导读:本文包含了细胞外钙调素结合蛋白论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:蛋白,细胞,白芷,免疫,淋巴细胞,胶体,凝胶。
细胞外钙调素结合蛋白论文文献综述
丁存宝,毛国红,孙大业[1]（2004）在《白芷细胞外钙调素结合蛋白(ECBP21)免疫组化及金标定位分析》一文中研究指出ECBP21是我们从白芷悬浮培养细胞外纯化及cDNA克隆的一种钙调素结合蛋白(CaMBP),亦是植物中首次报道的细胞外CaMBP。本实验以大肠杆菌表达的重组ECBP21蛋白为抗原,制备了高效价特异性抗体;随后,利用免疫组化及金标定位技术,研究了ECBP21蛋白组织特异性分布及亚细胞定位。免疫组化结果表明:ECBP21在白芷各组织中均有分布,但在叶、花、花序轴中较多,而在根中较少,并且ECBP21在细胞中多分布于细胞壁区域;免疫胶体金电镜定位结果显示:在白芷花序轴细胞中金颗粒主要分布在细胞壁,表明ECBP21蛋白主要定位于细胞壁区域,从而首次为细胞外CaMBP(ECBP21)的胞外存在提供了直观证据,并为进一步研究其在植物生长发育中的功能提供了初步信息。(本文来源于《实验生物学报》期刊2004年01期）
毛国红,丁存宝,侯丽霞,孙大业[2]（2003）在《白芷细胞外钙调素结合蛋白(ECBP21)cDNA克隆及鉴定》一文中研究指出目前,对植物Ca~(2+)信号系统各组分(Ca~(2+)、CaM和CaMBPs等)的研究不断取得更为深入的成果。在植物细胞内鉴定了许多CaM调节或结合的靶酶或靶蛋白(CaBMPs),并证明它们在Ca~(2+)-CaM信号转导途径中发挥重要作用,参与了许多生命活动过程。我室多年的研究证实植物细胞外也普遍存在CaM,并且可能作为一种多功能肽类信使在植物生长发育过程中发挥重要作用。这已成为植物钙调素研究的最新进展之一。(本文来源于《中国细胞生物学学会第八届会员代表大会暨学术大会论文摘要集》期刊2003-11-01）
毛国红[3]（2003）在《白芷细胞外钙调素结合蛋白（ECBP21）cDNA克隆及鉴定》一文中研究指出目前，对植物Ca~(2+)信号系统各组分(Ca~(2+)、CaM和CaMBPs等)的研究不断取得更为深入的成果。在植物细胞内鉴定了许多CaM调节或结合的靶酶或靶蛋白(CaBMPs)，并证明它们在Ca~(2+)-CaM信号转导途径中发挥重要作用，参与了许多生命活动过程。我室多年的研究证实植物细胞外也普遍存在CaM，并且可能作为一种多功能肽类信使在植物生长发育过程中发挥重要作用。这已成为植物钙调素研究的最新进展之一。 我室在对植物细胞外CaM的研究过程中，发现细胞外还可能存在CaMBPs，并首次从白芷悬浮培养细胞外纯化了一种依赖Ca~(2+)的、分子量约为21kD的细胞外CaMBP(Tang等，1996)(定名为：ECBP21)。生理实验初步表明ECBP21影响白芷悬浮培养细胞的增殖(毛国红等，1999)。这些生物化学和生理学实验，仅为细胞外CaMBPs的存在及可能的功能提供了初步证据。为了进一步利用分子生物学手段证实细胞外ECBP21真实存在，并进一步研究其生物学功能，本实验从克隆基因入手进行了以下工作： 1．ECBP21全长cDNA克隆：将纯化的ECBP21蛋白经SDS—PAGE分离后电转移到PVDF膜上，氨基酸测序获得N-末端20个氨基酸序列；根据N-末端8个氨基酸序列合成兼并性引物，通过RT-PCR和5’-RACE方法，获得其cDNA序列。Northern blot分析表明克隆的cDNA序列为全长cDNA。ECBP21 cDNA全长947bp，编码216个氨基酸，序列分析显示其N端1-25氨基酸为信号肽，26-216氨基酸为成熟蛋白肽段，并且不具有跨膜结构域。将此cDNA成熟蛋白编码区核苷酸片断构建到pET-28b(+)表达载体，在大肠杆菌表达系统中诱导了该蛋白的表达，经CaM-gel overlay检测证实表达蛋白具有Ca~(2+)依赖的CaM结合特性，从而进一步证实了ECBP21为一种Ca~(2+)依赖的CaMBP。通过缺失表达分析实验证实CaMBD结构域位于ECBP21的羧基端。Southern blot检测表明白芷基因组中可能存在两个ECBP21基因拷贝。从而首次克隆并鉴定了一个细胞外CaMBP的全长cDNA。 2．ECBP21亚细胞定位：以重组ECBP21蛋白为抗原制备了特异性抗体。利用特异性抗体通过免疫金标定位研究表明ECBP21主要分布于细胞壁。进一步利用GFP荧光标记，通过瞬时表达方法研究显示转ECBP21-GFP毛国红:白芷细胞外钙调素结合蛋白(ECBPZI)cDNA克隆及鉴定融合基因细胞的细胞壁上有较强绿色荧光，而转缺失信号肤的乙去乙岁苍介分户融合基因及贷尹基因的细胞中，细胞壁上无绿色荧光，表明ECBP21是一种主动分泌到细胞外的分泌蛋白。由此进一步证实ECBP21确为一种质外体多肤。本实验为细胞外CaMBPS的存在提供了直接证据。 3.ECBP21表达分析:Northern blot分析表明:在白芷悬浮培养细胞生长周期中，ECBP21和CaM都为组成型表达，0一12天ECBP21表达量逐渐增加，第12天达到最高，随后12一21天，ECBP21表达量稍有下降，维持在一个比较稳定状态;而O一6天时，CaM表达量逐渐上升，第6一9天达到最大表达量，随后，9一21天，CaM表达量有所下降。表明ECBP21可能参与白芷悬浮培养细胞生长周期调控。热激、渗透、盐胁迫及JA处理时，ECBPZI表达量下降，而6一BA、ABA及GA3处理时，不影响ECBPZI的表达。推测ECBP21还可能与逆境胁迫相关。 4.初步开展了转基因研究:为了进一步确定ECBP21在植物生长发育过程中的作用，构建了ECBP21植物表达二元载体，通过真空渗透法转化了拟南芥并获得了转基因植株。表型观察仍在进行之中。 总之，通过上述研究我们首次克隆及鉴定了一种细胞外CaMBP (EC即21) CDNA，并首次提供了细胞外存在CaMBPS的直接证据。本实验结果也为利用分子生物学方法研究ECBP21的生物学功能奠定了基础，并将有助于阐明胞外 CaM的作用机制及丰富植物质外体多肤的研究。(本文来源于《河北师范大学》期刊2003-05-20）
毛国红,汤文强,孙大业[4]（1999）在《白芷细胞外21kD钙调素结合蛋白的生理功能初探》一文中研究指出利用Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ１００ 及ＣＭＳｅｐｈａｒｏｓｅ层析法，从白芷悬浮培养细胞的胞外盐提液中纯化了２１ ｋＤ 钙调素结合蛋白（２１ ｋＤＣａＭＢＰ） ，测其等电点的ｐＨ 为８ ．９ ，紫外薄层扫描显示其纯度达９４ ％ 以上。以此蛋白为抗原，用免疫小鼠腹水法制备了特异性抗体。由纯化的２１ ｋＤＣａＭＢＰ及其特异性抗体研究其对白芷悬浮培养细胞增殖的影响，结果表明：加入外源纯化的２１ ｋＤＣａＭＢＰ 抑制细胞增殖，半抑制浓度约８ μｇ／ｍｌ；而加入２１ ｋＤＣａＭＢＰ特异性抗体却促进细胞增殖效应。推测胞外内源存在的２１ ｋＤＣａＭＢＰ在生理条件下可能具有参与调节胞外活化ＣａＭ 信号分子的浓度，从而调节胞外ＣａＭ 的生物学功能。(本文来源于《植物生理学报》期刊1999年02期）
宋春凤,李向印,白娟,孙大业[5]（1997）在《白芷培养细胞外钙调素结合蛋白的胶体金电镜定位研究》一文中研究指出利用胶体金标记技术制备了具有生物活性的植物CaM-BSA-gold探针,并用此探针建立了白芷愈伤组织培养细胞胞外钙调素结合蛋白(CaMBPs)的透射电镜标记方法。标记结果显示,在1mmol/L Ca~(2+)存在下,用EGTA洗涤过的白芷愈伤组织培养细胞壁表面有金颗粒分布,而分别在含有EGTA、TFP、过量未标记的CaM、CaM抗体存在的情况下,用金标CaM探针进行标记.以及用金标羊抗兔抗体替代金标CaM探针进行标记的各对照组,细胞壁表面金颗粒则消失,说明白芷愈伤组织培养细胞壁表面存在着CaM结合位点或CaMBPs。(本文来源于《实验生物学报》期刊1997年03期）
唐军,孙大业[6]（1994）在《白芷悬浮培养细胞外21KD钙调素结合蛋白的鉴定及纯化》一文中研究指出利用生物素－ＣａＭ凝胶覆盖技术，在白芷悬浮培养细胞外检测一个分子量为２１ＫＤ的钙调素结合蛋白（ＣａＭｂｐ），并用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１００凝胶过滤柱，ＣＭ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ阳离子交换柱层析将其纯化。(本文来源于《河北师范大学学报》期刊1994年02期）
吴光玉,赵升皓[7]（1990）在《淋巴细胞中钙调素结合蛋白的研究》一文中研究指出应用~(125)I—钙调素(CAM)覆盖(Overlay)技术,从家兔阑尾(B细胞)、肠系膜淋巴结(T、B细胞)和脾脏(T、B细胞)淋巴细胞胞浆中分别检测到19、20和16种钙调素结合蛋白(CaMBP),其中均含有80、78、70、63、50、41、36、22、17和13.5KD CaMBP,以17KD和13.5KD CaMBP含量最为丰富,且与CaM结合呈部分钙依赖性。(本文来源于《中国免疫学杂志》期刊1990年05期）
细胞外钙调素结合蛋白论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目前,对植物Ca~(2+)信号系统各组分(Ca~(2+)、CaM和CaMBPs等)的研究不断取得更为深入的成果。在植物细胞内鉴定了许多CaM调节或结合的靶酶或靶蛋白(CaBMPs),并证明它们在Ca~(2+)-CaM信号转导途径中发挥重要作用,参与了许多生命活动过程。我室多年的研究证实植物细胞外也普遍存在CaM,并且可能作为一种多功能肽类信使在植物生长发育过程中发挥重要作用。这已成为植物钙调素研究的最新进展之一。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
细胞外钙调素结合蛋白论文参考文献
[1].丁存宝,毛国红,孙大业.白芷细胞外钙调素结合蛋白(ECBP21)免疫组化及金标定位分析[J].实验生物学报.2004
[2].毛国红,丁存宝,侯丽霞,孙大业.白芷细胞外钙调素结合蛋白(ECBP21)cDNA克隆及鉴定[C].中国细胞生物学学会第八届会员代表大会暨学术大会论文摘要集.2003
[3].毛国红.白芷细胞外钙调素结合蛋白（ECBP21）cDNA克隆及鉴定[D].河北师范大学.2003
[4].毛国红,汤文强,孙大业.白芷细胞外21kD钙调素结合蛋白的生理功能初探[J].植物生理学报.1999
[5].宋春凤,李向印,白娟,孙大业.白芷培养细胞外钙调素结合蛋白的胶体金电镜定位研究[J].实验生物学报.1997
[6].唐军,孙大业.白芷悬浮培养细胞外21KD钙调素结合蛋白的鉴定及纯化[J].河北师范大学学报.1994
[7].吴光玉,赵升皓.淋巴细胞中钙调素结合蛋白的研究[J].中国免疫学杂志.1990
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