恶臭假单胞菌SJTE-1中转化17β-雌二醇的3-酰基-ACP还原酶的鉴定与功能研究（英文）

论文摘要

【目的】假单胞菌SJTE-1可高效转化17β-雌二醇,但是催化该转化的酶尚不清楚。本文鉴定了该菌株的一个新的3-酮酰基-ACP还原酶（ANI01589.1）,并对其进行了功能研究。【方法】首先,我们克隆了该3-酰基-ACP还原酶的编码基因,在大肠杆菌BL21（DE3）菌株中进行了异源表达;利用金属离子亲和层析法,纯化获得了重组蛋白。体外检测了重组蛋白的活性与酶学性质,并利用高效液相色谱法（HPLC）测定了该酶的催化产物。【结果】3-酮酰基-ACP还原酶可被17β-雌二醇诱导表达,重组蛋白纯化量可达19.6mg/L。蛋白序列比对结果表明,该蛋白包含短链脱氢酶/还原酶（SDR）的2个共有区域和多个保守残基。该酶以NAD+为辅助因子,将17β-雌二醇转化为雌酮;其Km值为0.071 mmol/L, kcat值为2.4±0.06/s–1,5 min内可转化超过95.8%的雌二醇。该酶的最佳反应温度为42°C,最佳pH为8.0。不同二价离子对该酶的活性影响不同,Mg2+和Mn2+可增强其酶活性。【结论】这一假单胞菌SJTE-1来源的3-酮酰基-ACP还原酶可高效催化17β-雌二醇的转化,该酶可能在该菌株的雌激素代谢过程中起到重要作用。

论文目录

1 Materials and Methods

1.1 Strains,chemicals and cultures

1.2 Reverse transcription and quantitative PCR（RT-q PCR）detection

1.3 Construction of the recombinant plasmid

1.4 Sequence alignment and structure-homology modeling

1.5 Heterogeneous expression and affinity purification of the recombinant 3-oxoacyl-ACP reductase protein

1.6 Enzymatic assay of the recombinant3-oxoacyl-ACP reductase

1.7 HPLC detection of the enzymatic reaction products

2 Results and Discussion

2.1 The 3-oxoacyl-ACP reductase（ANI01589.1）of P.putida SJTE-1 was induced by 17β-estradiol

2.2 The 3-oxoacyl-ACP reductase（ANI01589.1）was a member of SDR family

2.3 The recombinant 3-oxoacyl-ACP reductase could transform 17β-estradiol efficiently

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 彭万里,古丽米娜,郑达宁,梁如冰

关键词: 酮酰基还原酶,雌二醇,雌酮,酶活,转化效率

来源: 微生物学报 2019年10期

年度: 2019

分类: 基础科学

专业: 生物学

单位: 微生物代谢国家重点实验室,上海交通大学生命科学技术学院

基金: Supported by the National Natural Science Foundation of China(31570099,31370152)~~

分类号: Q55

DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20180475

页码: 1936+1927-1935

总页数: 10

文件大小: 2948K

下载量: 70

恶臭假单胞菌SJTE-1中转化17β-雌二醇的3-酰基-ACP还原酶的鉴定与功能研究（英文）

论文摘要

论文目录

文章来源

相关论文文献

猜你喜欢