导读:本文包含了哺乳细胞表达论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:细胞,蛋白,线粒体,哺乳动物,抗体,密码子,视紫红质。
哺乳细胞表达论文文献综述
张长发,罗世明[1]（2019）在《哺乳动物细胞中异位表达线粒体基因MT-ND3》一文中研究指出线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)突变是导致线粒体疾病的重要因素,目前针对这一类疾病还没有有效的治疗方案。在细胞质中表达线粒体基因称为线粒体基因的异位表达,被认为是一种潜在的治疗mtDNA疾病的方法,但并没有一种统一的信号肽能够将所有线粒体基因导入至线粒体中。本研究探讨了利用异位表达将线粒体蛋白ND3定位至线粒体的可行性,主要发现:(1)在无信号肽的情况下,ND3蛋白自身并不能定位至线粒体,而是定位在内质网上;(2)Rg9mtd1的信号肽可以将ND3蛋白成功导入线粒体中;(3)定位至线粒体的ND3蛋白对线粒体膜电位、活性氧的产生以及细胞增殖均无显着影响,但对线粒体基因的表达方式有调整作用。以上结果表明,异位表达ND3质粒能正确表达和定位,并具有一定的功能性,这为MT-ND3异位表达治疗相关疾病提供了理论支持和技术方案。(本文来源于《青岛农业大学学报(自然科学版)》期刊2019年04期）
王志强,贺璇,李思维,田佳,徐龙宽[2]（2019）在《Yes相关蛋白、哺乳动物不育系20样激酶1、细胞周期蛋白D1在鼻咽癌中的表达及临床意义》一文中研究指出目的探讨Yes相关蛋白(YAP)、哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)及细胞周期蛋白D1(CyclinD1)在鼻咽癌中的表达及与鼻咽癌临床病理特征的关系。方法应用免疫组织化学染色方法检测YAP、MST1、CyclinD1在鼻咽黏膜慢性炎组织和鼻咽癌组织中的表达。结果 YAP及CyclinD1在鼻咽癌组织中的表达均高于鼻咽黏膜慢性炎组织(P <0.05),MST1在鼻咽癌组织中的表达低于鼻咽黏膜慢性炎组织(P <0.05)。YAP、CyclinD1与病理分型相关(P <0.05),而MST1与病理分型无相关性(P>0.05);叁者与患者的性别、年龄、生存时间、淋巴结转移、临床分期、远处转移、复发及生存状态无相关性(P>0.05)。在鼻咽癌组织内,YAP与CyclinD1、MST1与CyclinD1呈正相关(P <0.05),YAP与MST1无相关性(P>0.05)。结论 YAP和CyclinD1蛋白的高表达、MST1蛋白的低表达可能与鼻咽癌的发生、发展有关,叁者有望成为治疗鼻咽癌的新靶点。(本文来源于《中国现代医学杂志》期刊2019年09期）
高福兰,齐家龙,舒聪妍,谢航航,黄惟巍[3]（2019）在《序列优化的小鼠IL-33基因在哺乳动物细胞中的有效分泌表达》一文中研究指出目的:白细胞介素(IL)-33具有重要的免疫调控作用,在疾病中扮演着重要的角色。本文旨在通过基因优化实现IL-33在哺乳动物细胞中的高效表达,为疾病机理研究以及疫苗免疫佐剂应用等提供基础。方法:根据小鼠白细胞介素-33成熟肽(m IL-33)的氨基酸序列,以哺乳动物细胞基因表达密码子偏好性进行基因优化设计;化学合成优化的m IL-33基因片段,通过搭桥PCR将编码人CD8α信号肽的核酸序列分别与优化或未优化的m IL-33基因连接,并与绿色荧光蛋白(EGFP)基因分别构建到双表达单元质粒p Bud CE4. 1的不同启动子下;重组质粒经lipofectamine 3000和PEI转染293FT细胞;以Western blot和ELISA检测重组蛋白的表达;收集表达的m IL-33刺激巨噬细胞Raw264. 7,ELISA检测培养上清的TNFα水平,以证明IL-33的生物学活性。结果:重组质粒经酶切鉴定及测序分析证实构建成功; lipofectamine 3000转染效率较PEI转染更高; Western blot和ELISA结果显示密码子优化的m IL-33表达水平较未优化序列更高,在EF-1α启动子和CMV启动子指导下m IL-33在293FT细胞表达水平相当,CD8α信号肽成功引导m IL-33的分泌,产物具生物学活性。结论:密码子优化操作显着改善了m IL-33在哺乳动物细胞中的表达水平,为进一步研究奠定了基础。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2019年03期）
李琳琳,项保利,薛乾隆[4]（2018）在《西罗莫司对肺癌细胞增殖及哺乳动物西罗莫司靶蛋白信号通路相关蛋白表达的影响》一文中研究指出目的研究西罗莫司对肺癌细胞增殖及哺乳动物西罗莫司靶蛋白(mTOR)信号通路相关蛋白表达的影响。方法分别用0.1,1.0,10.0,100.0nmol·L~(-1)西罗莫司处理肺癌细胞株A549及H1299,作为实验组,对照组细胞以等量生理盐水处理。以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测处理72 h后肺癌细胞株增殖抑制情况,判定西罗莫司的敏感株;用蛋白免疫印迹法检测西罗莫司处理前后敏感株mTOR信号通路磷酸化核糖蛋白S6激酶1(p-S6K1)表达情况。结果对照组及0.1,1.0,10.0,100.0 nmol·L~(-1)实验组肺癌细胞A549增殖抑制率分别为(11.03±1.01)%,(30.15±0.98)%,(53.68±0.99)%,(56.62±1.21)%;肺癌细胞H1299增殖抑制率分别为(3.39±1.03)%,(4.24±1.02)%,(5.08±0.98)%,(7.62±0.96)%。随着西罗莫司作用浓度增大,肺癌细胞A549增殖抑制率逐渐升高(P<0.01),而肺癌细胞H1299增殖抑制率差异无统计学意义(P>0.05),肺癌细胞A549为西罗莫司敏感株,而肺癌细胞H1299对西罗莫司不敏感。蛋白免疫印迹法检测显示,mTOR信号通路上游蛋白AKT及下游核糖蛋白S6激酶1(S6K1)、4E-BP1和e IF4E在肺癌细胞A549及H1299中均阳性表达,而p-S6K1仅在肺癌细胞A549中表达,且随着西罗莫司干预时间的延长肺癌细胞A549中p-S6K1表达量逐渐降低,且在干预6 h时基本呈阴性表达。结论西罗莫司可有效抑制敏感肺癌细胞株增殖,其作用机制可能与下调mTOR信号通路p-S6K1蛋白表达相关。(本文来源于《中国临床药理学杂志》期刊2018年14期）
丛佩清,陈笑霞,邓庆丽,谭红铭,陆勇军[5]（2018）在《引入哺乳动物细胞表达系统,优化“生物技术综合实验”课程体系》一文中研究指出一门必修课的教学体系应该保持相对稳定的教学内容,以利于教学活动的顺利开展和知识的正确传承。但是,如何随着学科的发展而与时俱进,逐渐增删相关内容,以实现"常教常新"的教学目标,值得探讨。中山大学生命科学学院在必修课程"生物技术综合实验""一条龙"进行大肠杆菌表达实验体系的基础上,根据近年来哺乳动物表达系统已成为生物技术领域重要研究手段的趋势,对原有课程内容进行了延伸,增加了哺乳动物细胞培养和哺乳动物细胞转染实验操作的选修单元,并尝试采用"自由组合、教师指导、自主开展"的方式开展教学。经过教学实践,取得了良好效果。学生不仅掌握了相关实验操作技能,还在团队合作、分析问题和解决问题的能力等方面得到了进一步提高。(本文来源于《高校生物学教学研究(电子版)》期刊2018年03期）
马明蕾[6]（2018）在《甲藻视紫红质基因在哺乳动物细胞中表达系统的构建以及亚细胞定位研究》一文中研究指出浮游植物的生命活动所消耗的能量源自太阳光能,光合作用是浮游植物固定光能的最主要形式。近年来,在包括浮游植物和细菌在内的海洋微型生物中发现的视紫红质被认为是光能捕获蛋白,该蛋白通过捕获光能并能在细胞膜内外形成离子梯度进而合成ATP,即无需通过光合系统I和光合系统II也可将光能转化为化学能,被认为是能够独立于光合系统之外的能量转化蛋白。视紫红质分布于许多微生物门类中,包括古菌、细菌、真菌和藻类,是一种光驱动型跨膜蛋白。根据其功能的不同,视紫红质可以划分为质子泵型视紫红质和离子泵型视紫红质,阳离子通道以及光感受器。根据基因序列比对甲藻中亦发现存在视紫红质基因,且根据氨基酸序列比对很可能属于光驱动质子泵型视紫红质。现已有研究发现东海原甲藻Prorocentrum dongaiense的视紫红质的表达有很强的昼夜周期节律性,光周期表达水平较高,暗周期表达水平较低。异养型甲藻海洋尖尾藻Oxyrrhis marina饥饿处理时质子泵型视紫红质在有光照条件下的表达量高于黑暗条件,与其种群生长率相对应,初步证实这个蛋白可作为能量补充机制。但对甲藻视紫红质更为深入的研究尚待开展,至今还没有直接证据表明甲藻中的视紫红质蛋白的具体功能与作用机制,和其在细胞中的具体表达位置。本研究以课题组已知序列的东海原甲藻以及链状亚历山大藻Alexandrium catenella(原种名:Alexandrium fundyense)的视紫红质基因为目标基因,构建了能够表达这两种甲藻视紫红质基因的哺乳动物细胞表达系统,并在此系统中对东海原甲藻和链状亚历山大藻视紫红质进行了亚细胞定位。主要研究结果如下:(1)论文将东海原甲藻和链状亚历山大藻视紫红质基因重组至表达载体PB513B-1,构建了东海原甲藻视紫红质表达载体PB513B-PdRhod和链状亚历山大藻视紫红质表达载体PB513B-AcRhod。利用质粒共转染技术将PB513B-PdRhod与PB513B-AcRhod分别和转座酶表达载体PB200-PA共转染转入人的胚胎肾上皮细胞HEK293T细胞,借助Piggy Bac转座系统,构建了可以表达甲藻基因的哺乳动物细胞表达系统。(2)论文在成功构建表达甲藻基因的哺乳动物细胞表达系统的基础上,利用细胞免疫荧光技术对在哺乳动物细胞表达系统中表达的两种甲藻视紫红质基因进行了亚细胞定位,细胞免疫荧光结果显示东海原甲藻视紫红质蛋白以及链状亚历山大藻视紫红质蛋白在哺乳动物细胞表达系统当中均在细胞膜上表达。(本文来源于《厦门大学》期刊2018-05-01）
高鑫,韦攀健,闫卓红,易玲,王小珏[7]（2018）在《一株针对人EGFR的单链抗体克隆与哺乳细胞表达》一文中研究指出目的:制备特异性抗人表皮生长因子受体(EGFR)的单链抗体(sc Fv),鉴定其生物学活性,为进一步研究基于单链抗体的免疫治疗奠定基础。方法:从分泌抗人EGFR单克隆抗体的杂交瘤细胞系提取总RNA,利用5'RACE技术扩增轻链和重链可变区(VL、VH)基因,构建具有VL、VH基因的单链抗体基因,并将构建的单链抗体基因克隆到真核细胞表达载体pc DNA3.1中进行表达和鉴定。ELISA鉴定单链抗体对抗原的特异性;Fortebio检测抗原抗体间的亲和力,流式细胞术检测单链抗体结合肺癌细胞系天然EGFR的功能活性。结果:获得唯一的轻重链可变区序列VL、VH,成功构建EGFR-sc Fv,特异性与天然EGFR蛋白结合,亲和力达3.22×10-9mol/L。结论:成功构建了抗人EGFR单链抗体,为肺癌免疫导向治疗研究奠定了基础。(本文来源于《中国生物工程杂志》期刊2018年05期）
赵亚蕊,曹鹏程,郑耀武,张全爱,赵峰梅[8]（2017）在《人自分泌运动因子哺乳细胞表达纯化及酶学特性》一文中研究指出[目的]利用哺乳细胞表达系统表达人ATX蛋白,并对其进行纯化、酶学性质分析。[方法]以pFastBacTMHTAATX质粒为模板,PCR扩增ATX基因,并连接至质粒pInsulator-8His,构建真核表达质粒pInsulator-ATX-8His,经双酶切鉴定后,并瞬时转染至HEK293F细胞,SDS-PAGE检测ATX的表达。通过Ni柱和凝胶层析两步法纯化ATX,HPLC鉴定ATX蛋白的纯度。利用Bis-pNPP底物检测纯化ATX的活性及酶学性质。[结果]真核表达质粒pInsulator-ATX-8His构建成功,并在HEK293F细胞中成功表达,经纯化后ATX蛋白纯度达到98%,并且纯化的ATX具有磷酸二酯酶的活性。酶学性质分析,该酶反应最适pH值为9.0,在0~50℃有较好的热稳定性,金属螯合剂EDTA可抑制ATX活性,金属离子Ca~(2+)、Mg~(2+)、Zn~(2+)促进ATX的活性。[结论]实现了人ATX在哺乳细胞中的表达,获得了高纯度的ATX蛋白,完成了ATX酶学性质的分析。(本文来源于《生物技术》期刊2017年05期）
杨超,张芝晴,沈鸿霖,高双全,李少勇[9]（2017）在《人类免疫缺陷病毒1型gp140包膜蛋白叁聚体在哺乳动物细胞中的高效表达及其性质鉴定》一文中研究指出本研究目的是通过优化1型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)gp140编码基因的密码子和克隆设计,从而实现在293T哺乳动物细胞中高效表达,并对纯化获得的gp140蛋白进行抗原性质鉴定。在本研究中选择HIV-1B亚型NL4-3全基因序列为模板进行gp140克隆构建,通过密码子优化、信号肽替换、增加柔性linker、叁聚体折迭序列等方法优化设计。通过HIV-1转录反式激活因子tat共转HEK293T细胞进行gp140蛋白表达,采用镍柱纯化。SDS-PAGE、Western blot、ELISA、负染电镜等结果显示目的蛋白纯度高于70%,每升培养基可获得0.5mg gp140蛋白,并且具有良好的抗原活性,电镜下呈现叁聚体结构。通过弗氏佐剂与目的蛋白混合免疫Balb/c小鼠,检测小鼠免疫血清显示gp140蛋白能有效刺激机体产生免疫应答。本研究通过优化表达获得B亚型HIV-1NL4-3gp140蛋白,为HIV-1病毒包膜蛋白结构和重组疫苗研究奠定基础。(本文来源于《病毒学报》期刊2017年04期）
何曾安[10]（2017）在《人源哺乳动物细胞重组抗体表达系统的构建及相关因子筛选》一文中研究指出生物药物(biopharmaceuticals)是一类在生物体或活体细胞中生产的生物活性药物。与传统的小分子药物相比,以单克隆抗体为代表的生物药物具有高亲和性、高靶向特异性和低副作用等优点。近年来,重组型免疫球蛋白日益成为治疗癌症和免疫性疾病等顽固性病症的重要药物。与其他分泌型蛋白一样,分泌型重组免疫球蛋白同样具有一条由内质网(ER)经高尔基体(Golgi)最终输送至胞外的分泌途径。期间多种因子参与介导了免疫球蛋白的糖基化修饰、空间折迭、结构重组及转运等多个步骤。本研究旨在构建一个可监控重组型抗体表达和分泌的哺乳动物细胞表达系统,基于这一系统运用基因诱捕技术(gene-trapping)筛选参与抗体表达、分泌相关的因子。人源抗鸡蛋清溶菌酶抗体(HyHEL10)是一种晶体结构已知且表征良好的抗体,以鸡蛋清溶菌酶(HEL)作为相应抗原。本研究采用HyHEL10作为模式抗体在HEK293细胞株和人源单倍体HAP1细胞株中表达。实验将增强型绿色荧光蛋白单体(mEGFP)和FLAG标签融合在抗体重链N端,设计构建出E-F-HyHEL10分泌型重组抗体,以便监控抗体的表达和分泌情况。研究中通过流式细胞分析术检测EGFP的荧光信号可以监控HEK293 E-F-HyHEL10细胞内抗体的表达情况,利用免疫印迹法(Western blotting)和酶联免疫吸附测定(ELISA)可以检测分泌至胞外的抗体水平。流式细胞分析法可以灵敏地检测到布雷菲德菌素A(BFA)作为蛋白质分泌运输抑制剂处理后胞内抗体累积量的明显提升,BFA处理后抗体胞内累积量最高水平可达对照组的1.6倍。放线菌酮(CHX)作为有效的蛋白合成抑制剂抑制了抗体的合成,流式分析和ELISA可以检测到重组抗体表达分泌水平的改变。CHX处理后抗体的胞内累积量急剧下降至对照组的0.5倍。在HAP1人源单倍体细胞株中构建同样的抗体表达系统,用于基因组筛选。将基因诱捕载体整合入HAP1E-F-HyHEL10表达细胞株的基因组,利用piggyBac基因诱捕转座子进行随机突变,通过筛选富集具有高抗体表达水平的PB突变株。利用重组翻转酶(recombinase flippase,FLpe)进一步在分离得到的PB突变单克隆中构建FLPe回复突变细胞株。利用流式细胞分析术和ELISA对PB C4、PB C11、PB C13叁株突变单克隆及相应的回复突变株进行表型分析发现,突变株中抗体的表达和分泌均有明显提升,回复突变后抗体表达、分泌可恢复至初始细胞株水平。基因测序分析PB C4、PB C11和PB C13回复突变株中的piggyBac基因诱捕转座子插入位点,可获得相应的捕获突变基因。本课题在HEK293人源细胞株中成功构建了HEK293 E-F-HyHEL10重组抗体表达、分泌系统。其中的E-F-HyHEL10重组抗体具有良好的生物学活性。此抗体表达细胞可以对蛋白质分泌及合成抑制剂的处理有灵敏的反应。重组抗体中融合的EGPF荧光蛋白标签可以实现抗体分泌、表达情况的良好检测。充分利用HAP1细胞株的单倍体基因组优势,基因诱捕获得突变单克隆细胞株均提升了抗体表达水平,相应的突变基因均有可能是与抗体表达、分泌相关的因子。(本文来源于《江南大学》期刊2017-06-01）
哺乳细胞表达论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的探讨Yes相关蛋白(YAP)、哺乳动物不育系20样激酶1(MST1)及细胞周期蛋白D1(CyclinD1)在鼻咽癌中的表达及与鼻咽癌临床病理特征的关系。方法应用免疫组织化学染色方法检测YAP、MST1、CyclinD1在鼻咽黏膜慢性炎组织和鼻咽癌组织中的表达。结果 YAP及CyclinD1在鼻咽癌组织中的表达均高于鼻咽黏膜慢性炎组织(P <0.05),MST1在鼻咽癌组织中的表达低于鼻咽黏膜慢性炎组织(P <0.05)。YAP、CyclinD1与病理分型相关(P <0.05),而MST1与病理分型无相关性(P>0.05);叁者与患者的性别、年龄、生存时间、淋巴结转移、临床分期、远处转移、复发及生存状态无相关性(P>0.05)。在鼻咽癌组织内,YAP与CyclinD1、MST1与CyclinD1呈正相关(P <0.05),YAP与MST1无相关性(P>0.05)。结论 YAP和CyclinD1蛋白的高表达、MST1蛋白的低表达可能与鼻咽癌的发生、发展有关,叁者有望成为治疗鼻咽癌的新靶点。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
哺乳细胞表达论文参考文献
[1].张长发,罗世明.哺乳动物细胞中异位表达线粒体基因MT-ND3[J].青岛农业大学学报(自然科学版).2019
[2].王志强,贺璇,李思维,田佳,徐龙宽.Yes相关蛋白、哺乳动物不育系20样激酶1、细胞周期蛋白D1在鼻咽癌中的表达及临床意义[J].中国现代医学杂志.2019
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[10].何曾安.人源哺乳动物细胞重组抗体表达系统的构建及相关因子筛选[D].江南大学.2017
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