维氏气单胞菌AcrV基因的克隆与原核表达

论文摘要

【目的】克隆维氏气单胞菌（Aeromonas veronii）低钙反应蛋白（AcrV）并进行原核表达,为进一步研究AcrV蛋白的结构功能及AcrV基因工程亚单位疫苗的制备奠定基础。【方法】克隆维氏气单胞菌TH0426菌株AcrV基因,通过生物信息学软件分析其编码蛋白的理化性质、疏水性、信号肽、跨膜区、二级结构及三级结构。将AcrV基因克隆到pET-30a（+）原核表达载体上,构建原核重组表达质粒pET-30a（+）-AcrV,将其转化至大肠杆菌BL21（DE3）中,进行EcoRⅤ和XhoⅠ双酶切鉴定和测序鉴定。用IPTG对pET-30a（+）-AcrV进行诱导表达,对IPTG浓度（0.2,0.4,0.6和0.8 mmol/L）和诱导时间（2,3,4和5 h）进行优化。在最佳条件下诱导表达重组蛋白AcrV,经镍柱纯化且尿素梯度复性后免疫BALB/c小鼠,制备多克隆抗体,进行SDS-PAGE及Western blot分析,对目的蛋白的免疫原性进行检测。【结果】成功获得了1 086 bp的AcrV全基因,编码361个氨基酸。AcrV蛋白是无跨膜结构且不编码信号肽的蛋白,有2个高度保守的结构功能域,属于全α型蛋白。成功构建了原核重组表达质粒pET-30a（+）-AcrV,其最佳诱导表达条件为IPTG 0.8 mmol/L诱导5 h。SDS-PAGE及Western blot分析结果显示,AcrV蛋白能被鼠抗阳性血清识别,表明其具有一定的反应原性。【结论】成功克隆了1 086 bp的AcrV基因,分析了其编码蛋白的生物信息;获得了免疫原性良好的重组AcrV蛋白。

论文目录

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 孔祎頔,田佳鑫,赵林辉,陈秀梅,单晓枫,王桂芹

关键词: 维氏气单胞菌,基因,原核表达,生物信息学分析

来源: 西北农林科技大学学报(自然科学版) 2019年11期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,水产和渔业

单位: 吉林农业大学动物科学技术学院

基金: 吉林省重点科技攻关项目(20170204032NY),国家现代农业(特色淡水鱼)产业技术体系建设专项(CARS-46)

分类号: S943;Q78

DOI: 10.13207/j.cnki.jnwafu.2019.11.002

页码: 8-15

总页数: 8

文件大小: 1004K

下载量: 165

相关论文文献

• [1].豚鼠气单胞菌致乙肝肝硬化患者严重感染一例[J]. 临床内科杂志 2020(06)
• [2].3种方法鉴定气单胞菌临床分离株效果分析[J]. 疾病监测 2019(01)
• [3].水产动物气单胞菌疾病研究进展浅析[J]. 渔业致富指南 2018(10)
• [4].狐源豚鼠气单胞菌的分离鉴定[J]. 中国兽医科学 2016(12)
• [5].罗氏沼虾豚鼠气单胞菌的分离鉴定[J]. 中国农学通报 2020(33)
• [6].南美白对虾病原性豚鼠气单胞菌的分离与药敏特性[J]. 水产养殖 2020(01)
• [7].猪源气单胞菌分离鉴定及耐药谱检测[J]. 动物医学进展 2019(07)
• [8].2017年安徽省马鞍山市环境来源气单胞菌的分子特征和耐药分析[J]. 疾病监测 2019(09)
• [9].开封市鱼类产品及相关水体中气单胞菌的污染状况[J]. 职业与健康 2016(10)
• [10].鲈鱼豚鼠气单胞菌的鉴定及其药敏试验[J]. 动物医学进展 2014(09)
• [11].猪肉解冻过程中损伤型气单胞菌检测方法的优化[J]. 食品与发酵工业 2012(06)
• [12].鱼类致病性豚鼠气单胞菌单克隆抗体-胶体金检测方法的建立[J]. 水生生物学报 2010(03)
• [13].气单胞菌及其感染研究进展[J]. 华北煤炭医学院学报 2008(06)
• [14].库拉索芦荟提取物对两种气单胞菌的抑菌作用[J]. 中国兽医杂志 2019(11)
• [15].气单胞菌对水生动物的危害及噬菌体防控研究进展[J]. 水产养殖 2019(02)
• [16].餐饮与公共场所从业人员气单胞菌携带情况调查[J]. 中国消毒学杂志 2018(04)
• [17].62例豚鼠气单胞菌感染病例的临床特征和耐药性分析[J]. 中华医院感染学杂志 2018(24)
• [18].2010-2016年重庆一医院肠道外气单胞菌耐药性分析[J]. 中国感染与化疗杂志 2017(06)
• [19].气单胞菌肠道感染的临床特点和耐药特征分析[J]. 国际检验医学杂志 2014(08)
• [20].克氏原螯虾源致病性豚鼠气单胞菌的分离及其生物学特性[J]. 水生生物学报 2014(06)
• [21].维氏气单胞菌的分离鉴定及系统进化分析[J]. 中国兽医杂志 2011(01)
• [22].一起由豚鼠气单胞菌引起食物中毒的调查[J]. 右江民族医学院学报 2008(06)
• [23].江苏省2013-2014年腹泻源性气单胞菌流行状况及耐药特征[J]. 江苏预防医学 2019(03)
• [24].瓯江彩鲤简达气单胞菌的16S rDNA分子鉴定与药敏分析[J]. 黑龙江畜牧兽医 2012(23)
• [25].中华鳖病原维氏气单胞菌的分子鉴定及分子分类学研究[J]. 河北师范大学学报(自然科学版) 2011(04)
• [26].肠外感染气单胞菌的临床分布与毒力基因分析[J]. 中国消毒学杂志 2019(06)
• [27].浦口某养殖场气单胞菌的分离鉴定和耐药特性分析[J]. 安徽农业大学学报 2018(04)
• [28].乌鳢舒氏气单胞菌的分离鉴定及药敏试验[J]. 中国兽药杂志 2016(02)
• [29].齐口裂腹鱼肠道气单胞菌的分离鉴定[J]. 食品工业科技 2014(23)
• [30].中华绒螯蟹点状产气单胞菌的分离鉴定与药敏试验[J]. 动物医学进展 2015(08)

标签：维氏气单胞菌论文;  基因论文;  原核表达论文;  生物信息学分析论文;