导读:本文包含了原核表达研究论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:甘薯羽状斑驳病毒,甘薯褪绿矮化病毒,重组双CP基因,原核表达
原核表达研究论文文献综述
李恩广,郭宝太,杨雪,朱虹,王晶珊[1]（2019）在《甘薯羽状斑驳病毒和褪绿矮化病毒重组双CP融合基因的原核表达和抗血清的制备》一文中研究指出由褪绿矮化病毒(SPCSV)和羽状斑驳病毒(SPFMV)协生共侵染引起病毒病(SPVD)是甘薯最严重的病害之一。为了建立一种高效的甘薯病毒病SPVD检测体系,本研究构建了SPCSV和SPFMV重组双CP基因的原核表达载体pET22b-SPVD-CP,该重组菌在20℃条件下经IPTG诱导,获得了68kDa的融合蛋白(重组双CP)。利用高纯度重组双CP为抗原免疫家兔,获得了SPVD的抗血清,间接ELISA检测显示抗体稀释度在1∶512K的范围内,制备的抗体与抗原具有较强的结合活性。本研究结果为利用重组CP作抗原大量制备SPVD抗体奠定了基础。(本文来源于《青岛农业大学学报(自然科学版)》期刊2019年04期）
张庆田,范书田,艾军,秦红艳[2]（2019）在《软枣猕猴桃L-半乳糖内酯脱氢酶基因的克隆及原核表达分析》一文中研究指出为更好了解L-半乳糖内酯脱氢酶及编码基因在软枣猕猴桃中的生理功能及作用,以‘魁绿’软枣猕猴桃果实cDNA为模板,用RT-PCR及RACE技术,获得L-半乳糖酸-1,4-内酯脱氢酶基因AaGalLDH(GenBank:KP145007.1)。序列分析表明该基因全长为2 394 bp,开放阅读框为1 833 bp,编码610个氨基酸,与其它植物GalLDH氨基酸序列具有78%～95%的同源性。编码的蛋白序列具有GalLDH蛋白家族典型的保守结构域。进一步将该基因连接到原核表达载体并转化大肠杆菌进行诱导表达,经Western Blotting验证,目的基因在pET-28a表达系统中有表达,但基本为不溶性表达。这为进一步研究该酶蛋白的体外表达和功能以及选育高品质软枣猕猴桃品种奠定了基础。(本文来源于《山东农业科学》期刊2019年11期）
欧兰香,陈振,王佳颖,解光宁,王岩[3]（2019）在《重组人脂蛋白相关磷脂酶A2的原核表达及单克隆抗体制备》一文中研究指出目的构建重组人脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)的原核表达质粒,制备重组人Lp-PLA2,并通过免疫诱导获得人Lp-PLA2的单克隆抗体。方法以人cDNA文库为模板,通过PCR的方法获得PLA2G7基因的编码区序列,并与原核表达载体pET32a进行连接,构建原核表达质粒,转化大肠杆菌Rostta(DE3)。通过在30℃0.2mmol/L异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)条件下诱导蛋白表达,经过纯化获得重组人Lp-PLA2;免疫Balb/c小鼠,制备单克隆抗体;并通过酶联免疫吸附试验法测定效价,检测抗体特异性。结果通过NotⅠ和SalⅠ双酶切及测序证实原核表达质粒构建成功;经纯化得到47×103左右的蛋白,与Lp-PLA2抗体进行蛋白免疫印迹法杂交呈阳性,表明已得到重组人Lp-PLA2。通过对小鼠免疫,最终获得单克隆抗体,效价为1∶2×106,与纤维蛋白原、C-反应蛋白无交叉反应。结论成功获得重组人Lp-PLA2,并制备得到了效价较高的单克隆抗体,为后续Lp-PLA2检测试剂盒的开发奠定了基础。(本文来源于《国际检验医学杂志》期刊2019年22期）
张康,张璇,闫遵祥,王磊,张凯[4]（2019）在《牛病毒性腹泻病毒Core蛋白的原核表达及多克隆抗体制备》一文中研究指出为制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的Core蛋白及其多克隆抗体,根据Core蛋白的编码基因序列,设计合成一对特异性引物,利用RT-PCR扩增BVDV Core基因并定向插入Pet30a载体中,构建重组质粒Pet30a-Core,经酶切鉴定后转化大肠埃希菌TOP 10感受态细胞,筛选获得阳性重组菌,以IPTG进行诱导后成功表达出分子质量为20 ku的重组Core蛋白。将诱导表达的蛋白产物经融合蛋白的Ni柱亲和法进行纯化,利用纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,并利用间接ELISA法测出多克隆抗体效价达到1∶512 000。蛋白质印迹法(Western blot)和间接免疫荧光试验(IFA)证实,多克隆抗体可与细胞中的BVDV抗原发生反应,具有良好的免疫原性和特异性。本实验成功制备了BVDV重组Core蛋白的兔源多克隆抗体,为BVDV的检测及其Core蛋白功能研究奠定了基础。(本文来源于《浙江农业学报》期刊2019年11期）
韩斐,赵睿骁,王刚,江明锋[5]（2019）在《定点突变的猪源性胰高血糖素样肽-2融合蛋白的原核表达与鉴定》一文中研究指出为提高胰高血糖素样肽-2(GLP-2)生产效率以适应畜牧生产应用的需求,本试验利用基因工程技术表达出定点诱变的p[Gly2]GLP-2。用甘氨酸取代GLP-2氨基末端第2位的丙氨酸后,再根据大肠杆菌的偏好性对p[Gly2]GLP-2序列进行优化并在目标肽序列N-端添加肠激酶识别位点,合成基因序列,通过KpnⅠ和XhoⅠ双酶切位点连接到pET-40b(+)构建原核重组表达载体p[Gly2]GLP-2-pET-40b(+),重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,诱导表达重组蛋白。优化后最适表达条件为:菌液D_(600 nm)值为0.6时,用0.2 mmol/L IPTG在37℃诱导培养5 h;最终得到p[Gly2]GLP-2重组蛋白表达量较高的基因工程菌株。通过镍离子亲和层析柱纯化及分梯度洗脱获得纯度较高的p[Gly2]GLP-2融合蛋白,本结果为后续p[Gly2]GLP-2功能性的研究及其在畜牧生产的应用奠定了基础。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2019年11期）
李雪飞,陆海涛,刘利君,杨宁,马丽娜[6]（2019）在《人IgE Fc原核表达载体的构建、表达、纯化及对肥大细胞脱颗粒的抑制作用》一文中研究指出目的探讨人IgE Fc原核表达载体的构建、表达、纯化及对肥大细胞脱颗粒抑制作用。方法以pEGFP-N1/IgE Fc真核表达载体为模版,用聚合酶链反应(PCR)方法扩增IgE Fc编码序列,通过镍柱亲和层析进一步纯化获得的蛋白质,采取酶联免疫吸附试验检测致敏肥大细胞中β-己糖胺酶和细胞因子。结果致敏肥大细胞中,抗原蛋白的表现形式主要是以涵体的模式存在且被成功纯化;pET-32a(+)-IgE Fc作用于未被致敏的RBL-2H3细胞后,RBL-2H3细胞的细胞膜平滑,细胞紧密贴覆于细胞壁,形态为梭形。结论 pET-32 a(+)-IgE Fc可抑制肥大细胞的脱颗粒,但不会对致敏肥大细胞活性造成影响,为人IgE Fc和哮喘等过敏性疾病研究提供了理论基础。(本文来源于《中国皮肤性病学杂志》期刊2019年11期）
魏晓雷,叶汉梅,罗智[7]（2019）在《黄颡鱼自噬相关基因LC3B和Beclin1的原核表达及多克隆抗体制备》一文中研究指出为深入研究黄颡鱼Pelteobagrus fulvidraco自噬的发生过程和机制,从黄颡鱼cDNA中克隆获得372和1344 bp的黄颡鱼LC3B(PfLC3B)和Beclin1(PfBeclin1)基因编码序列,并成功构建了pET32a(+)-PfLC3B和pET32a(+)-PfBeclin1重组表达载体,分别采用亲和层析和包涵体纯化的方法得到了纯度较高的重组PfLC3B和PfBeclin1蛋白;以重组PfLC3B和PfBeclin1蛋白免疫Balb/C小鼠,制备多克隆抗体。通过Western blot鉴定了PfLC3B和PfBeclin1抗血清可以分别特异性识别重组PfLC3B和PfBeclin1蛋白; PfLC3B抗血清可以特异性识别黄颡鱼内源性LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ蛋白, PfBeclin1抗血清可以特异性识别黄颡鱼内源性Beclin1蛋白。蛋白水平的组织分布显示,黄颡鱼LC3和Beclin1蛋白在肝脏中表达水平均较高,在肾脏和脾脏中的表达水平较低。综上所述,研究成功制备了黄颡鱼LC3B和Beclin1的多克隆抗体,为深入研究黄颡鱼自噬机制提供了有力工具。(本文来源于《水生生物学报》期刊2019年06期）
常秋燕,郭富城,冶昡青,李凌浩,王悦萦[8]（2019）在《牛病毒性腹泻病毒N~(pro)蛋白的原核表达及裂解效率》一文中研究指出为了研究牛病毒性腹泻病毒N~(pro)蛋白的催化切割效率,首先扩增GSTZ毒株的N~(pro)基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+)上,使其在表达菌E.coli BL21 (DE 3)中表达,确定正确的N~(pro)基因碱基序列,然后构建含有切割位点的pET-28a-N~(pro)-GFP重组融合质粒,在原核表达系统中研究N~(pro)蛋白的切割效率。结果显示,GSTZ毒株的N~(pro)蛋白成功地在原核表达系统中表达,重组融合蛋白质N~(pro)-GFP在原核表达系统中的切割效率约为60.28%。(本文来源于《江苏农业学报》期刊2019年05期）
李晗,臧佳辰,谭晓怡,夏小雨,王震宇[9]（2019）在《牡蛎重组铁蛋白GF1的原核表达、分离纯化及表征》一文中研究指出铁蛋白可形成纳米笼结构,并可作为功能性纳米材料。在本研究中,从牡蛎的内脏中提取铁蛋白基因GF1,成功克隆后转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行原核表达,纯化和表征。使用DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换色谱法分离纯化牡蛎铁蛋白。铁蛋白亚基的分子量为19972 Da(聚丙烯酰胺凝胶电泳),铁蛋白分子量为480 kDa(非变性凝胶电泳)。利用胰蛋白酶进行胶内酶解,使用NanoLC-Q-TOF-MS鉴定铁蛋白,并通过圆二色谱法分析其二级结构,通过动态光散射和透射电子显微镜表征铁蛋白的纳米笼结构。基于人铁蛋白重链氨基酸序列对牡蛎铁蛋白进行同源建模,构建其叁维结构。本研究为铁蛋白自组装和生物功能活性的研究提供了理论基础。(本文来源于《中国食品科学技术学会第十六届年会暨第十届中美食品业高层论坛论文摘要集》期刊2019-11-13）
许佳伟,杨愈丰[10]（2019）在《气味结合蛋白OBP26的原核表达及纯化》一文中研究指出目的:建立德国小蠊气味结合蛋白OBP26的原核表达及纯化方案,对表达条件进行优化,以获得产量高、均一好的蛋白。方法:利用无缝克隆技术构建pET32a(+)-SUMO-OBP26融合表达载体;比较不同诱导温度、诱导时间、异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导终浓度和诱导时机(菌液OD600值)对OBP26融合蛋白表达量的影响,筛选融合蛋白最优表达条件;运用镍离子亲和层析和凝胶过滤层析纯化融合蛋白,探究高效、稳定的纯化方案。结果:在诱导温度24℃、菌液OD600值为0.8、IPTG终浓度为0.1 mmol/L的条件下诱导培养10 h,OBP26融合蛋白的表达量最高且杂蛋白较少;建立融合蛋白OBP26的"四步"纯化方案,即:第一次金属镍亲和层析、SENP2酶切SUMO靶点、第二次金属镍亲和层析、凝胶过滤层析,获得纯度高、均一性好的蛋白。结论:建立了稳定的OBP26蛋白原核表达及纯化方案,获得了纯度高、均一性好的OBP26蛋白,为后续该蛋白的结晶、结构与功能机制的深入研究及应用奠定基础。(本文来源于《中国生物工程学会第十叁届学术年会暨2019年全国生物技术大会论文集》期刊2019-11-09）
原核表达研究论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为更好了解L-半乳糖内酯脱氢酶及编码基因在软枣猕猴桃中的生理功能及作用,以‘魁绿’软枣猕猴桃果实cDNA为模板,用RT-PCR及RACE技术,获得L-半乳糖酸-1,4-内酯脱氢酶基因AaGalLDH(GenBank:KP145007.1)。序列分析表明该基因全长为2 394 bp,开放阅读框为1 833 bp,编码610个氨基酸,与其它植物GalLDH氨基酸序列具有78%～95%的同源性。编码的蛋白序列具有GalLDH蛋白家族典型的保守结构域。进一步将该基因连接到原核表达载体并转化大肠杆菌进行诱导表达,经Western Blotting验证,目的基因在pET-28a表达系统中有表达,但基本为不溶性表达。这为进一步研究该酶蛋白的体外表达和功能以及选育高品质软枣猕猴桃品种奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
原核表达研究论文参考文献
[1].李恩广,郭宝太,杨雪,朱虹,王晶珊.甘薯羽状斑驳病毒和褪绿矮化病毒重组双CP融合基因的原核表达和抗血清的制备[J].青岛农业大学学报(自然科学版).2019
[2].张庆田,范书田,艾军,秦红艳.软枣猕猴桃L-半乳糖内酯脱氢酶基因的克隆及原核表达分析[J].山东农业科学.2019
[3].欧兰香,陈振,王佳颖,解光宁,王岩.重组人脂蛋白相关磷脂酶A2的原核表达及单克隆抗体制备[J].国际检验医学杂志.2019
[4].张康,张璇,闫遵祥,王磊,张凯.牛病毒性腹泻病毒Core蛋白的原核表达及多克隆抗体制备[J].浙江农业学报.2019
[5].韩斐,赵睿骁,王刚,江明锋.定点突变的猪源性胰高血糖素样肽-2融合蛋白的原核表达与鉴定[J].中国畜牧兽医.2019
[6].李雪飞,陆海涛,刘利君,杨宁,马丽娜.人IgEFc原核表达载体的构建、表达、纯化及对肥大细胞脱颗粒的抑制作用[J].中国皮肤性病学杂志.2019
[7].魏晓雷,叶汉梅,罗智.黄颡鱼自噬相关基因LC3B和Beclin1的原核表达及多克隆抗体制备[J].水生生物学报.2019
[8].常秋燕,郭富城,冶昡青,李凌浩,王悦萦.牛病毒性腹泻病毒N~(pro)蛋白的原核表达及裂解效率[J].江苏农业学报.2019
[9].李晗,臧佳辰,谭晓怡,夏小雨,王震宇.牡蛎重组铁蛋白GF1的原核表达、分离纯化及表征[C].中国食品科学技术学会第十六届年会暨第十届中美食品业高层论坛论文摘要集.2019
[10].许佳伟,杨愈丰.气味结合蛋白OBP26的原核表达及纯化[C].中国生物工程学会第十叁届学术年会暨2019年全国生物技术大会论文集.2019