导读:本文包含了东北红豆杉细胞论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:红豆杉,紫杉醇,细胞,紫杉,细胞培养,超低温,培养基。
东北红豆杉细胞论文文献综述
王淑杰,李晓卉,白贺,李瞳,李纯[1]（2018）在《东北红豆杉悬浮细胞诱导紫杉醇培养基优化研究》一文中研究指出东北红豆杉是长白山特有资源,是国家的一级保护植物,其枝叶中含有一种萜类化合物紫杉醇,可以治疗多种肿瘤疾病。用东北红豆杉生产紫杉醇的方法有4种:直接提取法、化学合成法、发酵法、细胞悬浮培养法。其中细胞培养法最为经济、合理、高效。在细胞悬浮诱导培养过程中发现植物细胞最优培养条件的获得是提高细胞生物量和促进次级代谢产物合成的关键,而培养基优化是非常重要的途径之一。以东北红豆杉嫩茎芽为试验材料,用B5培养基对东北红豆杉愈伤组织进行诱导。(1)通过单因素试验,得到B5培养基中使东北红豆杉的紫杉醇单位产量较高的维生素浓度为维生素B1浓度为20 mg·L~(-1),维生素B6浓度为3 mg·L~(-1),肌醇浓度为200 mg·L~(-1),烟酸浓度为2mg·L~(-1)。(2)以维生素B1浓度(X1)、维生素B6浓度(X2)、肌醇浓度(X3)和烟酸浓度(X4)为自变量,单位体积培养液紫杉醇产量(Y)为因变量进行响应曲面分析,得到二次多项式回归方程:Y=2.76+0.061X1+0.011X2+0.002667X3–0.0005833X4–0.042X1X3–0.015X1X4+0.019X2X3–0.026X2X4–0.019X3X4–0.11 X12–0.063X22–0.027X32–0.012X42。最优维生素浓度组合为:维生素B1浓度21.58 mg·L~(-1),维生素B6浓度3.09 mg·L~(-1),肌醇浓度201.29mg·L~(-1)和烟酸浓度1.77mg·L~(-1),此时单位体积培养液紫杉醇产量达到最大值(2.767mg·L~(-1)),是对照组的1.22倍,效果显着。(本文来源于《中国园艺学会2018年学术年会论文摘要集》期刊2018-10-17）
王胡军[2]（2017）在《东北红豆杉悬浮细胞放大培养研究》一文中研究指出紫杉醇(Paclitaxel,商品名Taxol)是一种有效的抗癌新药。目前,从红豆杉树皮等组织中直接提取以及化学合成是获取紫杉醇的主要方法,但这些方法存在资源短缺、紫杉醇产量低等缺点。大规模培养红豆杉组织和细胞生产紫杉醇被认为是最有希望解决这一问题的途径。本文主要对东北红豆杉悬浮细胞放大培养进行相关研究,将为实现东北红豆杉悬浮细胞规模化生产紫杉醇奠定基础。本研究以东北红豆杉幼茎为材料,诱导愈伤组织,经继代后建立细胞悬浮培养体系,并探究B5培养基中维生素含量对悬浮细胞生产紫杉醇的影响;为了解决东北红豆杉悬浮细胞在放大培养过程中的变异问题,研究玻璃化超低温保存东北红豆杉悬浮细胞的方法;对东北红豆杉悬浮细胞逐步放大培养过程中的特征参数以及气升式生物反应器中东北红豆杉悬浮细胞培养液的流变特性进行研究;对2L气升式生物反应器内部两相流动进行CFD数值模拟,并探究通气量对气含率和循环液速的影响。本文研究结论如下:1.以东北红豆杉幼茎为原料,进行愈伤组织诱导和继代,最终建立了稳定的悬浮细胞系。通过对B5培养基中维生素含量的优化,得出适用于东北红豆杉悬浮细胞生产紫杉醇的最优维生素浓度组合为:维生素B1浓度21.58mg/L,维生素B6浓度3.09mg/L,肌醇浓度201.29mg/L和烟酸浓度1.77mg/L,此时单位体积培养液紫杉醇产量为2.767mg/L。2.玻璃化超低温保存东北红豆杉悬浮细胞的研究表明,最优的保存方案为:悬浮培养12d的东北红豆杉悬浮细胞在含有0.7mol/L蔗糖和5%DMSO(w/v)的B5培养基中预培养1.69d后,室温下60%PVS4预处理32.25min,0℃条件下100%PVS4脱水处理41.55min,替换预冷到0℃的新鲜PVS4后立即投入液氮保存,解冻时37℃水浴60s内迅速化冻,再用含1.2mol/L蔗糖的B5培养基洗涤30min,若液氮冷冻时间为48h,细胞存活率为76.62%。3.东北红豆杉悬浮细胞在250m L、500m L摇瓶和2L气升式生物反应器中细胞生长和紫杉醇合成情况相似,但摇瓶中的生物量和紫杉醇产量分别高于反应器15%-25%和20%。叁种培养规模中,p H值变化规律以及电导率的变化规律相似,可以通过p H值和电导率对细胞的生长进行在线监测。气升式生物反应器比较适合东北红豆杉悬浮细胞的培养,所需最适通气量为0.2vvm。另外,研究发现东北红豆杉悬浮细胞培养液呈假塑性流体性质,建立了各生长时期流变本构方程,为反应器的控制提供了理论基础。4.利用FLUENT软件对不同通气量下2L气升式生物反应器进行了仿真,对气含率和循环液速分布状态进行了可视化输出,随着通气量增加,气含率和循环液速也增加。通过仿真分析很直观地了解到通气量对于各时期细胞培养液气含率和循环流动的影响,据此对反应器进行操作控制,从而调控细胞的生长。(本文来源于《吉林大学》期刊2017-06-01）
李纯[3]（2016）在《东北红豆杉细胞高效诱导紫杉醇工艺优化研究》一文中研究指出东北红豆杉细胞中含有一种萜类化合物为紫杉醇,对多种肿瘤疾病具有显着的疗效,是当今市场上价格昂贵且应用最广泛的一种天然抗癌药物。但野生红豆杉是国家的重点保护资源,用直接提取法高效获取紫杉醇比较困难。所以,我们有必要利用生物技术—细胞高效诱导法提取紫杉醇,才能从根本上解决红豆杉原料不足的问题,来满足人类不断增长的需求。因此,本论文主要以东北红豆杉幼茎为材料,在适宜的(补光)环境条件下,对东北红豆杉愈伤组织诱导,然后不断地进行继代培养,选择紫杉醇含量高且稳定的愈伤组织,进行高产细胞株系的筛选,并对细胞悬浮培养条件进行优化,得到东北红豆杉细胞悬浮培养高效获取紫杉醇的一套优化工艺。同时提出了一种东北红豆杉愈伤组织的保存方法—超低温法,有利于缩短试验周期,加快试验进程。此优化工艺对东北红豆杉细胞高效诱导紫杉醇具有重要的指导意义,为红豆杉细胞生产紫杉醇走向产业化奠定了坚实的前期工作基础,有利于药用植物资源的高效开发利用,具有重要的现实意义与深远的社会影响。通过试验研究获得的创新性结论如下:(1)本试验选择东北红豆杉幼茎为外植体,采用改良后的B5培养基,在一定的环境条件下进行诱导,1Od-11d获得生长状况良好的愈伤组织,通过光环境的单因素试验,得到最优光环境为:(以LED为光源)光质为红光(λ=660nm),光周期为12h/d,光强为10μmol·m-2·s-1。以光周期、光强、温度、湿度为自变量,进行Box-Behnken复因素试验结果表明,东北红豆杉愈伤组织诱导的最佳(光)环境条件为:光周期为11.82h/d,光强为9.77μmol·m-2·s-1,温度为24.83℃,湿度为85.00%,此时愈伤组织的诱导率为95.61%。(2)通过超低温保存东北红豆杉愈伤组织预培养条件的单因素试验,得到的最佳预培养条件为:温度为5℃,培养基中蔗糖浓度为6%,时间为10d。以时间(X1)、蔗糖浓度(X2)、温度(X3)为自变量,通过Box-Behnken复因素试验结果表明,最佳的预培养条件为:预培养时间为10.47d,预培养蔗糖浓度为5.50%,预培养温度为3.37℃,此时东北红豆杉愈伤组织细胞相对存活率达到最大值,为62.30%。超低温法保存东北红豆杉愈伤组织的冷冻保护剂试验,以10%山梨醇与10%DMSO共同作为保护剂,其细胞相对存活率最高,为65.73%;超低温液氮法保存愈伤组织的冷冻方法试验表明:以慢冻和分步冷冻的方法处理愈伤组织,解冻后对愈伤组织细胞的影响小,其愈伤组织细胞相对存活率高,分别为67.23%和 65.12%。(3)东北红豆杉愈伤组织经过11次继代培养试验分析表明:继代培养9次后紫杉醇含量和鲜重趋于稳定;当继代到第9代时,紫杉醇含量为259.14μg/g,是直接从植物中提取的2.1倍。因此,可以第9代的愈伤组织为材料进行筛选高产细胞株系的试验。在多株克隆细胞中筛选出10株高产细胞株系,通过进行稳定性筛选,(与固体培养基相比)发现细胞克隆在液体培养基上的鲜重增长率更高,但在两种培养基上5号、12号和21号细胞的紫杉醇含量相对稳定。(4)通过试验分析发现悬浮培养基中高浓度蔗糖有利于细胞紫杉醇含量,但会使细胞生长受到抑制,因此,悬浮初期添加30g/L的蔗糖较合适。以悬浮培养中期未补加糖分为对照组,补加糖分时使得细胞鲜重由高到低的糖分依次为蔗糖、葡萄糖、果糖,使得紫杉醇含量由高到低的糖分依次为蔗糖、果糖、葡萄糖。通过悬浮培养过程中温度和摇床转速单因素试验果表明:温度为24℃和转速为120r/min时,有利于紫杉醇的积累。对悬浮培养条件中培养基中蔗糖浓度、培养温度、摇床转速叁因素进行正交试验设计及分析,并综合考虑细胞生长和紫杉醇含量,得到悬浮培养最优条件为:初期添加30g/L蔗糖,中期补加10g/L蔗糖,温度24℃,转速120r/min。当向悬浮培养基中添加诱导物质并补加蔗糖时,其细胞鲜重和紫杉醇含量均最高,分别达到72.025g/L和5.652mg/L,比只添加诱导物质组分别提高8.23%和25.96%。(本文来源于《吉林大学》期刊2016-06-01）
王淑杰,李纯,钟香梅,王胡军,赵晶[4]（2014）在《诱导子对东北红豆杉细胞培养生产紫杉醇的影响》一文中研究指出紫杉醇为当代最为畅销的抗癌药物之一,但是从15~30吨的红豆杉树皮中才可提出1kg的紫杉醇,含量甚微。红豆杉植物资源非常有限,野生红豆杉资源已濒临灭绝,红豆杉细胞培养技术具有不破坏自然资源和生态环境,不受自然条件限制等优点,是扩大紫杉醇来源的重要途径之一。因此,本试验中研究诱导子、前体、代谢抑制剂对东北红豆杉细胞生产紫杉醇的影响,并在单因素试验的基础上,运用二次通用旋转组合试验设计。通过对紫杉醇的合成代谢产物进行调控,可大大提高紫杉醇的产量,对促进紫杉醇的产业化技术研发,具有重要的现实意义与深远的社会影响。以经多次筛选继代的东北红豆杉愈伤组织为材料,进行红豆杉悬浮细胞培养,第7天分别加入不同浓度的各诱导子(茉莉酸甲酯、水杨酸、壳聚糖,前体物质苯丙氨酸、乙酸钠,代谢旁路抑制剂赤霉素和肉桂酸),待红豆杉悬浮细胞培养28 d后收获,测定细胞鲜质量及细胞内紫杉醇单位产量,筛选出对提高紫杉醇产量效果更好的物质。然后在单因素的基础上,进行二次通用旋转组合设计试验,确定各物质的最适组合与浓度,使紫杉醇产量达最高值。东北红豆杉细胞悬浮培养高效诱导的试验研究表明:东北红豆杉悬浮细胞生长曲线呈"S"型,细胞鲜质量在第24天时达到最大,为54.5 g·L~(-1);通过添加7种调节因子进行细胞诱导,筛选茉莉酸甲酯、水杨酸、苯丙氨酸及赤霉素对东北红豆杉悬浮细胞生长及产紫杉醇的影响较为明显;以该4种调节因子的浓度为自变量,悬浮细胞收获时细胞内紫杉醇总产量为因变量,进行二次通用旋转组合试验设计,得到回归方程为:y=4.32000-0.12000x_1+0.06667x_2+0.10000x_3-0.03333x_4-0.40667x_1~2-0.32167x_2~2-0.22167x_3~2-0.57667x_4~2+0.02500x_1x_3+0.01500x_2x_4。调节因子的最佳组合为:茉莉酸甲酯100μmol·L~(-1),水杨酸20 mg·L~(-1),苯丙氨酸400 mg·L~(-1),赤霉素2 mg·L~(-1),此时,细胞内紫杉醇总产量高达4.32 mg·L~(-1)。悬浮细胞生长第7天加入调节因子得到的细胞内外紫杉醇总产量最高,为4.855mg·L~(-1),紫杉醇释放率为10.48%;红豆杉悬浮细胞生长体系中小剂量连续添加调节因子比一次性大剂量添加效果好,细胞鲜质量和紫杉醇总产量分别提高6.08%和11.57%;悬浮细胞生长体系中,紫杉醇的合成代谢滞后于细胞的生长。(本文来源于《中国园艺学会2014年学术年会论文摘要集》期刊2014-10-23）
赵晶[5]（2014）在《东北红豆杉细胞培养高效提取紫杉醇技术体系研究》一文中研究指出红豆杉中的抗癌活性成分紫杉醇能够有效抑制肿瘤细胞的增生和繁殖,对多种癌症的防治具有显着疗效,被世人誉为“植物黄金”。但红豆杉生长缓慢,且紫杉醇含量极低,无法满足日益增长的市场需求,由于东北红豆杉是国家的一级保护植物,当务之急就是在保护红豆杉资源的前提下,利用现代科技手段通过不同途径获得紫杉醇。细胞培养生产紫杉醇的方法具有诸多优势,使其越来越受到研究人员的青睐。经文献调研显示,国内外有相关报道,但大多数都是对基础理论的研究,对高效获取紫杉醇的应用技术研究报道偏少,尤其是趋于产业化的技术体系的构建至今仍是空白。因此,本文以东北红豆杉为原料,通过检测技术的优化、愈伤组织诱导、高产细胞株系筛选,建立细胞悬浮体系,并通过添加代谢调节因子提高细胞悬浮体系中的紫杉醇产量,初步构建“东北红豆杉细胞悬浮培养高效获取紫杉醇的技术体系”。为东北红豆杉生产紫杉醇的规模化、商业化、产业化奠定了良好的基础,对于长白山野生资源药用植物的合理开发与高效利用提供了技术支持,具有重要的现实意义与深远的社会影响。本文获得的研究结论如下：1.通过单因素试验与Box-Behnken试验设计对东北红豆杉中紫杉醇的超声波提取及其快速分离检测的研究表明：单因素试验的最佳提取溶剂为乙醇-二氯甲烷(1：1),料液比为1：50,超声时间为1h,超声功率为200W；TLC-紫外分光光度法分离检测紫杉醇的修正系数K为0.009152；多因素试验以液料比(X1)、超声时间(X2)、超声功率(X3)为自变量,紫杉醇提取量为因变量进行响应曲面分析,得到回归方程为：Y=127.78+3.86X1+6.06X2+1.65X3-3.68X12-8.23X22-5.95X32+0.57X1X2+2.05X1X3+1.80X2X3最佳提取工艺为料液比1：53.23mL/g,超声时间1.11h,超声功率207.88W,此时的紫杉醇提取量为130.576μg/g。2.东北红豆杉愈伤组织诱导和继代培养的研究表明：以东北红豆杉幼茎为外植体,添加NAA2mg/L+6-BA0.5mg/L的改良B5培养基诱导愈伤组织效果最佳：11天即出现愈伤组织,诱导率达到94.9%,鲜重增殖倍数为1.13；将愈伤组织附着于外植体上直接继代比剥离后单独继代的效果好,直接继代愈伤组织增殖多,褐化程度轻；使用7.5mg/L柠檬酸作为抗褐化剂可使继代的愈伤组织增殖2.36倍,并且消除褐化现象；连续继代8-9次可使愈伤组织鲜重增殖及紫杉醇含量达到稳定(最高值),继代8次后,愈伤组织鲜重增殖3.83倍,紫杉醇含量为227μg/g,比从植物中直接提取提高了73.85%。3.东北红豆杉高产细胞株系培育方法的筛选试验研究表明：条件培养和看护培养均可实现在较低的细胞密度下获得较高的植板率,根据细胞克隆的生长情况及适当的植板率,确定细胞浓度为3×102个/mL效果最好；悬浮培养12d的细胞作为克隆材料时,出现细胞克隆的时间最短,16d的细胞作为克隆材料时,植板率最高；稳定性试验分析结果显示,继代细胞系的增长率在固体培养基上比液体培养基中稳定,但紫杉醇含量均存在一定波动。4.东北红豆杉细胞悬浮培养高效诱导的试验研究表明：东北红豆杉悬浮细胞生长曲线呈“S”型,细胞鲜重在第24天时达到最大,为54.5g/L；通过添加7种调节因子进行细胞诱导,茉莉酸甲酯、水杨酸、苯丙氨酸及赤霉素对东北红豆杉悬浮细胞生长及产紫杉醇的影响较为明显；以该四种调节因子的浓度为自变量,悬浮细胞收获时细胞内紫杉醇总产量为因变量,进行二次通用旋转组合试验设计,得到回归方程(经α=0.10显着水平剔除不显着项)为：Y=4.32000-0.12000X1+0.06667X2+0.10000X3-0.03333X4-0.40667X12-0.32167X22-0.22167X32-0.57667X42+0.02500X1X3+0.01500X2X4代谢调节因子浓度的最佳组合为：茉莉酸甲酯100μmol/L,水杨酸20mg/L,苯丙氨酸400mg/L,赤霉素2mg/L,此时,细胞内紫杉醇总产量高达4.32mg/L悬浮细胞生长第7天加入调节因子得到的细胞内外紫杉醇总产量最高,为4.855mg/L,紫杉醇释放率为10.48%；红豆杉悬浮细胞生长体系中小剂量连续添加调节因子比一次性大剂量添加效果好,细胞鲜重和紫杉醇总产量分别提高6.08%和11.57%；悬浮细胞生长体系中,紫杉醇的合成代谢滞后于细胞的生长。(本文来源于《吉林大学》期刊2014-06-03）
欧喜燕[6]（2013）在《东北红豆杉提取物对急性心梗大鼠心肌细胞Bcl-2、Bax因子表达的影响》一文中研究指出通过观察红豆杉提取物对急性心梗动物模型心肌细胞中Bcl-2、Bax凋亡因子的影响,探讨其对梗死心肌的保护作用及机制。采用结扎左冠状动脉分支法复制心肌梗死动物模型,运用免疫组化法定量分析心肌组织中Bcl-2和Bax表达的变化。结果表明:与模型组相比,红豆杉提取物给药组可增加心肌组织中Bcl-2的表达,抑制Bax的表达。红豆杉提取物可通过上调Bcl-2和下调Bax的表达,使Bcl-2/Bax值上升,抑制心肌细胞凋亡,从而对梗死心肌的保护起作用。(本文来源于《吉林农业大学学报》期刊2013年01期）
王歆,肖野,刘丹,李秀凉,赵凯[7]（2012）在《东北红豆杉细胞GGPPS基因cDNA的克隆》一文中研究指出牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸合成酶是红豆杉细胞紫杉醇生物合成途径中的关键酶。试验采用RT-PCR技术从东北红豆杉中克隆GGPPS基因片段,将GGPPS基因片段与pMD20-Tvector连接,转化E.coli DH5α,对阳性克隆进行序列测定。生物信息学分析结果表明,获得GGPPS基因片段长度为371 bp,与GenBank中收录的GGPPS同源性达到99%。为从内生真菌紫杉醇生物合成途径中克隆关键酶基因和高产紫杉醇基因工程菌株的构建提供了借鉴。(本文来源于《黑龙江大学自然科学学报》期刊2012年04期）
许立,李霞,张茶,孙剑,董辉[8]（2011）在《东北红豆杉中19种单体化合物对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响》一文中研究指出目的考察东北红豆杉中19种紫杉烷类(taxnae)化合物对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定东北红豆杉中19种紫杉烷类化合物对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响。结果处理HeLa细胞48h后,化合物5、7、16在10~(-4)mol/L浓度对HeLa细胞的增殖有明显的抑制作用(P<0.01),存活率依次为26.93%、20.79%和32.82%;在10~(-6)10~(-4)mol/L浓度范围内,化合物3、14呈现一定的剂量依赖关系。结论 5种紫杉烷类化合物对宫颈癌HeLa细胞增殖有不同程度的抑制作用。(本文来源于《武警医学》期刊2011年06期）
赵欣[9]（2011）在《东北红豆杉体细胞胚的高效诱导与悬浮培养技术》一文中研究指出本研究分别以东北红豆杉的幼嫩茎段和种子为材料，研究了植物激素、光照、谷氨酰胺等因素对体细胞胚诱导、增殖、发育后熟中的影响，优化了体胚的诱导与培养条件，初步建立东北红豆杉体胚高效诱导与悬浮培养技术体系。1.采用液体悬浮培养方法，以东北红豆杉幼茎为材料诱导胚性愈伤组织。最适培养基为：B_5+3.0mg/L NAA+0.2mg/L6-BA液体悬浮培养。培养条件：温度为22℃，90rpm，蔗糖30g/L，pH5.8，暗培养。生长周期为20~25d2.液体胚性愈伤组织的发育与成熟培养基为：B_5+2.0mg/LNAA+0.2mg/L6-BA，培养条件：温度为22℃，90rpm，蔗糖30g/L，pH5.8，暗培养。24d后转接到固体B_5+3.0mg/L ABA固体培养基上，1500lx光照培养55d，体胚发育成熟。3.不同的光照强度对体胚诱导和发育有一定的影响。在体胚发育后期，光照过强会导致体胚逐渐枯萎变黄，但光照强太弱，体胚叶绿体细胞发育不完善，不利于体胚成熟，试验表明，1500lx光照比较合适体胚的发育和成熟。4.较大的转速下培养，细胞易褐化，转接过程中胚性细胞损失过多；较低的转速下培养，细胞发育缓慢。故选择90rpm为适合的培养转速。5.种子诱导体胚的途径中，先将处理过的种子转接到无激素培养基上预培养10d后再转接到B_5+2.0mg/L NAA+0.5mg/L2,4-D+400mg/L谷氨酰胺固体培养上暗培养，诱导率高达78.36%。培养条件：pH6.0，温度22℃，周期40d。6.种胚愈伤组织增殖最适培养基为B_5+NAA1.0mg/L+2,4-D1.0mg/L+6-BA0.1mg/L+400mg/L谷氨酰胺，暗培养条件下，25d内的增殖率为85.3%。7.将诱导的种胚胚性愈伤组织转接到B_5+3.0mg/L ABA固体培养基上，1500lx光照20d后，转接到无激素培养基，即可发育成熟。(本文来源于《大连工业大学》期刊2011-03-01）
陈进军,马如飞,王思明,张熳丽,董玫[10]（2010）在《东北红豆杉中14种紫杉烷化合物对HLE细胞增殖的影响》一文中研究指出东北红豆杉(Taxus cuspidata)为红豆杉科红豆杉属植物[1]。本文通过观察从东北红豆杉中分离得到的14种紫杉烷化合物进行抑制人肝肿瘤细胞增殖活性的影响,为开发新的治疗肝癌药物提供实验室依据。1材料与方法1.1实验药物及细胞系Decinnamo(本文来源于《中国药理学通报》期刊2010年12期）
东北红豆杉细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
紫杉醇(Paclitaxel,商品名Taxol)是一种有效的抗癌新药。目前,从红豆杉树皮等组织中直接提取以及化学合成是获取紫杉醇的主要方法,但这些方法存在资源短缺、紫杉醇产量低等缺点。大规模培养红豆杉组织和细胞生产紫杉醇被认为是最有希望解决这一问题的途径。本文主要对东北红豆杉悬浮细胞放大培养进行相关研究,将为实现东北红豆杉悬浮细胞规模化生产紫杉醇奠定基础。本研究以东北红豆杉幼茎为材料,诱导愈伤组织,经继代后建立细胞悬浮培养体系,并探究B5培养基中维生素含量对悬浮细胞生产紫杉醇的影响;为了解决东北红豆杉悬浮细胞在放大培养过程中的变异问题,研究玻璃化超低温保存东北红豆杉悬浮细胞的方法;对东北红豆杉悬浮细胞逐步放大培养过程中的特征参数以及气升式生物反应器中东北红豆杉悬浮细胞培养液的流变特性进行研究;对2L气升式生物反应器内部两相流动进行CFD数值模拟,并探究通气量对气含率和循环液速的影响。本文研究结论如下:1.以东北红豆杉幼茎为原料,进行愈伤组织诱导和继代,最终建立了稳定的悬浮细胞系。通过对B5培养基中维生素含量的优化,得出适用于东北红豆杉悬浮细胞生产紫杉醇的最优维生素浓度组合为:维生素B1浓度21.58mg/L,维生素B6浓度3.09mg/L,肌醇浓度201.29mg/L和烟酸浓度1.77mg/L,此时单位体积培养液紫杉醇产量为2.767mg/L。2.玻璃化超低温保存东北红豆杉悬浮细胞的研究表明,最优的保存方案为:悬浮培养12d的东北红豆杉悬浮细胞在含有0.7mol/L蔗糖和5%DMSO(w/v)的B5培养基中预培养1.69d后,室温下60%PVS4预处理32.25min,0℃条件下100%PVS4脱水处理41.55min,替换预冷到0℃的新鲜PVS4后立即投入液氮保存,解冻时37℃水浴60s内迅速化冻,再用含1.2mol/L蔗糖的B5培养基洗涤30min,若液氮冷冻时间为48h,细胞存活率为76.62%。3.东北红豆杉悬浮细胞在250m L、500m L摇瓶和2L气升式生物反应器中细胞生长和紫杉醇合成情况相似,但摇瓶中的生物量和紫杉醇产量分别高于反应器15%-25%和20%。叁种培养规模中,p H值变化规律以及电导率的变化规律相似,可以通过p H值和电导率对细胞的生长进行在线监测。气升式生物反应器比较适合东北红豆杉悬浮细胞的培养,所需最适通气量为0.2vvm。另外,研究发现东北红豆杉悬浮细胞培养液呈假塑性流体性质,建立了各生长时期流变本构方程,为反应器的控制提供了理论基础。4.利用FLUENT软件对不同通气量下2L气升式生物反应器进行了仿真,对气含率和循环液速分布状态进行了可视化输出,随着通气量增加,气含率和循环液速也增加。通过仿真分析很直观地了解到通气量对于各时期细胞培养液气含率和循环流动的影响,据此对反应器进行操作控制,从而调控细胞的生长。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
东北红豆杉细胞论文参考文献
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