺对甲氧嘧啶)总量的检测阈值为50μg/kg,可以用于磺胺药物总量的筛查。此外,分别采用本方法、Ic-ELISA和HPLC测定了市场上随机购买的20份牛奶和8份猪肝样品,叁者结果基本一致。本法结果可靠、简便直观、无需特殊的检测仪器,适合于在线监测和收购现场的快速检测。(本文来源于《食品工业科技》期刊2015年18期）
张丽华,孙丽萍,李顺峰,聂钰洪,张蓓[8]（2015）在《海藻酸钠作为鲜切果蔬保鲜成膜基质材料的应用研究进展》一文中研究指出可食膜处理是保持鲜切果蔬品质和延长其货架期的有效手段,现已广泛应用于鲜切果蔬的保鲜中。海藻酸钠是一种天然多糖,具有良好的成膜性、透气性、生物相容性和生物降解性,在鲜切果蔬的保鲜中常用作成膜基质材料。现介绍了鲜切果蔬的特性、海藻酸钠的性质及应用概况,综述了海藻酸钠作为鲜切果蔬保鲜成膜基质材料在防止褐变、抑制微生物污染和延长货架期方面的最新进展,并对海藻酸钠复合膜在鲜切果蔬上的应用前景和研究方向进行了探讨。(本文来源于《北方园艺》期刊2015年07期）
戴云,何静,吴方[9]（2015）在《基底膜基质/壳聚糖诱导骨髓间充质干细胞成软骨分化》一文中研究指出背景:课题组前期研究发现基底膜基质能够定向诱导骨髓间充质干细胞向软骨方向分化,但其力学性能与实际应用有较大差距,还需要进一步研究。目的:制备兼具适宜力学性能和优异生物相容性的壳聚糖/基底膜基质水凝胶支架用于软骨修复。方法:以京尼平为交联剂,将壳聚糖溶液与基底膜基质按2︰1,1︰1,1︰3比例混合制成水凝胶,接种大鼠骨髓间充质干细胞,培养14 d。经材料力学测试、细胞增殖、活细胞染色、酶联免疫吸附测试以及阿尔新蓝染色等方法评价材料诱导细胞成软骨分化能力。结果与结论:在基底膜基质内添加壳聚糖后,材料力学性能从0.48 k Pa上升到1.78 k Pa。标志性蛋白分泌结果显示,纯壳聚糖组早期诱导成软骨活性高于其他组,但后期诱导能力减弱,而含基底膜基质各组在后期能够保持较好的诱导活性,其中壳聚糖/基底膜基质=1︰1组材料具有一定的力学强度,且Ⅱ型胶原和Ⅹ型胶原的表达量在14 d较其他组高。结果表明实验制备的壳聚糖/基底膜基质水凝胶具有良好的力学性能,并能够促进骨髓间充质干细胞向软骨方向分化,可用于软骨组织工程研究。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2015年10期）
张兵,党晓龙,吴永红,于智学,王同华[10]（2014）在《成膜基质对炭膜结构与气体分离性能的影响》一文中研究指出以间苯二酚-甲醛为碳源,F127为添加剂,经成膜与炭化得到炭膜.通过热失重分析、红外光谱、元素分析及透射电镜从微观上分析了前驱体的热解过程及碳结构演变.采用X射线衍射及氮气吸附技术分别测定了炭膜碳结构与孔结构.研究了成膜基质表面疏水性对成膜过程的收缩率、碳结构、孔结构及气体分离性能的影响.结果显示,成膜基质对炭膜微观结构与分离性能影响显着.疏水性较大的玻璃比聚四氟乙烯与不锈钢更有助于减小成膜过程中径向收缩率,并得到高比表面积与孔体积的炭膜,其对O2/N2选择性高达10以上.(本文来源于《膜科学与技术》期刊2014年06期）
膜基质论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)为糖尿病(diabetes mellitus,DM)的常见并发症之一,可导致终末期肾病及一系列心血管并发症。DN发病机制复杂,其基本病理改变为系膜基质增生及基底膜增厚。骨形态发生蛋白4(bone morphogenetic protein 4,BMP4)属于转化生长因子β(Transforming growth factor-β,TGF-β)超家族成员之一,参与调节细胞的形态分化、增殖、迁徙、凋亡等,在神经系统、心血管系统、泌尿系统的生理及病理过程中都具有重要作用。BMP4能够通过Smad及非Smad信号通路调控目的基因的转录。最近研究发现BMP4/Smad1信号通路可能与糖尿病肾病发病密切相关,尤其在参与系膜基质增生方面。本实验将对BMP4/Smad1信号通路在糖尿病肾病系膜基质增生中的作用进行相关研究。方法:1、动物实验:40只SPF级健康雄性SD大鼠随机分为对照组(CON组,18只)、糖尿病肾病组(DN组,22只),DN组予以高脂饲料喂养4周后,予单次腹腔注射1%链脲佐菌素(STZ)溶液35mg/kg诱导糖尿病,CON组注射同等体积的0.1mmol/L柠檬酸盐缓冲液。72小时后测血糖,连续3天血糖>16.7mmol/L为糖尿病造模成功。2周后,24h尿蛋白定量>30 mg,尿量>原尿量50%者为DN模型制备成功。分别于各时间点收集各组大鼠血清及尿液进行相关指标检测,收集大鼠肾脏组织进行HE染色,PASM染色,观察肾小球的基本病理改变情况;免疫组化染色检测:BMP4、ALK3、Smad1、Col4、Col1、MMP9;2、细胞实验:将大鼠系膜细胞分组为低糖组(LG组:培养基含5.6mmol/L葡萄糖)、高糖组(HG组:培养基含30mmol/L葡萄糖)、等渗透压对照组(OP组:培养基含5.6mmol/L葡萄糖+24.4mmol/L甘露醇),分别培养24h、48h、72h,运用免疫荧光检测BMP4、Smad1、Col4表达,根据上述结果选择最佳时间点,并于最佳时间点运用CCK-8法检测系膜细胞增殖;将大鼠系膜细胞分组为低糖组(LG组)、高糖组(HG组)、高糖+BMP4-siRNA组(BMP4-siRNA组)、高糖+scramble-siRNA组(scramble-siRNA组),培养至最佳时间点,运用western bolt检测BMP4、ALK3、Smad1、Col4、Col1、MMP9的表达;NOGGIN重组蛋白为BMP4拮抗剂,为进一步验证BMP4/Smad1在糖尿病肾病系膜基质增生中的作用,将大鼠系膜细胞分组为低糖组(LG组)、高糖组(HG组)、高糖+NOGGIN组(NOGGIN组)、高糖+BSA组(BSA组),培养至最佳时间点,运用western bolt检测ALK3、Smad1、Col4、Col1、MMP9的表达。结果:1、动物实验:1)一般资料:SD雄性大鼠的一般情况:DN组雄性大鼠在注射STZ后逐渐出现饮水增多、食量增多、尿量增多。第8周出现活动量减少、反应稍迟钝、体重下降,皮毛光泽度下降;第12周出现进一步消瘦,部分大鼠出现腹部膨隆、尾部溃烂、颌下包块等症状,到16周时各种症状均加剧。CON组大鼠无明显饮水增多、食量增多、尿量增多,反应敏捷,活动量较多,体质量逐渐增加。体重:DN组大鼠体重随时间逐渐减轻,CON组大鼠体重逐渐增加。DN组大鼠体重与同时间点CON组相比明显减轻(P<0.05)。血糖:与CON组相比,DN组大鼠各时间点血糖值均显着增高(P<0.05)。24小时尿蛋白定量(24-h Upro):DN组大鼠24-h Upro各时间点均较CON组升高(P<0.05),且随时间延长逐渐升高。肾功能:血尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)和胱抑素C(CysC):DN组大鼠8周、12周、16周时BUN水平、胱抑素C水平均较同期CON组显着增高(P<0.05);第8周时DN组大鼠Scr值与CON组相比无明显差异,12周及16周时DN组Scr较CON组显着升高(P<0.05)。2)肾组织:HE染色:CON组大鼠各时间点肾小球大小正常,形态正常,基底膜未见增厚,系膜基质未见增生。DN组大鼠于8周末时可见肾小球体积轻度增大,基底膜轻度增厚,系膜区增宽;12周末时可见基底膜增厚及系膜基质增生较第8周更为明显,16周末时肾组织病变加重,基底膜重度增厚,并可见节段性硬化。PASM染色:CON组大鼠各时间点未见明显异常,各时间点可见系膜区少许黑色胶原的沉积,基底膜也无增厚;DN组于第8周末与同时间点CON组相比可见系膜区黑色胶原的沉积明显增多,同时伴有基底膜增厚(P<0.05);12周末可见系膜基质增生及基底膜增厚更加明显(P<0.05);于第16周末可见DN组大鼠肾脏系膜基质明显增生,曾弥漫样或结节样分布,基底膜进一步增厚(P<0.05)。3)免疫组化染色:CON组肾组织各时间点可见少量散在BMP4、ALK3、Smad1、Col4、Col1蛋白的表达,并随时间延长无明显改变;DN组肾组织各个时间BMP4、ALK3、Smad1、Col4、Col1的蛋白表达较同期CON组明显增多,并随时间延长逐渐增多(P<0.05);而CON组各个时期MMP9无明显变化,DN组大鼠8周时MMP9的表达较同期CON组无明显变化,第12周及第16周MMP9表达水平较DN组减少(P<0.05)。2、细胞实验:1)大鼠系膜细胞免疫荧光染色:LG组及OP组大鼠系膜细胞绿色荧光表达较弱,且随时间的改变无明显变化。HG组各时间点BMP4、Smad1、Col4的表达均较LG组及OP组增强;于48h开始较LG组及OP组明显增强。据上述结果将48小时作为最佳时间点进行后续实验。CCK8法检测细胞增殖:HG组于48小时的增殖水平较LG组及OP组相比有所增加,但无明显统计学意义(P<0.05)。2)通过预实验已经筛选出最佳转染条件,通过westerm blot检测各组的相关蛋白表达情况。与LG组相比,HG组BMP4、ALK3、Smad1、Col4、Col1表达明显增多(P<0.05),而MMP9的表达减少(P<0.05)。BMP4-siRNA组与HG组相比BMP4、ALK3、Smad1、Col4、Col1表达明显减少(P<0.05),MMP9的表达增多(P<0.05);3)预实验已经筛选出最佳的NOGGIN蛋白浓度,通过westerm blot检测各组的相关蛋白表达情况,与LG组相比,HG组ALK3、Smad1、Col4、Col1表达明显增多(P<0.05),MMP9的表达减少(P<0.05),而NOGGIN组与HG组相比ALK3、Smad1、Col4、Col1表达减少(P<0.05),MMP9的表达增多(P<0.05)。结论:1.糖尿病肾病系膜基质增生时存在BMP4/Smad1信号通路的激活;2.阻断BMP4/Smad1信号通路可明显减少糖尿病肾病系膜基质增生。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
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