导读:本文包含了硫代寡核苷酸论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:核苷酸,细胞,端粒,凋亡,色谱,流感,活性。
硫代寡核苷酸论文文献综述
刘丰,黄慧敏,王志华,吴西军,何志旭[1]（2016）在《利用吗啉代寡核苷酸技术下调早期斑马鱼胚胎lmna基因的初步研究》一文中研究指出目的利用吗啉代寡核苷酸技术建立下调斑马鱼lmna基因的技术方法。方法在斑马鱼lmna基因序列中选择靶点,设计针对斑马鱼lmna基因的吗啉代寡核苷酸序列(lmna-MO),构建能特异指示lmna基因表达的lmna-EGFP-pCS~(2+)重组质粒,并通过显微注射方式将二者共注射入斑马鱼胚胎中,通过观察胚胎中绿色荧光表达量反应lmna基因表达量,并通过蛋白质印迹法检测胚胎中lamin蛋白表达量。结果蛋白质印迹法检测斑马鱼体内lamin蛋白的表达,分别有大小为69 KD和62 KD两种蛋白表达。设计并构建了lmna-MO和重组质粒lmnaEGFP-pCS~(2+),单独注射lmna-EGFP-pCS~(2+)质粒后观察到从6 hpf到96 hpf胚胎均有绿色荧光蛋白表达;二者共注射后观察到,与对照组相比,实验组从6 hpf至30 hpf胚胎中绿色荧光蛋白表达量均不同程度下降或消失;蛋白质印迹实验结果显示实验组胚胎内lamin蛋白表达量明显下降。表明已成功下调了斑马鱼胚胎lmna基因表达。结论可通过lmna-MO和重组质粒lmna-EGFP-pCS~(2+)共注射方法下调斑马鱼lmna基因表达,并通过绿色荧光蛋白表达量反映下调效果。该方法可为深入研究人核纤层病提供良好的动物模型。(本文来源于《中国比较医学杂志》期刊2016年08期）
林志鸿,谢良地,吴可贵,李庚山,蔺佩鸿[2]（2014）在《硫代磷酸化修饰的反义TGF-β_1寡核苷酸抑制血管损伤后内膜增殖》一文中研究指出目的:探讨反义转化生长因子β1(TGF-β1)寡核苷酸对血管损伤后血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转变的影响及对内膜增殖的作用。方法:在跨过TGF-β1cDNA序列的起始密码区ATG范围内,设计含15个碱基、无修饰或硫代磷酸化修饰的反义TGF-β1寡核苷酸(AS TGF-β1)及对照的正义(与反义寡核苷酸互补)寡核苷酸(S TGF-β1)。球囊导管损伤SD大鼠颈总动脉,术后7 d取出正常或损伤的血管进行VSMCs的培养,RT-PCR及蛋白印迹分别检测VSMCs生物学标志平滑肌22α蛋白(SM22α)、基质Gla蛋白和骨桥蛋白,以及TGF-β1和纤维连结蛋白(fibronectin,FN)mRNA和蛋白质的表达。采用ALZET泵皮下注射硫代磷酸化修饰AS TGF-β1及S TGF-β1(90μg·kg-1·d-1),连续给药28 d后测定血管内膜与中膜的面积比(I/M)。结果:(1)AS TGF-β1对血管损伤后VSMCs TGF-β1mRNA表达并无明显作用,但呈浓度依赖性抑制TGF-β1蛋白质的表达,而S TGF-β1不影响TGF-β1mRNA和蛋白质的表达。(2)AS TGF-β1呈浓度依赖性抑制血管损伤后VSMCs DNA的合成,而不管是AS TGF-β1还是S TGF-β1对正常VSMCs DNA的合成均无明显的量效作用;同时AS TGF-β1显着抑制了血管损伤后VSMCs FN的合成。(3)AS TGF-β1显着促进了VSMCs SM22αmRNA的表达,但抑制了基质Gla蛋白和骨桥蛋白mRNA的表达,这种相反的作用在0.01及0.1μmol/L的水平最为明显。(4)硫代磷酸化修饰的AS TGF-β1治疗28 d后,显着抑制了颈动脉损伤后新生内膜的增殖,I/M比对照组下降了68%。结论:AS TGF-β1特异性抑制了VSMCs TGF-β1蛋白的表达,抑制血管损伤后VSMCs增殖及合成、分泌FN,减轻血管损伤后新生内膜的增殖。上述作用可能与逆转血管损伤后VSMCs的表型转变有关。(本文来源于《中国病理生理杂志》期刊2014年08期）
李康,齐向云,李庆平,夏燕平,杨静[3]（2014）在《硫代磷酸反义寡核苷酸prop5对流感病毒进入细胞的抑制作用》一文中研究指出目的研究硫代磷酸反义寡核苷酸prop5对流感病毒感染进入细胞的影响。方法采用流感病毒感染A549细胞模型,设立随机序列(prop5R)和正义序列(prop5S)作为阴性对照,收集细胞培养液,采用实时荧光定量PCR检测病毒RNA拷贝数,评价反义寡核苷酸对病毒吸附和进入的影响;进一步通过血凝抑制实验检测prop5对流感病毒吸附细胞的影响,溶血抑制实验检测prop5对流感病毒进入细胞的影响。结果 prop5能够抑制流感病毒A/Jingfang/1/86(H1N1)感染A549细胞,对流感病毒吸附细胞过程没有影响,prop5能够抑制A/Jingfang/1/86(H1N1)、A/Lufang/9/93(H3N2)、A/FM/1/47(H1N1)和A/PR/8/34(H1N1)介导的膜融合。结论 prop5能抑制流感病毒进入细胞,这种额外的活性增强了prop5的抗病毒能力。(本文来源于《国际药学研究杂志》期刊2014年01期）
贾巧云,邓新秀,高婵,鲁丹丹,游松[4]（2013）在《反相离子对高效液相色谱法分析硫代反义寡核苷酸CT102相关杂质》一文中研究指出目的:建立硫代反义寡核苷酸CT102及其相关杂质的反相离子对高效液相色谱(IP-RP-HPLC)分析方法。方法:对可能存在的3'n-1、5'n-1序列、5'(P=S/O)不完全硫代序列与CT102全长序列(n)的分离情况进行了考察,采用的色谱柱为XBridge OST C18 Column(50 mm×4.6 mm,2.5μm);流动相A为100 mmol.L-1 HFIP/31.6 mmol.L-1 TEA,10%甲醇(V/V));流动相B为100 mmol.L-1HFIP/31.6 mmol.L-1TEA,20%甲醇,洗脱梯度为0～12 min,17%→43%B;柱温为55℃;流速为0.4 mL.min-1;检测波长为260 nm。结果:在优化的条件下,合成过程中的主要杂质5'n-1、3'n-1以及5'(P=S/O)均能够实现与全长全硫代序列n基线分离。该法用于含量测定,CT102在50-600μg·mL-1浓度范围内线性良好,r=0.9999,检出限为2.5μg·mL-1,精密度与重现性良好,RSD小于2%,平均回收率为100.1%,(RSD=1.7%,n=9)。结论:该方法可应用于CT102原料药的纯度检测和含量测定,为该药物的深入研究提供保证。(本文来源于《药物分析杂志》期刊2013年07期）
李彪[5]（2013）在《聚合酶—内切酶扩增反应（PEAR）制备硫代和2’-氟修饰寡核苷酸及其促凋亡活性的初步研究》一文中研究指出人工合成的寡核苷酸（ODNS）广泛应用于基因的诊断和治疗。作为一种有效的基因表达调节工具，反义寡核苷酸已经发展成为一种新型的靶向基因治疗药物。未修饰的天然寡核苷酸容易被内源性核酸酶所降解，而且有些还发现具有严重的副作用。然而带有合适的化学修饰基团的寡核苷酸，在体内具有较强的稳定性，副作用小，比相应的未修饰的寡核苷酸更具有活力。目前寡核苷酸几乎都是使用DNA合成仪进行化学合成，大规模的制备和纯化十分困难，不仅设备成本非常高，而且使用危险化学品。在之前的研究中，我们提出了一种用于大量制备反义寡核苷酸的核酸扩增技术—聚合酶-内切酶扩增反应（Polymerase-endonuclease amplification reaction, PEAR）。在本文中的第一部分，我们用PEAR技术制备了硫代磷酸修饰和2’-氟修饰的反义寡核苷酸，利用电喷雾液相色谱-质谱联用技术（ESI/LC/MS）对PEAR产物进行检测，分析了PEAR产物的各个组分。分析结果显示PEAR产物的纯度高达100.0%。PEAR产物的双链可用反向高效液相色谱(RP-HPLC)技术进行拆分和纯化，获得正义链和反义链。利用PEAR技术，通过“滑动-切割”的机制，能够使用少量的化学合成的寡核苷酸种子，制备大量的高纯度的目标寡核苷酸。与化学合成的方法相比，具有成本低，纯度高，易纯化，易大量制备等优点。证明了PEAR技术可以作为大量制备修饰的反义寡核苷酸的一种工具。文章的第二部分，我们检测了PEAR产物的生物学活性。一般情况下反义寡核苷酸是以单链形式在细胞中或者体内发挥作用的。PEAR的产物为双链寡核苷酸的重复序列，使用之前必须将PEAR产物进行完全酶切和分离双链。据报道，双链寡核苷酸能够更有效地抑制基因表达，据此我们推断PEAR制备的双链寡核苷酸也应该能够有效地抑制基因表达。据报道，miR-30家族能够通过抑制p53基因的途径，来抑制细胞的凋亡，促进细胞的癌变。因此我们把miR-30a作为研究目标，利用PEAR技术制备靶向作用于miR-30a的双链寡核苷酸重复序列（anti-miR-30a），用脂质体转染技术导入胃癌细胞，利用流式细胞仪检测胃癌细胞的凋亡率。转染后24h检测结果显示，未修饰的anti-miR-30a和2’-氟修饰的anti-miR-30a处理组，细胞的凋亡率要显着高于空白对照组，而且2’-氟修饰的anti-miR-30a处理组的促进细胞凋亡的效率相对更明显。所以我们初步推断用PEAR技术制备靶向作用于miR-30a的寡核苷酸重复序列，能够抑制胃癌细胞中miR-30a的表达，进而促进p53基因的表达，使细胞凋亡率增加，而且2’-氟修饰的比未修饰的寡核苷酸重复序列稳定性要强，抑制效果更好。因此我们初步推测PEAR制备的寡核苷酸双链重复DNA具有特异性地抑制基因表达的生物学活性，但尚需进一步实验证实此现象，并研究其作用机制。(本文来源于《中国海洋大学》期刊2013-06-02）
高秀梅,孙大鹏,张凤香[6]（2012）在《全硫代反义寡核苷酸对乳腺癌MDA-MB-231细胞的影响》一文中研究指出目的本研究探讨全硫代反义寡核苷酸(PS-ASODN)对乳腺癌MDA-MB-231细胞端粒酶活性及细胞生长、迁移、侵袭的影响。方法本实验将PS-ASODN经脂质体转染作用于乳腺癌MDA-MB-231细胞,将实验分为空白对照组、对照正义全硫代寡核苷酸(PS-SODN)组和不同剂量的PS-ASODN组;脂质体介导的PS-ASODN和PS-SODN作用于乳腺癌MDA-MB-231细胞后,分别采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)、酶联免疫吸附法(ELISA)、流式细胞术、Transwell小室迁移、侵袭实验检测细胞的体外增殖、端粒酶活性、细胞凋亡、细胞迁移、侵袭能力的影响。结果终浓度为1、3及5μmol/L的PS-ASODN对MDA-MB-231细胞端粒酶活性及细胞的增殖均有抑制作用,与空白对照组比较差异显着(P<0.01),并呈一定剂量依赖性;ELISA法检测结果,1、3及5μmol/L的PS-ASODN对MDA-MB-231细胞作用72 h后端粒酶皆为阴性,表明端粒酶PS-ASODN能够抑制端粒酶活性,对照组端粒酶皆为阳性。1、3及5μmol/L的PS-ASODN作用24 h可以明显抑制MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力(P<0.01)。结论 PS-ASODN能有效抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的生长、促进凋亡、抑制其侵袭和迁移能力,其机制可能是通过PS-ASODN降低端粒酶活性而实现。(本文来源于《山东医药》期刊2012年16期）
崔凯,李洪秀,鞠培新,秦书俭[7]（2012）在《全硫代反义寡核苷酸对骨肉瘤细胞生长及端粒酶活性的影响》一文中研究指出目的采用针对人端粒酶hTR基因的反义寡聚脱氧核苷酸,探讨端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸(ASODN)对骨肉瘤细胞HOS细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响。方法脂质体介导的细胞转染后,PS-ASODN和PS-SODN分别作用于骨肉瘤细胞HOS细胞后并培养24、48、72h,分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)、吖啶橙染色法检测骨肉瘤细胞HOS细胞的端粒酶活性、细胞形态改变。结果端粒酶PS-ASODN作用骨肉瘤细胞HOS细胞72h后端粒酶活性表达为阴性。PS-ASODN作用的骨肉瘤细胞HOS细胞有明显凋亡现象,凋亡细胞体积缩小,染色质浓缩。结论 PS-ASODN对端粒酶活性的抑制率与PS-ASODN的浓度和作用时间呈依赖关系,即抑制率随着反义寡核苷酸的浓度和作用时间的增加而增大。(本文来源于《中国实用医药》期刊2012年07期）
王颖,鲁丹丹,张玉林,高婵,李树[8]（2011）在《离子对反相液相色谱法分析硫代寡核苷酸药物流感泰得的有关物质》一文中研究指出建立了离子对反相液相色谱(IP-RPLC)分析流感泰得(Flutide)有关物质的方法,并将其与其它两种常用方法(离子交换色谱(IEC)和毛细管凝胶电泳(CGE)法)的分析结果进行比较。合成了Flutide及其单核苷酸缩短序列5'n-1、3'n-1和单氧代序列5'(P=O)1,将它们作为已知杂质,在IP-RPLC上进行分离条件的优化,使用的分析柱为XTerra MS C18柱(250 mm×4.6 mm,3.5μm);流动相A为142 mmol/L HFIP-36 mmol/L TEA-10%甲醇(V/V),流动相B为甲醇;梯度洗脱;流速为0.5 mL/min;柱温为50℃;检测波长为260 nm。结果表明,在该条件下,Flutide能同时与这几种杂质进行分离,其中与缩短序列5'n-1和3'n-1可实现基线分离,而与5'(P=O)1之间的分离度也能达到0.94。所建立的IP-RPLC方法已成功应用于Flutide粗品和纯品中各类杂质的分析和鉴定。(本文来源于《分析化学》期刊2011年12期）
倪伟民,郭闻师,衣服新,邱建武,刘兴波[9]（2010）在《全硫代反义寡核苷酸对脑胶质瘤细胞端粒酶活性作用》一文中研究指出目的本研究采用针对人端粒酶hTR基因的反义寡聚脱氧核苷酸,探讨端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸(antisense oligodeoxy nucleotides,ASODN)对脑胶质瘤HO-8910细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响。方法本实验将互补于hTR模板区的全硫代修饰型反义寡核苷酸(PS-ASODN)经lipotap脂质体转染作用于脑胶质瘤细胞系C6,然后分别采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色实验、酶联免疫吸附试验(ELISA)法和流式细胞术检测C6脑胶质瘤细胞的体外增殖、端粒酶活性、细胞凋亡和细胞周期的改变。结果经MTT法检测,PS-ASODN对C6细胞生长具有明显的抑制作用和诱导细胞凋亡,1.0μMPS-ASODN处理后24h细胞生长抑制率为12.93%,且随着时间的延长,抑制作用逐渐增强;给药72h对细胞生长抑制率达到最高,为50.81%,有相应的浓度依赖关系。ELISA法检测结果 ,0.5～1.5μM的PS-ASODN对C6细胞作用72h后端粒酶皆为阴性,表明PS-ASODN能够抑制端粒酶活性,对照组端粒酶皆为阳性。结论端粒酶PS-ASODN对体外培养的脑胶质瘤C6细胞的增殖有明显的浓度、时间依赖性抑制作用;抑制脑胶质瘤C6的端粒酶活性和诱导C6脑胶质瘤细胞发生凋亡,可能是端粒酶PS-ASODN抑制C6细胞增殖的主要机制。(本文来源于《解剖科学进展》期刊2010年03期）
刘学,单伟,曾瑞霞,房艳,李德华[10]（2009）在《全硫代反义寡核苷酸对卵巢癌细胞生长抑制作用》一文中研究指出目的采用针对人端粒酶hTR基因的反义寡聚脱氧核苷酸,探讨端粒酶反义寡聚脱氧核苷酸(antisense oligodeoxy nucleotides,ASODN)对卵巢癌HO-8910细胞端粒酶活性及细胞增殖的影响。方法将实验分为空白对照组、脂质体对照组、端粒酶全硫代正义寡聚脱氧核苷酸(Phosphorathioatesense oligodeoxy nucleotides,PS-SODN)组和不同剂量的全硫代反义寡聚脱氧核苷酸(Phosphorat-hioate an-tisense oligodeoxy nucleotides,PS-ASODN)组;②脂质体介导的细胞转染后,PS-ASODN和PS-SODN分别作用于卵巢癌HO-8910细胞后并培养24、48、72h,分别采用酶联免疫吸附法(ELISA)、吖啶橙染色法、四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)、流式细胞术检测HO-8910细胞的端粒酶活性、细胞形态、体外增殖、细胞凋亡和细胞周期的改变。结果ELISA法检测结果显示端粒酶PS-ASODN作用卵巢癌HO-8910细胞72h后端粒酶活性表达为阴性,说明端粒酶PS-ASODN能够抑制端粒酶活性;②吖啶橙染色观察细胞形态:PS-ASODN作用的卵巢癌HO-8910细胞有明显凋亡现象,凋亡细胞体积缩小,染色质浓缩,说明PS-ASODN能够促进卵巢癌HO-8910细胞凋亡;③MTT实验:PS-ASODN明显抑制卵巢癌HO-8910细胞的增殖(P<0.0l),并呈一定剂量和时间依赖关系;④流式细胞仪检测细胞凋亡和周期:与空白对照组比较,PS-ASODN组G0/G1期细胞明显增多,差异显着(P<0.01);在G0/G1期前出现亚二倍体凋亡峰,表明细胞被阻止在G1/S期。结论PS-ASODN作用于卵巢癌HO-8910细胞后,卵巢癌HO-8910细胞增殖受到明显抑制,并出现凋亡;②PS-ASODN对端粒酶活性的抑制率与PS-ASODN的浓度和作用时间呈依赖关系,即抑制率随着反义寡核苷酸的浓度和作用时间的增加而增大;③以端粒酶RNA模板区为靶点的PS-ASODN明显抑制卵巢癌HO-8910细胞的增殖,其机制可能是通过降低细胞的端粒酶活性而诱发细胞的凋亡,PS-ASODN对卵巢癌的治疗具有重要价值。(本文来源于《中国实用医药》期刊2009年08期）
硫代寡核苷酸论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:探讨反义转化生长因子β1(TGF-β1)寡核苷酸对血管损伤后血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转变的影响及对内膜增殖的作用。方法:在跨过TGF-β1cDNA序列的起始密码区ATG范围内,设计含15个碱基、无修饰或硫代磷酸化修饰的反义TGF-β1寡核苷酸(AS TGF-β1)及对照的正义(与反义寡核苷酸互补)寡核苷酸(S TGF-β1)。球囊导管损伤SD大鼠颈总动脉,术后7 d取出正常或损伤的血管进行VSMCs的培养,RT-PCR及蛋白印迹分别检测VSMCs生物学标志平滑肌22α蛋白(SM22α)、基质Gla蛋白和骨桥蛋白,以及TGF-β1和纤维连结蛋白(fibronectin,FN)mRNA和蛋白质的表达。采用ALZET泵皮下注射硫代磷酸化修饰AS TGF-β1及S TGF-β1(90μg·kg-1·d-1),连续给药28 d后测定血管内膜与中膜的面积比(I/M)。结果:(1)AS TGF-β1对血管损伤后VSMCs TGF-β1mRNA表达并无明显作用,但呈浓度依赖性抑制TGF-β1蛋白质的表达,而S TGF-β1不影响TGF-β1mRNA和蛋白质的表达。(2)AS TGF-β1呈浓度依赖性抑制血管损伤后VSMCs DNA的合成,而不管是AS TGF-β1还是S TGF-β1对正常VSMCs DNA的合成均无明显的量效作用;同时AS TGF-β1显着抑制了血管损伤后VSMCs FN的合成。(3)AS TGF-β1显着促进了VSMCs SM22αmRNA的表达,但抑制了基质Gla蛋白和骨桥蛋白mRNA的表达,这种相反的作用在0.01及0.1μmol/L的水平最为明显。(4)硫代磷酸化修饰的AS TGF-β1治疗28 d后,显着抑制了颈动脉损伤后新生内膜的增殖,I/M比对照组下降了68%。结论:AS TGF-β1特异性抑制了VSMCs TGF-β1蛋白的表达,抑制血管损伤后VSMCs增殖及合成、分泌FN,减轻血管损伤后新生内膜的增殖。上述作用可能与逆转血管损伤后VSMCs的表型转变有关。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
硫代寡核苷酸论文参考文献
[1].刘丰,黄慧敏,王志华,吴西军,何志旭.利用吗啉代寡核苷酸技术下调早期斑马鱼胚胎lmna基因的初步研究[J].中国比较医学杂志.2016
[2].林志鸿,谢良地,吴可贵,李庚山,蔺佩鸿.硫代磷酸化修饰的反义TGF-β_1寡核苷酸抑制血管损伤后内膜增殖[J].中国病理生理杂志.2014
[3].李康,齐向云,李庆平,夏燕平,杨静.硫代磷酸反义寡核苷酸prop5对流感病毒进入细胞的抑制作用[J].国际药学研究杂志.2014
[4].贾巧云,邓新秀,高婵,鲁丹丹,游松.反相离子对高效液相色谱法分析硫代反义寡核苷酸CT102相关杂质[J].药物分析杂志.2013
[5].李彪.聚合酶—内切酶扩增反应（PEAR）制备硫代和2’-氟修饰寡核苷酸及其促凋亡活性的初步研究[D].中国海洋大学.2013
[6].高秀梅,孙大鹏,张凤香.全硫代反义寡核苷酸对乳腺癌MDA-MB-231细胞的影响[J].山东医药.2012
[7].崔凯,李洪秀,鞠培新,秦书俭.全硫代反义寡核苷酸对骨肉瘤细胞生长及端粒酶活性的影响[J].中国实用医药.2012
[8].王颖,鲁丹丹,张玉林,高婵,李树.离子对反相液相色谱法分析硫代寡核苷酸药物流感泰得的有关物质[J].分析化学.2011
[9].倪伟民,郭闻师,衣服新,邱建武,刘兴波.全硫代反义寡核苷酸对脑胶质瘤细胞端粒酶活性作用[J].解剖科学进展.2010
[10].刘学,单伟,曾瑞霞,房艳,李德华.全硫代反义寡核苷酸对卵巢癌细胞生长抑制作用[J].中国实用医药.2009
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