一、大鼠实验性囊状动脉瘤生长塑形模型的建立（论文文献综述）
邹亮[1]（2021）在《基质金属蛋白酶对脑动脉瘤的影响及其相互关系研究》文中研究表明第一部分基质金属蛋白酶在脑动脉瘤形成和发展中的作用目的:通过人群研究分析MMP-2、MMP-9和TIMP-2在动脉瘤患者血清中表达的临床意义,并在动物实验中分析MMPs在动脉瘤形成中的意义。方法:1.人群实验:收集2016年3月至2019年3月本院动脉瘤患者156例为病例组。同期在医院健康体检中心收集健康体检者120例为对照组。病例组入组后采集静脉血5ml于抗凝管中,1000rpm离心10min,取上清液。收集对照组每位研究对象初诊或体检时的静脉血5ml于抗凝管中,采用同样的方法,1000rpm离心10min,取上清液。采用ELISA试剂盒检测患者血清中的MMP-2、MMP-9和TIMP-2表达水平。2.家兔实验:成年新西兰兔32只购自北京维通利华实验动物技术有限公司。分为4组,分别是正常对照组、1周组、2周组和3周组,每组8只。弹性蛋白酶诱导家兔形成颈动脉分叉部动脉瘤。1周组、2周组和3周组分别诱导1周、2周和3周。干预结束后,给予兔全身麻醉,沿颈部切口暴露右侧颈总动脉,用游标卡尺测量颈动脉瘤的大小。Western Blot方法检测动脉瘤组织中MMP-2、MMP-9和TIMP-2蛋白的表达水平。RT-PCR方法检测动脉瘤组织中MMP-2、MMP-9和TIMP-2 m RNA的表达水平。HE染色做病理切片。3.大鼠实验:SPF级雄性Wistar大鼠30只和TIMP-2缺陷Wistar大鼠10只购自北京维通利华实验动物技术有限公司。30只大鼠随机分成3组,即正常对照组、模型组、强力霉素组,TIMP-2缺陷Wistar大鼠为TIMP-2缺陷组。在模型组、强力霉素组和TIMP-2缺陷组中,肾动脉高压法诱导大鼠模型,正常对照组行假手术对照。手术后,强力霉素组大鼠皮下注射浓度为25mg/ml的强力霉素0.5ml,每天2次。其余三组注射生理盐水对照,连续干预1周。诱导4周后处死大鼠,取血,开颅取脑,显微镜下仔细观察颅内动脉瘤,并测量其动脉瘤大小。取出动脉瘤组织,HE染色做病理切片。采用ELISA试剂盒检测血清中MMP-2、MMP-9、TIMP-2表达水平。结果:1.人群实验:（1）动脉瘤患者血清MMP-2、MMP-9和TIMP-2蛋白表达水平显着高于正常对照组;动脉瘤患者血清中MMP-2/TIMP-2和MMP-9/TIMP-2比值显着高于正常对照组。（2）血清MMP-2蛋白在Hunt-Hess分级Ⅳ-Ⅴ、动脉瘤直径>2.5cm的患者中表达水平显着增加;血清TIMP-2蛋白在Hunt-Hess分级Ⅳ-Ⅴ的患者中表达水平显着增加;MMP-9蛋白水平、MMP-2/TIMP-2和MMP-9/TIMP-2比值在Hunt-Hess分级Ⅳ-Ⅴ、动脉瘤多发、动脉瘤直径1.2-2.5cm和>2.5cm的患者中显着升高。（3）多因素logistic回归分析表明,高水平的MMP-2、MMP-9、MMP-2/TIMP-2和MMP-9/TIMP-2是患者死亡的独立影响因素。2.家兔实验:（1）MMP-2、MMP-9和TIMP-2 m RNA在各组动脉瘤组织中相对表达顺序是6周组>3周组>1周组>对照组;MMP-2和MMP-9在对照组、1周组、3周组和6周组的两两比较中均存在显着性差异;TIMP-2在3周组和6周组间无显着差异,其余组别见均存在显着差异。（2）1周组、3周组和6周组的MMP-2、MMP-9、TIMP-2蛋白均显着高于对照组,且在1周组、3周组和6周组中逐渐增加。（3）1周组、3周组和6周组动脉瘤宽度（mm,均值）分别是2.31、4.37和5.46,三组宽度均存在显着性差异;1周组、3周组和6周组动脉瘤高度（mm,均值）分别是3.15、6.08和6.98,三组高度存在显着性差异（F=7.54,P=0.010）,但是3周组和6周组高度差异无统计学意义。（4）1周组、3周组和6周组均有动脉瘤壁弹性纤维断裂,平滑肌细胞数量减少和内皮细胞受损的病理表现,6周组受损最严重。3.大鼠实验:（1）各组大鼠血清的MMP-2、MMP-9、TIMP-2蛋白水平差异有统计学意义。模型组、强力霉素组和TIMP-2缺陷组的MMP-2和MMP-9蛋白水平较对照组升高,强力霉素组的MMP-2和MMP-9蛋白水平显着低于模型组,TIMP-2缺陷组的MMP-2和MMP-9蛋白水平显着高于模型组。模型组的TIMP-2蛋白水平显着高于对照组;强力霉素组的血清TIMP-2蛋白水平显着低于模型组;TIMP-2缺陷组的血清TIMP-2蛋白水平显着低于其余三组。（2）模型组、强力霉素组和TIMP-2缺陷组的成瘤率分别为90%、60%和100%,强力霉素组的成瘤率显着低于模型组和TIMP-2缺陷组。强力霉素组动脉瘤的宽度和高度显着低于模型组,TIMP-2缺陷组动脉瘤的宽度和高度显着高于模型组。（3）正常对照组动脉内膜、中膜和外膜结构完整,无异常细胞浸润。模型组和强力霉素组内膜变薄,弹性纤维断裂,结构紊乱,但是强力霉素组的动脉内膜较模型组厚。TIMP-2缺陷组内膜结构破坏或消失,结构紊乱,纤维断裂。结论:MMP-2、MMP-9和TIMP-2在动脉瘤的形成、进展和患者预后方面均具相关第二部分血管内介入栓塞术和开颅夹闭术对MMPs、炎症因子、氧化应激因子和Caspase3的影响目的:血管内介入栓塞术和开颅夹闭术对MMP-2、MMP-9、炎症因子、氧化应激因子和Caspase-3表达的影响,以探究其治疗效果的机制。方法:1.人群研究:研究对象纳入和手术方式同第一部分,手术后1d、3d、5d和7d取患者静脉血5ml于抗凝管中,1000rpm离心10min,取上清液。酶联免疫法检测血清中MMP-2和MMP-9表达水平。2.家兔实验:新西兰兔32只购自北京维通利华实验动物技术有限公司。分为4组,分别是对照组、模型组、血管介入组和开颅夹闭组,每组8只。对模型组、血管介入组和开颅夹闭组诱导模型,诱导方法同第二部分。对血管介入组和开颅夹闭组分别采用血管介入栓塞术和开颅夹闭术治疗家兔,手术方式同第一部分,血管介入栓塞术只采用单弹簧圈治疗。术后7天,沿颈部切口给予兔全身麻醉,暴露右侧颈总动脉,取动脉瘤组织或周围动脉血管壁组织,做相应处理检测组织中各指标水平。RT-PCR检测组织中MMP-2、MMP-9、IL-6和TNF-αm RNA相对表达水平。采用羟胺法检测组织中的SOD活力。采用比色法检测组织中总一氧化氮合成酶活性,分光光度法检测组织中Caspase-3活性。结果:1.人群结果:（1）介入组和夹闭组血清中中MMP-2和MMP-9蛋白表达水平在手术后逐渐下降。在手术后5天和7天,夹闭组患者血清中MMP-2蛋白表达水平显着高于介入组。在手术后3天、5天和7天,夹闭组患者血清中MMP-9蛋白表达水平显着高于介入组。（2）手术时间越长,术中出血量越多,手术后患者血清中MMP-2和MMP-9表达水平越高。（3）多因素Logistic回归分析结果表明,血管介入栓塞术是术后低水平MMP-2和MMP-9的独立影响因素。（4）单纯弹簧圈组、支架辅助组和球囊辅助组的血清MMP-2和MMP-9表示水平差异无统计学意义。2.家兔实验:（1）模型组、介入组和夹闭组的MMP-2和MMP-9 m RNA的相对表达水平显着高于对照组,介入组和夹闭组显着低于模型组,介入组显着低于夹闭组。（2）模型组、介入组和夹闭组的IL-6和TNF-αm RNA的相对表达水平显着高于对照组,介入组和模型组显着低于夹闭组,介入组和模型组差异无显着性意义。（3）模型组、介入组和夹闭组的SOD活性显着低于对照组,介入组显着高于夹闭组和模型组,夹闭组和模型组差异无显着性意义。模型组、介入组和夹闭组的i NOS活性显着高于对照组,介入组和夹闭组显着低于模型组,介入组显着低于夹闭组。（4）模型组、介入组和夹闭组的Caspase-3活性显着高于对照组,介入组显着低于夹闭组和模型组,夹闭组和模型组差异无显着性意义。结论:相对于开颅夹闭术,血管介入栓塞术能显着降低患者血清中的MMP-2和MMP-9,降低促炎症因子、氧化应激水平和促凋亡因子水平
章萌[2]（2020）在《促红细胞生成素导致腹主动脉瘤形成的作用及分子机制研究》文中认为研究背景腹主动脉瘤（abdominal aortic aneurysm,AAA）是一种潜在的致命性血管疾病,其定义为腹主动脉局部扩张,直径大于3cm或超过正常主动脉直径50%。AAA主要累及肾动脉分支以下的腹主动脉,患者通常没有症状,即使医生查体也难以触及扩张的腹主动脉,患者常由于其他临床指征行腹部超声或CT检查时偶然发现AAA,因此早期发现极为困难。一旦发生AAA破裂,死亡率高达85%-90%,几乎是不治之症。如何发现AAA的发病原因和快速膨胀因素并进行有效的抑制,是临床医学界面临的重大难题。尽管在AAA发病机制的研究领域已取得了巨大进展,但目前尚无有效的临床预测因子或药物治疗来降低AAA的发病风险或限制其进展。当男性和女性患者的AAA内径分别大于55mm和50mm时,可实施外科矫正术或血管内介入手术,术后存活率超过95%。因此,对于预防AAA破裂,手术矫正和支架介入是唯一有效的方法,但这些操作均有创伤性和并发症。大力研发可抑制AAA发生和发展的新药,已成为AAA研究领域中的当务之急。促红细胞生成素（EPO）由165个氨基酸和4条分子量为34kd的紧密球状结构的碳水化合物侧链组成。EPO对正常红细胞的产生至关重要,主要由胎儿肝脏及成年人肾脏合成。EPO主要通过刺激造血系统中的促红细胞生成素受体（EPOR）起到促进红细胞生成的作用。EPO可在缺氧时由肾小管间质细胞产生,通过促进红细胞生成和抑制红细胞祖细胞的凋亡而增加红细胞数量。此外,EPO潜在的造血外功能也备受关注。研究表明,EPO可由肾脏以外组织产生,且EPORs在红系祖细胞以外的其他组织中亦有广泛分布。肾脏以外产生的EPO是通过旁分泌/自分泌的途径而发挥作用,而非造血功能中的激素样作用。在创伤和炎症反应中,EPO及其受体表达明显增加,从而触发创伤组织和器官中的关键保护反应。EPO的组织保护作用已在多个动物的疾病模型中得到证实,包括局灶性脑缺血、栓塞性卒中、创伤性脑损伤、心肌缺血、急性肾损伤、肢体缺血、组织创伤等。临床研究表明,在严重创伤患者中给予EPO治疗可降低患者的死亡率。最近的研究发现,EPO可通过促进内皮细胞增殖迁移和基质金属蛋白酶2（MMP2）表达促进血管新生。接受腹主动脉腔内修复的AAA患者有三分之一患有贫血,其血红蛋白水平与AAA的大小呈独立负相关,但其机制并不明确。最近一项高脂血症小鼠中输注血管紧张素Ⅱ（Ang Ⅱ）的实验研究发现,抑制缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）减弱了 AAA的进展。众所周知,慢性贫血和HIF可增加EPO的生成,而最近的证据表明,Ang Ⅱ可直接刺激造血祖细胞的受体或间接调节EPO的基因表达来影响造血功能。有罕见病例报道,一位长期进行血液透析并应用重组人EPO治疗的患者,无明显原因地对重组人EPO产生了耐药性,并CT检测发现了 AAA。这些临床和实验研究强烈提示EPO和AAA之间可能存在着某种联系,主动脉壁新生血管的形成,也被称为血管新生,是实验和临床AAAs的病理标志。有证据表明,主动脉瘤管壁内的血管新生可能在动脉瘤的进展和破裂中起关键作用。在人动脉瘤组织中,尤其是在邻近破裂区域和被白细胞浸润的区域,血管新生更为普遍。抑制实验性AAA进展的药物,也会减少动脉壁血管新生。基质金属蛋白酶（MMPs）家族密切参与新血管形成的过程,并发挥关键的促血管生成作用,而MMPs与动脉管壁的降解和破裂有关。缺氧和炎症是刺激血管新生的两个关键因素。HIF-1α及其靶基因在人类和实验性AAAs中表达增加。抑制HIF-1a治疗可以阻止实验性AAA进展,并减轻管壁白细胞浸润、血管新生和MMPs的过度表达。炎症和免疫相关疾病与血管新生相关,因为大多数白细胞能够产生一系列促血管生成因子,如血管内皮生长因子（VEGF）、血小板衍生生长因子（b-FGF）、碱性成纤维细胞生长因子（b-FGF）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）以及蛋白酶,如糜蛋白酶、胰蛋白酶、MMPs。有报道称肥大细胞特异性的糜蛋白酶和胰蛋白酶诱导内皮细胞（ECs）表达粘附分子和趋化因子,其利用趋化因子受体2（CCR2）作为募集趋化因子的受体,降解基质蛋白,促进血管新生,诱导平滑肌细胞凋亡。AAA发生和发展过程涉及了多种病理过程,比如血管新生、炎症浸润、氧化应激和平滑肌细胞凋亡等,在本研究中,我们提出如下科学假说,在ApoE-/-小鼠或野生型小鼠中,EPO可以剂量依赖性地导致AAA的发生,并且EPO通过促进血管新生,增加炎症浸润,诱导平滑肌凋亡,导致AAA的发生,为了验证这一假说,我们精心设计并进行了一系列的体内外实验。研究目的1.探讨EPO是否可在ApoE-/-小鼠和野生型小鼠中导致AAA的产生及其剂量效应;2.探讨EPO对小鼠AAA的影响是否受高脂喂养和高脂血症的影响;3.探讨EPO通过何种类型受体发挥作用对AAA产生影响;4.探讨EPO引起小鼠AAA的病理生理机制;5.探讨EPO对血管壁三种细胞（内皮细胞、平滑肌细胞和巨噬细胞）的作用及其机制。6.探讨在AAA临床患者中,血清EPO与AAA的发生有无关联。研究方法1.动物模型的建立和分组（1）雄性ApoE-/-小鼠60只,全程给予高脂饲料喂养,随机分为4组,每组15只;分别给予生理盐水、EPO 2,500 IU/kg/day、EPO 5,000 IU/kg/day 和 EPO 10,000 IU/kg/day腹腔注射,期间每天观察小鼠有无死亡情况,记录死亡数量和原因,4周后小鼠给予安乐死。（2）雄性ApoE-/-小鼠60只,全程给予普通饲料喂养,随机分为4组,每组15只;分别给予生理盐水、EPO 2,500 IU/kg/day、EPO 5,000 IU/kg/day 和 EPO 10,000 IU/kg/day腹腔注射,期间每天观察小鼠有无死亡情况,记录死亡数量和原因,4周后小鼠给予安乐死。（3）雄性野生型小鼠60只,全程给予普通饲料喂养,随机分为4组,每组15只;分别给予生理盐水、EPO2,500 IU/kg/day、EPO 5,000 IU/kg/day 和 EPO 10,000 IU/kg/day腹腔注射,期间每天观察小鼠有无死亡情况,记录死亡数量和原因,4周后小鼠给予安乐死。（4）雌性APoE-/-小鼠30只,全程给予高脂饲料喂养,随机分为2组,每组15只;雌性野生型小鼠30只,全程给予普通饲料喂养,随机分为2组,每组15只;分别给予生理盐水和EPO5,000IU/kg/day腹腔注射,期间每天观察小鼠有无死亡情况,记录死亡数量和原因,4周后小鼠给予安乐死。（5）雄性ApoE-/-小鼠45只,全程给予高脂饲料喂养,随机分为3组,每组15只;雄性野生型小鼠45只,全程给予普通饲料喂养,随机分为3组,每组15只;分别给予生理盐水、焦谷氨酸螺旋B表面肽（pHBSP）30 mg/kg/day和pHBSP 300mg/kg/day持续泵入,期间每天观察小鼠有无死亡情况,记录死亡数量和原因,4周后小鼠给予安乐死。（6）雄性ApoE-/-小鼠或野生型小鼠各30只,随机分为两组,每组15只;对照组给予生理盐水持续泵入,实验组给予Ang Ⅱ（1.44mg/kg/day）持续泵入,全程给予高脂高胆固醇喂养或普通饲料喂养,期间每天观察小鼠有无死亡情况,记录死亡数量和原因,4周后小鼠给予安乐死。2.鼠尾血压测量应用小动物鼠尾血压计测量所有小鼠的血压,测量部位为小鼠尾动脉,每只小鼠检测3次,取其平均值作为最终数值。3.组织取材小鼠取材前饥饿6-8小时,麻醉小鼠后取材,留取全血、血清、心脏、肝脏、脾脏、肾脏、脂肪组织和主动脉;各组织一部分放入液氮速冻,-80℃冰箱保存,一部分置于4%多聚甲醛中固定,以备后续实验。4.血脂血常规、肝肾功检测检测各组小鼠血清总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、肌酐和尿素氮的水平;检测各组小鼠全血红细胞计数、血红蛋白含量和红细胞压积。5.血管组织全基因组测序分析接受EPO中剂量注射的ApoE-/-小鼠3只,正常对照组3只,取出其主动脉组织,加入RNAlater液氮速冻,送至北京诺禾致源生物科技有限公司进行RNA测序。6.病理学检测腹主动脉组织或肝肾组织制备石蜡切片,主要进行H&E染色、Verhoff弹力纤维染色和 Masson 染色。对 Endomucin、MMP2、MMP9、MT1-MMP、CD68、ICAM-1、VCAM-1、IL-6、IL-1β、MCP-1和TNF-α等指标进行免疫组织化学染色,对 CD68、IL-6、IL-1β、MCP-1、TNF-α、CD144 和 Ki67 等指标进行组织免疫双荧光染色。7.蛋白免疫印迹实验提取腹主动脉段血管组织蛋白和各种细胞总蛋白,进行BCA蛋白浓度测定。配制SDS-PAGE凝胶,通过蛋白免疫印迹检测胶原Ⅰ、胶原Ⅲ、MMP2、MMP9、MT1-MMP、VEGF、TGF-β1、KDR、Tie2、CD68、ICAM-1、VCAM-1、IL-6、IL-1β、MCP-1和TNF-α的蛋白含量。8.明胶酶谱实验配制含1%明胶的SDS-PAGE凝胶,提取腹主动脉段血管组织蛋白和各种细胞总蛋白,并进行BCA蛋白浓度测定。使用明胶酶谱试剂盒检测MMP2和MMP9的蛋白酶活性。9.RNA 提取、mRNA 逆转录、RT-PCR提取腹主动脉段血管组织RNA和各种细胞总RNA,应用TaKaRa#RR047A逆转录试剂盒进行mRNA逆转录。通过实时荧光定量PCR,得出循环阈值Ct值,通过公式2-ΔΔCT计算出cDNA的相对表达水平。10.细胞培养和信号通路（1）根据EPO浓度梯度预实验,5 IU/mL EPO刺激HUVEC 24小时,所表达的MMP2和MMP9酶活性最高,因此接下来的细胞实验选用EPO 5 IU/mL刺激24小时,作为实验组条件;（2）HUVEC、HAEC、HASMC和巨噬细胞:实验组加入5IU/mLEPO,对照组加入等体积1x PBS,刺激24小时,收集细胞和上清;（3）HUVEC实验组加入5 IU/mL EPO,对照组加入等体积1x PBS,刺激24小时,收集上清;加入预先种好板的HASMC中,刺激24小时,收集细胞和上清;（4）HUVEC实验组加入5 IU/mL EPO,对照组加入等体积1x PBS,刺激24小时,收集上清;加入预先种好板的巨噬细胞中,分别刺激0、2、4、6、8和10小时,收集细胞和上清;（5）HUVEC实验组加入10mg/L pHBSP,对照组加入等体积1xPBS,刺激24小时,收集细胞和上清;（6）实验分为4组:对照组加入DMSO（作为溶剂对照）,EPO组加入EPO（5 IU/mL）+DMSO,JAK2 抑制剂组加入 EPO（5 IU/mL）+TG101348（1 μM）[49,50],STAT5 抑制剂组加入 EPO（5IU/mL）+CAS285986-31-4（50μg/mL）,刺激24小时,收集细胞或者观察拍照。11.EDU细胞增殖实验使用EDU试剂盒检测HUVEC或HASMC的增殖能力。12.内皮细胞迁移实验通过划痕实验和Transwell小室细胞迁移实验,检测HUVEC和HAEC在EPO作用下的迁移能力。13.体外小管生成实验利用低生长因子Matrigel基质胶观察HUVEC和HAEC在EPO作用下体外小管生成能力。14.主动脉环出芽实验取野生型小鼠胸主动脉段,将血管剪成长约1mm的小段,置于Matrigel基质胶中,加入相应的药物刺激,每天观察拍照,软件分析计算主动脉出芽数量和长度。15.单核-内皮细胞粘附实验将HUVEC给予EPO刺激24小时;用BCECF-AM（pH荧光探针）标记THP-1细胞悬液;取1x105/mL THP-1混悬液加入到上述HUVEC细胞培养板中,孵育至少1小时;4%多聚甲醛固定细胞。16.TUNEL细胞凋亡检测给予HASMC EPO或者EPO处理过的HUVEC上清干预,使用TUNEL试剂盒检测HASMC的凋亡情况。17.腹腔巨噬细胞的提取选取8-12周雄性野生型小鼠,提前3天给予腹腔注射6%淀粉溶液1mL;小鼠脱颈处死,撕开皮肤,充分暴露腹膜;用无菌注射器注入DMEM于腹腔中,回抽液体至新的50mL离心管中;冲洗腹腔3次,直至DMEM变澄清,得到腹腔巨噬细胞混悬液。18.体内基质胶塞血管新生实验使用高浓度Matrigel基质胶,配制基质胶与药物混合液,取0.7mL基质胶混合液,注入小鼠皮下。14天后,切除基质胶塞;4%多聚甲醛固定过夜,观察基质胶塞大体形态颜色;石蜡包埋,切片,进行常规染色和免疫组化。19.酶联免疫吸附实验使用ELISA方法检测血清中EPO的水平。20.腹主动脉瘤病人血清收集我们纳入40例AAA患者,在患者住院24小时内采集血样。患有贫血、心衰、慢性呼吸系统疾病和肾功能衰竭的病人排除入组。纳入45例健康志愿者的血清作为正常对照组。21.数据统计分析所有数据均以均数±标准误来表示,两组计量资料采用独立样本t检验,多组计量资料采用单因素方差分析LSD事后检验;计数资料采用卡方检验;生存分析采用Log-Rank检验;P<0.05认为有统计学差异。研究结果1.EPO剂量依赖性地诱导ApoE-/-小鼠和野生型小鼠AAA的发生腹腔注射高中低剂量EPO4周后,发现EPO剂量依赖的增加了小鼠AAA的发生率,腹主动脉直径明显增加;同时,小鼠死亡率也呈剂量依赖性增加。EPO高剂量组诱导ApoE-/-小鼠AAA发生率与Ang Ⅱ相当,而EPO高剂量组诱导野生型小鼠AAA发生率明显高于Ang Ⅱ。2.EPO导致ApoE-/-小鼠和野生型小鼠腹主动脉管壁增厚弹力板断裂结果显示注射低中高剂量EPO后,动脉管壁明显增厚,弹力纤维断裂,管腔内可伴有血栓形成。3.EPO不影响ApoE-/-、鼠和野生型小鼠血压和血脂的变化EPO注射4周后,与对照组相比,EPO低中高剂量组血压并无显着差异;同样,EPO注射后没有影响小鼠血脂水平变化。由此推断,EPO注射4周,对小鼠的血压和血脂无显着影响。4.EPO不影响ApoE-/-小鼠和野生型小鼠肝功和肾功的变化EPO注射四周后,与对照组相比,EPO低中高剂量组的指标没有明显变化;取对照组和EPO高剂量组小鼠的肝脏和肾脏进行H&E染色,组织形态亦没有明显差别。由此,从药物毒理学角度推测,EPO注射4周,并没有引起肝脏和肾脏的功能障碍。5.高脂饮食不影响EPO对ApoE-/-小鼠AAA形成的剂量效应在全程普通饲料喂养过程中,发现EPO剂量依赖的增加了 ApoE/-小鼠AAA的发生率,且与高脂喂养模型的发生率无显着差异;同时,高脂喂养与否,EPO高剂量组小鼠的死亡率无明显统计学意义。由此得出,高脂饮食不影响EPO对ApoE-/-小鼠AAA形成的剂量效应。6.EPO可诱导雌性ApoE-/-小鼠和野生型小鼠AAA的发生结果显示,在中剂量EPO刺激下雌性ApoE-/-小鼠和雌性野生型小鼠均有AAA发生,但都略低于雄性小鼠发生率,这符合人类AAA发病率中,男性高于女性的特征。7.pHBSP不能剂量依赖性的诱导小鼠AAA的发生结果显示pHBSP不能诱导两种基因型的小鼠发生AAA,因此推断EPO可能通过同源二聚体受体发挥作用,导致AAA。8.AAA患者血清EPO水平明显增高两组之间在年龄、性别、肾功能和药物治疗方面没有显着差异,但吸烟者在AAA组比正常对照组更常见。通过分析显示,年龄在>65岁和≤65岁之间、男性和女性之间、吸烟者和非吸烟者之间的腹主动脉直径没有显着差异,这表明在这组患者中,AAA直径不受传统动脉粥样硬化危险因素的影响。与健康对照组相比,AAA患者的血清EPO水平显着升高,这表明该组患者分泌了更多的EPO于循环血液中。9.基因测序分析EPO对ApoE-/-小鼠主动脉组织mRNA表达谱的影响基因本体论分析发现,两组间差异基因主要富集在血管形态发生、血管新生、细胞周期和迁移、炎症反应、白细胞浸润、和细胞外基质重塑中。10.血管新生和胶原代谢参与EPO诱导AAA的过程结果显示,与对照组相比,EPO组腹主动脉管壁胶原显着减少,尤其是胶原Ⅰ和胶原Ⅲ表达。MMPs蛋白表达和活性明显高于对照组。EPO组腹主动脉管壁微血管密度明显增加,VEGF、TGF-β1、KDR和Tie2蛋白表达明显增高。11.炎症反应参与EPO诱导AAA的过程结果显示,EPO组腹主动脉CD68阳性细胞浸润动脉壁的程度明显高于对照组。同时 ICAM-1、VCAM-1、IL-6、IL-1β、MCP-1 和 TNF-α 等炎症因子 mRNA水平和蛋白水平表达明显多于对照组。CD68阳性细胞来源的炎症因子明显增高。MSD检测发现,血清炎症因子水平也明显高于对照组小鼠。12.EPO对小鼠红细胞、白细胞和血小板数量的影响给予小鼠EPO注射4周后,结果显示与对照组相比,EPO组红细胞计数、血红蛋白和红细胞压积明显增高。而白细胞计数、单核细胞计数、淋巴细胞计数、粒细胞计数和血小板计数在两组之间无显着性差别。13.三种细胞中内皮细胞EPOR mRNA表达水平最高与平滑肌细胞和巨噬细胞相比,内皮细胞的EPOR表达最高,提示EPO可能主要以内皮细胞为靶点发挥作用。14.EPO促进内皮细胞的增殖和迁移通过EDU实验可以观察到EPO促进HUVEC增殖。通过划痕实验和Transwell小室细胞迁移实验观察到EPO促进HUVEC和HAEC迁移。15.EPO促进内皮细胞体外小管形成和小鼠主动脉环出芽结果显示EPO组内皮细胞更容易形成闭合的管状结构。小鼠胸主动脉环种植于Matrigel基质胶中,在EPO刺激下,主动脉环比对照组更容易出芽,出芽的数量和出芽长度明显增加。16.EPO促进内皮细胞血管新生相关蛋白的表达结果显示,给予EPO刺激后HUVEC或HAEC的MMPs蛋白表达水平和活性明显高于对照组。EPO组细胞的KDR和Tie2表达明显增高。17.pHBSP不能促进HUVEC迁移、体外小管形成和MMPs的表达结果显示,对照组和pHBSP组细胞迁移数量无明显差别,形成小管数量和小管总长度无显着差异。给予pHBSP刺激后HUVEC的MMPs蛋白表达水平和酶活性与对照组无明显差别。18.EPO促进内皮-单核细胞间的粘附作用结果显示,与对照组相比,EPO组粘附的单核细胞数明显增多,由此得出,EPO能够促进内皮-单核细胞间的粘附作用。19.EPO对巨噬细胞炎症因子表达的影响直接给予EPO刺激,巨噬细胞炎症因子的表达无意义;溶剂对照或EPO刺激HUVEC 24小时后,取细胞培养液来刺激巨噬细胞,结果显示,IL-6、IL-1β和TNF-α在6小时明显增高,MCP-1在8小时明显增高,由此得出,内皮细胞参与是EPO诱导巨噬细胞炎症因子上调的关键环节。20.EPO对巨噬细胞MMPs表达的影响溶剂对照或EPO刺激巨噬细胞24小时后,两组MMP2和MMP9的蛋白表达和酶活性无明显差别。溶剂对照或EPO刺激HUVEC 24小时后,取细胞培养液来刺激巨噬细胞,结果发现,两组MMP2和MMP9的蛋白表达和酶活性依然没有明显差别。由此推断,EPO并不能影响巨噬细胞MMPs的表达。21.EPO对平滑肌细胞胶原蛋白、MMPs和凋亡相关蛋白表达的影响给予浓度梯度的EPO刺激HASMC后,其胶原Ⅰ、胶原Ⅲ、MMP2和MMP9表达没有明显变化。EPO组HASMC表达BCL2和BAX与对照组也没有明显差异。溶剂对照或EPO刺激HUVEC 24小时后,取细胞培养液来刺激平滑肌细胞,结果显示,EPO组HASMC表达胶原Ⅰ和胶原Ⅲ明显减少,而MMP2和MMP9蛋白表达和酶活性明显增加。EPO组表达抗凋亡蛋白BCL2明显少于对照组,而表达促凋亡蛋白BAX明显多于对照组。22.EPO对平滑肌细胞增殖和凋亡的影响结果显示直接给予EPO刺激,诱导的HASMC增殖和凋亡的数量与对照组无明显差别。溶剂对照或EPO刺激HUVEC 24小时后,取细胞培养液来刺激HASMC,结果显示EPO组TUNEL 阳性细胞比例明显高于对照组,而EDU 阳性细胞比例明显低于对照组。23.EPO在体内水平促进血管新生和炎症浸润14天后从小鼠体内取出基质胶塞显示:混有溶剂对照的基质胶塞呈清晰的黄色,而含有EPO的基质胶塞呈红色,说明基质胶塞内形成了血管。EPO组侵袭的细胞和血管数量明显增多。EPO组CD144和Ki67阳性细胞数量明显高于对照组,说明EPO促进内皮细胞的增殖和迁移。并且EPO组切片CD68阳性细胞浸润程度和炎症因子表达明显高于对照组,这表明EPO促进炎症细胞入侵和炎症因子的表达。24.EPO通过JAK2/STAT5通路诱导血管新生结果显示,EPO明显增强了 JAK2和STAT5的磷酸化水平,而JAK2抑制剂明显抑制了 JAK2和STAT5的磷酸化水平,STAT5抑制剂只抑制了 STAT5的磷酸化水平,并没有影响JAK2的磷酸化水平。加入JAK2抑制剂和STAT5抑制剂后明显抑制了内皮细胞闭合管状结构的形成。通过以上结果可知,EPO通过JAK2/STAT5通路促进内皮细胞形成新生血管。25.EPO诱导AAA形成和发展的机制通过以上体内体外实验,我们基本得出EPO诱导AAA形成和发展的机制为:EPO刺激血管内皮细胞,激活JAK2/STAT5通路,促进血管新生、基质金属蛋白分泌、平滑肌细胞凋亡,抑制平滑肌细胞合成胶原蛋白,增强炎性细胞聚集和炎症因子释放,导致AAA的形成和发展。实验结论1.EPO剂量依赖性地促进了 ApoE-/-小鼠和野生型小鼠AAA的形成,EPO导致ApoE-/-小鼠AAA发生率与Ang Ⅱ相当,EPO导致野生型小鼠AAA发生率明显高于Ang Ⅱ;2.EPO是通过（EPOR）2同型二聚体发挥作用促进AAA的形成;3.EPO通过引起血管新生、炎症反应和胶原降解而导致AAA的形成;4.EPO通过内皮细胞的介导诱导巨噬细胞表达炎症因子,抑制HASMC胶原分泌,促进HASMC凋亡。研究背景在腹主动脉瘤（AAA）发生发展过程中,由于AAA常与主动脉壁严重动脉粥样硬化损伤相关,因此传统认为AAA是动脉粥样硬化的结果。但这一传统观点近年来受到越来越多的挑战。与不合并动脉粥样硬化性心血管疾病的人群相比,合并冠心病、周围血管疾病、颈动脉疾病、脑血管疾病的患者发生AAA的OR值分别为1.72、1.59、1.51和1.18。在6446例接受颈动脉、股动脉和腹主动脉超声检查的Troms0研究中,斑块负荷与AAA发生率之间无量效关系,提示动脉粥样硬化与AAA可能是伴随关系而非因果关系。糖尿病是动脉粥样硬化的重要危险因素,但却是AAA的保护性因素,在美国310万人AAA流行病学调查中,与非糖尿病患者相比,糖尿病患者发生AAA的OR值为0.75,提示糖尿病可使AAA风险减少25%。这一反常现象提示,动脉粥样硬化与AAA可能是两个互相独立的疾病。吸烟与AAA的发生有很强的临床联系。吸烟人群中AAA的患病率是终身不吸烟人群的四倍以上。一份比较慢性吸烟者罹患不同疾病的相对风险的报告显示,罹患AAA的风险比罹患冠状动脉疾病的风险高出三倍,比罹患脑血管疾病的风险高出近五倍。2011年在瑞典进行的26256例65岁以上老年男性超声检查结果表明,AAA的发病率已下降至2.2%,其主要原因可能是吸烟人群的减少,提示控制吸烟可能是一个预防AAA的有效策略。基于这些临床观察,慢性吸烟可能是AAA发生发展的最重要的环境危险因素。除了吸烟外,其他危险因素还包括男性、年龄、高血压、慢性阻塞性肺疾病、高脂血症和家族病史。动物模型是一种强有力的工具,可以提供AAA发生和发展机制的理解。目前,AngⅡ注射模型是最常用的AAA动物模型。在高脂喂养的ApoE-/-或LDLR-/-小鼠皮下埋置微量渗透泵,持续注射大剂量Ang Ⅱ,可导致AAA,因此目前有关AAA发生和发展的细胞和分子机制主要来自于这类模型的研究。已提出的AAA发病机制包括:氧化应激机制:AAA患者或小鼠模型中促氧化剂增多,而抗氧化剂减少,从而导致ROS水平的上升,氧化应激增加,刺激血管紧张素转换酶（ACE）表达,内源性Ang Ⅱ增多,炎症反应增强。肾素-血管紧张素激活机制:持续滴注AngⅡ首先导致腹主动脉的炎症反应,继之出现弹性蛋白降解、血管中层断裂和管腔扩张,这些作用通过AT1R所介导,使用ACEI、ARB和ACE2过表达等方法以减少Ang Ⅱ的产生和作用,均可减轻小鼠AAA病变。AMPKa2激活机制:尼古丁和Ang Ⅱ可通过激活细胞膜表面的G蛋白偶联受体增加胞内的活性氧水平,活性氧可激活AMPK,形成AMPKa2/AP-2o/MMP2级联反应,从而活化MMP2的基因转录,最终导致血管壁细胞外基质的降解加速,引发AAA。胶原代谢机制:炎性因子不仅通过刺激MMPs表达而增加细胞外间质的降解,而且使得胶原合成障碍,加速AAA的形成。由于AAA是一个病因不明、病程迁延、病变发展、治疗有限、预后险恶的多因素疾病,且所得出的干预靶点在临床试验中尚无成功的先例,因此,对于AAA发生和发展机制的研究,我们仍处于早期阶段。Ang Ⅱ可以促进特定造血细胞系的増殖,而且Ang Ⅱ也参与了EPO在体内的调控。对健康志愿者的临床研究表明,Ang Ⅱ通过激活AT1R使血清EPO浓度升高约35%或更高。此外,在另一项对健康志愿者的研究中,ACEI类药物卡托普利和依那普利显着降低了血浆EPO水平,降幅高达20-30%。这些发现表明Ang Ⅱ在体内通过受体依赖信号调节EPO的产生,但EPO是否介导了Ang Ⅱ在体内的生物学作用,且引起AAA产生尚无报道。结合本研究论文I和论文Ⅱ的结论,EPO能够导致AAA的产生,因此我们假设在ApoE-/-小鼠中,EPO介导了Ang Ⅱ诱导的AAA的发生和发展,因此我们设计了一系列体内体外实验以验证此假说。研究目的1.探讨EPO/EPOR信号通路在Ang Ⅱ诱导AAA过程中起到的作用;2.探讨Ang Ⅱ诱导野生型小鼠AAA发生率较低的原因;3.探讨Ang Ⅱ作用于EPO的分子机制。研究方法1.动物模型的建立和分组（1）雄性ApoE-/-小鼠60只,随机分为4组:其中对照组给予生理盐水持续泵入+生理盐水尾静脉注射,Ang Ⅱ组给予Ang Ⅱ持续泵入+生理盐水尾静脉注射,Ang Ⅱ+IgG2a组给予Ang Ⅱ持续泵入+EPO尾静脉注射,Ang Ⅱ+EPO中和抗体组给予Ang Ⅱ持续泵入+EPO中和抗体尾静脉注射,4周后小鼠给予安乐死。（2）实验组为EPOR+/-ApoE-/-双敲小鼠,对照组为同窝ApoE-/-小鼠,同时给予Ang Ⅱ持续栗入,4周后小鼠给予安乐死。（3）雄性野生型小鼠30只,随机分为两组,每组15只;对照组给予生理盐水持续栗入,实验组给予Ang Ⅱ持续泵入,全程给予普通饲料喂养,4周后小鼠给予安乐死。2.细胞培养和分组（1）实验分为四组:对照组（溶剂对照）,Ang Ⅱ（50μM）组,Ang Ⅱ+替米沙坦（lμM）组,AngII+PD123319（50μM）组,刺激12小时,收集细胞;（2）实验分为四组:对照组（溶剂对照）,Ang Ⅱ（50μM）组,Ang 11+替米沙坦（lμM）组,AngII+U0126（50μM）组,刺激12小时,收集细胞。3.鼠尾血压测量在给予药物干预4周末,应用小动物鼠尾血压计测量所有小鼠的血压,测量部位为小鼠尾动脉,每只小鼠检测3次,取其平均值作为最终数值。4.组织取材步骤小鼠取材前饥饿6-8小时,麻醉小鼠后取材,留取全血、血清、心脏、肝脏、脾脏、肾脏、脂肪组织和主动脉;各组织一部分放入液氮速冻,-80℃冰箱保存,一部分置于4%多聚甲醛中固定,以备后续实验。5.血常规检测使用兽用全自动血液细胞分析仪检测各组小鼠全血红细胞计数,血红蛋白含量和红细胞压积。6.免疫组织化学染色腹主动脉组织制备石蜡切片,对IL-6、IL-lβ、MCP-1和TNF-α进行免疫组织化学染色。7.蛋白免疫印迹实验提取腹主动脉段血管姐织蛋白和各种细胞总蛋白,进行BCA蛋白浓度测定。配制SDS-PAGE凝胶,通过蛋白免疫印迹检测EPO、EPOR、ERK1/2的蛋白含量。8.RNA提取、mRNA逆转录、RT-PCR提取腹主动脉段血管组织RNA和各种细胞总RNA,应用TaKaRa#RR047A逆转录试剂盒进行mRNA逆转录。通过实时荧光定量PCR,得出循环阈值Ct值,通过公式2-△△CT计算出cDNA的相对表达水平。9.酶联免疫吸附实验使用ELISA方法检测血清中EPO的水平。10.数据统计分析所有数据均以均数±标准误来表示,两组计量资料采用独立样本t检验,多组计量资料采用单因素方差分析LSD事后检验;不符合正态分布的数据采用秩和检验;计数资料采用卡方检验;生存分析采用Log-Rank检验;户<0.05认为有统计学差异。研究结果1.EPO在Ang Ⅱ诱导ApoE-/-小鼠发生AAA的过程中起到重要作用结果显示,Ang Ⅱ组和Ang Ⅱ+IgG2a组AAA发生率明显增高;Ang Ⅱ组和Ang Ⅱ+IgG2a组之间无显着性差异,而Ang Ⅱ+EP0中和抗体组AAA发生率降为20%。Ang Ⅱ+EP0中和抗体组腹主动脉直径明显降低,死亡率明显下降。2.EPOR在Ang Ⅱ诱导ApoE-/-小鼠发生AAA的过程中起到重要作用由于EPOR-/-纯合小鼠致死,故我们只能获得EPOR+/-杂合小鼠。给予Ang Ⅱ埋泵4周后,结果显示与ApoE+小鼠组相比,EPOR+/-ApoE-/-双敲小鼠组AAA发生率明显降低,且腹主动脉直径明显降低,死亡率降低至0。3.EPOR敲除抑制Ang Ⅱ诱导ApoE-/-小鼠AAA中炎症因子的表达EPOR+/-ApoE-/-双敲小鼠组腹主动脉管壁IL-6、IL-lp、MCP-1、TNF-a的表达明显少于ApoE-/-小鼠组。4.各组小鼠血清EPO水平比较ApoE-/-小鼠和野生型小鼠给予Ang Ⅱ千预后,Ang Ⅱ组的血清EPO水平比对照组高出2倍以上。同样给予Ang Ⅱ干预的ApoE-/-小鼠的血清EPO水平显着高于野生型小鼠的血清EPO水平。在野生型小鼠中,EPO注射组导致的血清EPO水平远高于Ang Ⅱ干预组。在Ang Ⅱ和EPO诱导的ApoE-/-小鼠和野生型小鼠AAA发病机制中EPO起了至关重要的作用。5.EPO介导了Ang Ⅱ诱导ApoE-/-小鼠的脾肿大和造血增加解剖小鼠后发现,与对照组相比,Angll组小鼠有明显的脾肿大现象,且脾脏重量明显高于对照组。EPO中和抗体治疗后,脾脏的大小和重量明显减少,且可显着抑制Ang Ⅱ诱导的RBC、HGB和HCT的增加。而EPOR+/-ApoE-/-小鼠与ApoE-/-小鼠相比,经Ang Ⅱ干预后造血表型无明显改变。6.Ang Ⅱ上调EPO表达的机制与对照组相比,Ang Ⅱ组表达EPO水平明显增高,Ang 11+替米沙坦组表达EPO水平显着低于Ang Ⅱ组,Ang Ⅱ+PD123319组表达EPO水平与Ang Ⅱ组无明显差异。Ang Ⅱ+U0126组表达EPO含量明显低于Ang Ⅱ组。Ang Ⅱ对786-0和HASMC有同样的作用。实验结论1.EPO/EPOR信号通路在Ang Ⅱ诱导AAA过程中起到关键性作用;2.血清EPO水平在Ang Ⅱ和EPO诱导的ApoE-/-和野生型小鼠AAA发病机制中起到关键作用;3.Ang Ⅱ通过AT1R/ERK1/2通路上调肾脏细胞和平滑肌细胞EPO表达,分别增加循环EPO水平和局部组织EPO水平。
何薇[3]（2020）在《植入镁对大鼠牙周炎作用的实验研究》文中指出慢性牙周炎是以菌斑为始动因子,牙周组织破坏为临床特征的慢性炎症性疾病,其发病率高,是导致成年人失牙的主要原因。牙槽骨丧失是牙周炎的主要病理表现,是骨吸收增加和骨生成减少的综合结果。骨丧失与牙周组织中炎症因子高表达紧密相关,其中肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor alpha,TNF-α）是导致牙周炎骨丧失的重要因素。现有的牙周炎治疗方法难以在同一步骤兼顾骨再生和炎症抑制,并且普遍具有治疗周期长、花费高等缺点。金属镁具有生物相容性好、可在体内分解、促进成骨、抑制炎症等优点,有望以植入物的形式应用于牙周炎治疗。本实验利用大鼠拔牙后种植联合牙周炎模型,研究了在牙槽窝内植入纯镁对大鼠实验性牙周炎的影响,并利用牙槽骨骨膜干细胞和巨噬细胞体外牙周炎模型,探讨了镁离子对牙周炎的作用机制。本实验首先在大鼠下颌切牙拔牙窝内植入镁棒（以钛棒作为对照组）,建立拔牙后种植模型,同时在同侧下颌第一磨牙建立牙周炎模型。建模2周和6周后,用扫描电镜能谱分析检测镁离子渗透情况,以显微电子计算机断层扫描（micro computed tomography,micro CT）和牙周组织学分析评价牙槽骨丧失程度和炎症水平。然后,根据实验组观察到的牙周炎环境中骨膜成骨的现象,从以下两个角度探讨镁植入物对牙周炎的作用机制:（1）成骨角度:用神经示踪、免疫荧光染色、细胞增殖、成骨诱导等实验探索镁植入物促进牙槽骨骨膜成骨的机制;（2）炎症角度:用免疫组化染色和牙周炎细胞模型检测镁离子对牙周炎组织和细胞TNF-α表达的影响,用牙槽骨骨膜干细胞的增殖和成骨诱导实验,研究在TNF-α模拟的牙周炎环境下,镁离子对骨膜成骨的调节作用。实验结果显示:（1）大鼠牙槽窝内的镁植入物降解生成的镁离子可渗透至牙槽骨表面,减少实验性牙周炎的骨丧失,减轻局部炎症反应;（2）镁植入物来源的镁离子可促进非炎症区域以及牙周炎区域的牙槽骨骨膜成骨,原因主要为镁离子直接刺激骨膜干细胞增殖和成骨分化;（3）镁植入物降解生成的镁离子可抑制巨噬细胞分泌TNF-α,降低局部牙周组织中TNF-α的浓度;TNF-α抑制牙槽骨骨膜干细胞的增殖和成骨分化,镁离子可部分逆转TNF-α对骨膜成骨的不利影响。综上所述,我们发现了镁植入物对大鼠实验性牙周炎的抑制作用,并且从镁离子促进骨膜成骨和减弱炎症因子（主要是TNF-α）对骨膜成骨的不利影响两方面解释了作用机制,为镁植入物治疗牙周炎的临床应用建立了前期基础。
赵星智[4]（2019）在《二甲双胍对腹主动脉瘤发病的影响及分子机制研究》文中认为目的:研究二甲双胍（Met）对弹力蛋白酶灌注诱导大鼠腹主动脉瘤模型的影响,探讨二甲双胍治疗腹主动脉瘤可能的分子机制,为临床应用二甲双胍防治腹主动脉瘤提供实验室依据。研究方法:本研究以动物实验为主,动物实验选择30只SD大鼠随机分为3组,每组10例。其中20只大鼠灌注弹力蛋白酶构建腹主动脉瘤动物模型,分别作为AAA组和AAA+Met组,10只灌注生理盐水作为对照组;AAA+Met组每天采用二甲双胍灌胃100mg/（kg·d）。建模后饲养28d,之后处死大鼠,测定各组大鼠腹主动脉最大直径,计算各组大鼠腹主动脉瘤发生率;选择部分动脉制作石蜡切片,采用HE染色观察主动脉管壁完整性及炎性细胞浸润情况,采用免疫组化测定大鼠主动脉组织CD68+巨噬细胞表达水平;采用Western blot检测血管平滑肌磷酸化-腺苷酸活化蛋白激酶（p-AMPK）、雷帕霉素靶蛋白（p-mTOR）、p70核糖体蛋白S6激酶（p70S6K）、真核细胞始动因子4E结合蛋白（4EBP1）等蛋白的表达情况。结果:1)腹主动脉瘤发生率:对照组、AAA组和AAA+Met组的腹主动脉瘤发生率分别为0%、80%、30%,组间比较差异具统计学意义（P<0.05）,AAA组大鼠腹主动脉瘤发生率明显高于对照组（P<0.05）,AAA+Met组低于AAA组（P<0.05）。2)主动脉直径测定:对照组、AAA组及AAA+Met组腹主动脉最大直径比较差异具统计学意义（P<0.05）,与对照组比较,AAA组和AAA+Met组大鼠腹主动脉最大直径明显增大（P<0.05）,AAA+Met组增大趋势低于AAA组（P<0.05）。3)HE染色实验:与对照组比较,AAA组和AAA+Met组大鼠血管壁明显增厚（P<0.05）,动脉中膜及外层膜伴有炎症细胞浸润增加,AAA+Met组血管壁增厚程度及炎性细胞浸润增加小于AAA组,差异具统计学意义（P<0.05）。4)免疫组化实验:各组大鼠血管壁CD68+巨噬细胞的表达存在显着差异（P<0.05）,AAA组大鼠血管壁CD68+巨噬细胞的表达高于对照组及AAA+Met组（P<0.05）,AAA+Met组大鼠低于AAA组,差异具统计学意义（P<0.05）。5)Western blot检测:与对照组大鼠比较,AAA组及AAA+Met组大鼠p-AMPK水平显着降低（P<0.05）,p-mTOR、p70S6K、4EBP1蛋白水平显着升高（P<0.05）,AAA+Met组各蛋白表达升高或降低幅度小于AAA组,差异具统计学意义（P<0.05）。结论:二甲双胍可抑制弹力蛋白酶灌注模型大鼠腹主动脉增大及血管壁增厚现象,抑制腹主动脉瘤的发生,其机制可能为二甲双胍可提高AMPK通路活性、降低p-mTOR活性,抑制下游p70S6K、4EBP1等基因的表达,从而达到抑制血管壁炎性细胞浸润及增厚,降低腹主动脉的发生率。
王增亮,李绍山,赛力克·对山拜,汪永新,成晓江,周庆九,周凯,杜郭佳,王鑫,更·党木仁加甫[5]（2015）在《早期动脉瘤模型大鼠形成过程中血管壁基质结构蛋白的表达》文中认为背景:基质蛋白是构成血管壁的必不可少的重要成分,为血管壁的完整性和血管壁细胞发挥生理功能提供了必要的框架,并参与对细胞和平滑肌的调控。目的:构建早期动脉瘤模型大鼠评价基质结构蛋白在形成过程中的表达差异性。方法:将28只健康雄性SD大鼠随机分为2组:对照组（n=8）和模型组（n=20）。模型组大鼠以结扎左侧颈总动脉和右侧肾肾动脉致高血压方法建立脑动脉瘤模型;对照组大鼠仅暴露左侧颈动脉分叉和双侧颈动脉。模型组大鼠分别于造模后15,30 d处死,取大鼠右侧大脑前动脉和嗅动脉的分叉处部分组织进行免疫组化染色,分析纤维连接蛋白、α-平滑肌肌动蛋白和Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果与结论:与对照组相比,造模后30 d时模型组大鼠右侧大脑前动脉和嗅动脉的分叉处部分中纤维连接蛋白表达水平差异无显着性意义（P>0.05）,而Ⅲ型胶原和α-平滑肌肌动蛋白表达明显减少（P<0.05）。提示大鼠早期脑动脉瘤形成过程中的结构蛋白表达存在差异性并发生动态变化,血管壁基质结构蛋白降解是动脉瘤形成主要机制之一。
张贤华[6]（2013）在《Src激酶抑制剂PP2抑制颅内动脉瘤形成的初步研究》文中进行了进一步梳理目的：颅内动脉瘤的发病原因目前仍不十分清楚。我们的前期研究发现Src激酶可通过调控血管内皮钙粘蛋白（Vascular endothelial cadherin，VE-cadherin）的磷酸化及其相关信号通路可能在颅内动脉瘤的形成过程中发挥了一定的调节作用。本课题旨在研究颅内动脉瘤形成过程中通过应用Src激酶抑制剂PP2对颅内动脉瘤的形成是否具有抑制作用。方法：将160只雄性SD大鼠随机分为2组。手术组140只用于制作实验性SD大鼠颅内动脉瘤模型，另20只作为正常对照。手术组随机分为7组，即PP2早期处理40μg组和20μg组各20只；PP2后期处理40μg组和20μg组各20只；PP3早期处理组20只；PP3后期处理组20只和阳性对照组20只。全部大鼠均喂养90天后取右侧大脑前动脉-嗅动脉（ACA-OA）的分叉处血管，在光学显微镜下观察右侧大脑前动脉-嗅动脉（ACA-OA）分叉处动脉瘤的形成情况。结果：PP2早期处理40μg组和PP2早期处理20μg组动脉瘤形成率均为20%（4/20）；PP2后期处理40μg组和PP2后期处理20μg组动脉瘤形成率分别为40%（8/20）和45%（9/20）。PP3早期处理组和PP3后期处理组动脉瘤形成率分别为50%（10/20）和55%（11/20）。阳性对照组动脉瘤形成率为55%（11/20）。正常对照组未见动脉瘤形成。PP2早期处理40μg组和PP2早期处理20μg组动脉瘤形成率与阳性对照组相比动脉瘤形成率显着降低（p<0.05），PP2后期处理40μg组、PP2后期处理20μg组、PP3早期处理组和PP3后期处理组动脉瘤形成率与阳性对照组相比动脉瘤形成率无明显差异（p>0.05）。结论：早期应用src激酶抑制剂PP2可明显抑制实验性大鼠颅内动脉瘤形成；但后期（大鼠血压明显升高后）应用PP2处理对大鼠颅内动脉瘤的形成无显着影响。我们的实验结果初步证实了在颅内动脉瘤形成过程中通过早期应用Src激酶抑制剂PP2对颅内动脉瘤的形成可能具有抑制作用。
张海峰[7]（2013）在《线粒体途径介导的细胞凋亡在颅内动脉瘤生成中的作用机制研究》文中指出第一部分：单纯血流动力学诱导的兔基底动脉尖部动脉瘤生成模型建立目的：建立稳定的单纯血流动力学诱导的兔基底动脉尖部动脉瘤生成模型。方法：12只新西兰大白兔随机分为2组，假手术组（6只）仅暴露双侧颈动脉而未结扎，术后2天组（6只）则结扎双侧颈动脉。采用TCD、MRA血管重建及计算机流体动力学获得各组动物术前及术后2天的基底动脉平均血流速度、基底动脉直径及基底动脉分叉部各部分平均壁面切应力等数值。所有动物术后2天处死获取基底动脉分叉部组织，观察两组之间基底动脉尖部内弹力层损害、中层薄弱及血管腔外凸样改变等组织病理变化情况。结果：在术后2天组内动物在术后2天时基底动脉尖部平均壁面切应力明显高于术前（P=.000）；基底动脉直径术后2天时较术前增加，但无统计学差别（P=.311）；基底动脉平均血流速度术后2天时较术前明显提高（P=.003）。而在假手术组内术后2天时与术前的上述指标相比均无统计学差异（P＞.05）。在两组各自组内动物术前及术后2天时其各自的基底动脉尖部平均壁面切应力均明显高于基底动脉干及左侧、右侧大脑后动脉（P＜.01）。两组所有动物基底动脉尖部平均壁面切应力与其对应的基底动脉平均血流速度呈正相关（R2=0.70, P <0.0001）。假手术组动物未发现基底动脉尖部的内弹力层损害、中层薄弱及血管腔外凸样改变；术后2天组所有动物基底动脉尖部即壁面切应力（WSS）最高区域均出现内弹力层损害，而部分动物（2/6）出现中层薄弱及血管腔外凸样改变。结论：兔双侧颈总动脉结扎术后2天其最大壁面切应力位于基底动脉尖部，且基底动脉尖部平均壁面切应力较术前明显提高，与其对应的基底动脉平均血流速度呈正相关；所有动物结扎术后2天基底动脉尖部均有内弹力层损害，部分可见到中层薄弱和血管腔外凸等血管破坏性重塑形改变。稳定的单纯血流动力学诱导的兔基底动脉尖部动脉瘤生成模型成功建立。通过该模型，可以进一步研究单纯血流动力学诱导颅内动脉瘤生成的分子机制。第二部分：线粒体途径介导的细胞凋亡在单纯血流动力学诱导的兔基底动脉尖部动脉瘤生成过程中的作用机制研究目的：在采用双侧颈总动脉结扎的家兔基底动脉尖动脉瘤生成模型基础上，研究细胞凋亡参与颅内动脉瘤生成的分子机制。方法：新西兰大白兔15只，分为3组，假手术组6只（其中3只用于实时荧光定量PCR分析），双侧颈动脉结扎术后2天组3只，双侧颈动脉结扎术后7天组6只（其中3只用于实时荧光定量PCR分析），获取动物基底动脉分叉部组织，观察其内弹力层损害、中层薄弱及血管腔外凸样改变等组织病理变化情况，TUNEL法检测凋亡细胞，免疫组化染色及定量分析炎症细胞分布及凋亡相关蛋白表达情况，实时荧光定量PCR方法检测凋亡相关蛋白mRNA表达情况。结果：假手术组动物均未见内弹力层损害及凋亡细胞，而术后2天及7天组动物均发现凋亡细胞且主要位于基底动脉尖部即内弹力层损害部位，且该部位凋亡细胞数量均明显高于基底动脉干、左侧及右侧大脑后动脉部位，有统计学差异（p＜0.05）。所有动物血管壁内皮层基本保持完整，而炎症细胞在血管壁上分布少而散在，且位于外膜层，各组基底动脉尖部即内弹力层损害部位与其它部位相比，炎症细胞分布均无统计学差异（P＞0.05）。术后7天组动物基底动脉尖部caspase-9及caspase-3mRNA表达较假手术组均明显增高，有统计学差异（P＜0.01）；而假手术组与术后7天组动物基底动脉尖部caspase-8蛋白及mRNA表达比较均无统计学差异（P＞0.05）。在术后2天及7天组各种凋亡相关蛋白（caspase-3、caspase-9、Bcl-2、phospho-Bad、Bax、Bid）在基底动脉尖部表达均明显高于基底动脉干部、左侧及右侧大脑后动脉，有统计学差异（P＜0.05）。在基底动脉尖部的caspase-3、caspase-9、Bcl-2、Bax、Bid的表达均在术后7天组最高，术后2天组次之，假手术组最低，有统计学差异（P＜0.05）；而Phospho-Bad的表达在术后2天组最高，术后7天组次之，假手术组最低，有统计学差异（P＜0.05）。结论：单纯血流动力学诱导的基底动脉尖部动脉瘤早期生成过程中，血管壁的破坏性重塑形改变并不是由炎症细胞浸润导致，而是来源于管壁本身固有细胞的作用。细胞凋亡参与了单纯血流动力学诱导的基底动脉尖部动脉瘤的早期生成，其分子发生机制是通过caspase-9激活的由Bcl-2介导的线粒体途径。第三部分：Ac-DEVD-CHO对兔基底动脉尖部动脉瘤生成的影响目的：选择caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO作用于单纯血流动力学诱导的基底动脉尖部动脉瘤生成模型，验证细胞凋亡在动脉瘤发生中的作用，确认细胞凋亡是否是颅内动脉瘤发生主要机制。方法：新西兰大白兔30只，随机分为假手术组、术后2天组、术后DMSO2天组、术后抑制剂2天组、术后7天组、术后DMSO7天组、术后抑制剂7天组、术后1月组、术后DMSO1月组、术后抑制剂1月组，每组3只。观察双侧颈动脉结扎术后半小时应用caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO能否抑制兔基底动脉尖部caspase-3蛋白表达及细胞凋亡，能否阻断或延缓术后动物基底动脉尖部的组织病理变化进程（采用内弹力层损害长度、中层薄弱长度及程度、血管腔外凸改变长度及动脉瘤发展评分进行评估）。结果：术后2天组及术后DMSO2天组均发现凋亡细胞主要位于基底动脉尖部，而术后抑制2天组基底动脉尖部均未见凋亡细胞，且术后抑制2天组基底动脉尖部caspase-3蛋白表达较术后2天组及术后DMSO2天组明显降低（P＜0.05）。应用caspase-3抑制剂、DMSO与未应用caspase-3抑制剂时，双侧颈动脉结扎术后动物基底动脉尖部组织病理变化有同样的随时间变化趋势；且在相同时间点应用caspase-3抑制剂、DMSO与未应用caspase-3抑制剂三种情况相比基底动脉尖部组织病理变化均无统计学差异（P＞0.05）。双侧颈动脉结扎术后1月内随着时间延长动脉瘤发展评分（ADS）逐步升高，有统计学差异（P＜0.05）。结论：Caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO后虽然能抑制双侧颈动脉结扎术后基底动脉尖部的细胞凋亡，但其破坏性重塑形改变进程及动脉瘤生成并未被抑制。在颅内动脉瘤生成早期细胞凋亡可能仅仅是对血流动力学改变的一个反应结果，它不是引起基底动脉尖部血管壁的早期破坏性重塑形进程的主要因素，因此细胞凋亡可能并不是单纯血流动力学诱导的颅内动脉瘤生成的主要机制。动脉瘤发展评分（ADS）是实验性颅内动脉瘤发展程度评估的有效方法。
赖小彪[8]（2013）在《前交通动脉瘤形成、破裂和复发的危险因素及破裂的血流动力学机制研究》文中提出第一部分前交通动脉瘤生成的危险因素研究背景与目的：颅内动脉瘤一旦破裂,就会引起蛛网膜下腔出血,其病死率和病残率都非常高。因此对动脉瘤的病因学研究意义重大。虽然对颅内动脉瘤形成的危险因素研究较多,但是对前交通动脉瘤目前还缺乏亚组分析。前交通动脉瘤是前循环中最为复杂的一个动脉瘤亚组,前交通动脉血管解剖生理非常特殊。本研究的目的是探讨前交通动脉瘤形成的独特的危险因素,从而为临床预防提供理论基础。资料与方法：本研究是一项回顾性病例对照研究。病例组收集自2006年1月至2012年10月间收治的256例前交通动脉瘤病例,均经由磁共振血管造影或数字减影血管造影证实。对照组为512例没有颅内动脉瘤的患者。我们对各种可能的危险因素都进行了数据收集,分析各临床和解剖生理因素在前交通动脉瘤形成中所起的作用。为了找出前交通动脉瘤形成的危险因素,我们对各种危险因素运用了单因素分析和多因素逻辑回归分析。结果：病例组的平均年龄大于对照组（P值=0.016）。单因素分析揭示：高血压、前交通动脉单侧优势A1段或一侧缺如A1段,与前交通动脉瘤的发生明显相关。多因素逻辑回归分析表明：年龄（比值比1.014,95%可信区间1.001到1.027）、高血压病史（比值比1.627,95%可信区间1.090到2.135）、单侧优势A1段（比值比2.845,95%可信区间2.019-04.009）或一侧缺如A1段（比值比4.301,95%可信区间2.174到8.507）都是前交通动脉瘤形成的独立危险因素。结论：年龄、高血压、单侧优势A1段或一侧缺如A1段,这些都是形成前交通动脉瘤的独立危险因素。对于具有这些危险因素的人群,应该运用磁共振血管造影定期筛查,早期发现前交通动脉瘤。当然,这种筛查需要卫生经济学上的进一步评估。第二部分年龄、瘤体大小和A1段血管构象预测前交通动脉瘤的破裂风险背景与目的：随着神经影像学的进步,颅内动脉瘤的发现率相应提高。预防动脉瘤破裂出血是降低病死率和病残率最有效的方式。因此,对动脉瘤破裂风险因素进行研究很有价值,有益于预测动脉瘤将来破裂风险。尽管笼统的颅内动脉瘤破裂的危险因素已有所研究,但是前交通动脉瘤这一亚组的破裂风险却鲜有研究。基于前交通动脉解剖生理的特殊性,前交通动脉瘤被认为是前循环中最为复杂的一个动脉瘤亚组。本研究旨在分析前交通动脉瘤破裂的危险因素,为临床决策提供理论依据。资料与方法：本研究收集了自2006年6月至2012年10月间在我院收治的前交通动脉瘤病例。全部病例经由磁共振血管造影（MRA）或数字减影血管造影（DSA）检查证实。前交通动脉瘤破裂的危险因素有可能为：患者临床特征、前交通动脉A1段解剖构象和动脉瘤瘤体相关特征。比较分析前交通破裂动脉瘤和前交通未破裂动脉瘤病例之间,这些危险因素方面存在哪些差异。运用单因素和多因素逻辑回归分析方法,找出能预测前交通动脉瘤破裂的独立危险因素。结果：本研究总共收集了256例前交通动脉瘤病例,其中104例患者表现为前交通破裂动脉瘤。通过单因素分析,我们发现前交通动脉瘤破裂风险与以下因素明显相关：年龄55岁以下、有吸烟史、有饮酒史、前交通动脉A1段不对称时呈现单侧优势型A1段,或者前交通动脉一侧缺如A1段、以及动脉瘤瘤径3毫米以上。通过多因素逻辑回归分析,我们发现前交通动脉瘤破裂的独立预测因素为：年龄在55岁以下（比值比5.975,95%可信区间2.739到13.032）、前交通动脉单侧优势A1段（比值比2.463,95%可信区间1.83到5.13）或前交通动脉一侧缺如A1段（比值比6.268,95%可信区间1.819到21.601）、动脉瘤瘤径在3毫米以上（比值比23.429,95%可信区间10.998到49.908）。结论：年龄在55岁以下、有吸烟史、有饮酒史、前交通动脉单侧优势A1段或前交通动脉一侧缺如A1段、以及动脉瘤瘤径在3毫米以上,以上这些因素是前交通动脉瘤破裂的独立预测因素。对于具备这些危险因素的患者,建议给予预防性治疗。第三部分破裂与未破裂前交通动脉瘤血流动力学数值模拟研究背景与目的：由于不同部位动脉瘤以及毗邻载瘤动脉几何学结构各不相同,别处的动脉瘤血流动力学结论不能推广到前交通动脉瘤亚组。以往,运用3D-DRA技术研究前交通动脉瘤血流动力学特点以及动脉瘤破裂的血流动力学机制,仅仅以一侧大脑前动脉A1段为流入血管,不足阐明前交通动脉瘤破裂的血流动力学特点和真正机制。本研究的目的是通过利用3D-TOF-MRA新技术,在接近真实解剖生理状态下,来探讨前交通动脉瘤独特的血流特征,找出血流动力学特征与动脉瘤破裂之间可能存在的关系。资料与方法：从同期我院诊治的前交通动脉瘤破裂病例中选取18例患者,以性别和年龄（±2岁）匹配,与未破裂前交通动脉配对。所有入选患者均行头颅3D-TOF MRA检查。将所获得的3D-TOF MRA原始DICOM数据输入计算机,采用专用的计算机辅助设计软件（MIMICS12.0）建立动脉瘤3D模型,应用ANSYS CFX12.0软件进行计算。获取血流动力学相关参数,包括壁面切应力分布、流线及流场基本特征、速度场、动脉瘤内血流方式、射入流速度及宽度、冲击域大小,并对动脉瘤的血液动力学特征进行分析。结果：在本研究中,4种血流模式类型均被发现。在未破裂的动脉瘤中,以Ⅰ型（25%）和Ⅱ型（45%）血流模式多见；但在破裂和未破裂前交通动脉瘤中,血流模式类型分布没有明显的统计学差异（P=0.175）。以Ⅰ型血流模式为参照,Ⅱ型、Ⅰ型和Ⅳ型血流模式,动脉瘤破裂的发生率虽然有增高的趋势,但这种趋势并未达到统计学意义；以II型血流模式为参照,Ⅲ型、Ⅳ型血流模式动脉瘤破裂的发生率同样有增高的趋势,但这种趋势仍未达到统计学意义。18个动脉瘤双侧A1段解剖结构上对称,流线分析表现为A型瞬时流线9个（50%）,另外9个动脉瘤仅接受单侧大脑前动脉A1段血流。17个一侧A1段解剖结构上优势的动脉瘤,仅接受单侧大脑前动脉A1段血流。在A型瞬时流线中,66.7%为未破裂动脉瘤,在B、C、D型瞬时流线中,破裂动脉瘤比例似乎呈上升趋势,分别占44.4%、53.8%、66.7%。但这种趋势并未达到统计学意义（P=0.5343）。在本研究中,我们在切应力轮廓图上测得最大壁切应力范围10-1500dyne/cm2,平均196dyne/cm2.未破裂动脉瘤,最大壁切应力值范围10-230dyne/cm2（平均,124dyne/cm2）,破裂动脉瘤最大壁切应力范围35-1500dyne/cm2（平均,269dyne/cm2）,以P值<0.1有统计学意义,破裂和未破裂动脉瘤最大壁切应力差异有统计学意义。未破裂的、A型流线的动脉瘤壁切应力较低,平均63dyne/cm2,A型流线中破裂的动脉瘤壁平均切应力为690dyne/cm2;B型流线的动脉瘤,最大壁切应力相对较小,破裂的动脉瘤最大壁切应力80dyne/cm2,未破裂动脉瘤最大壁切应力60dyne/cm2.C型流线的动脉瘤壁切应力大,破裂和未破裂动脉瘤平均最大壁切应力分别为285和225dyne/cm2,而在D型,破裂和未破裂动脉瘤平均最大壁切应力分别为165和150dyne/cm2。结论：本研究中,我们发现动脉瘤破裂与A1段发育不良、缺如所造成的不对称血流相关,破裂动脉瘤通常伴随射入流方向改变（Ⅲ、Ⅳ型血流模式）或多个涡流（Ⅱ、Ⅳ型血流模式）,冲击域的大小的与动脉瘤之前破裂相关。高的壁面切应力与动脉瘤之前的破裂相关。第四部分前交通动脉瘤的血管内栓塞复发的危险因素分析背景和目的：可能影响到动脉瘤弹簧圈治疗后复发的危险因素较多。其中风险较高的因素有：瘤径大、瘤颈宽、瘤腔内存在血栓、弹簧圈盘曲不致密、瘤颈残留、填塞不完全、随访周期过长、动脉瘤位于后循坏、高颈-顶比等。这些结果能否推及前交通动脉瘤的这一特别亚组中,目前不得而知。本研究旨在弄清楚接受过弹簧圈栓塞治疗的前交通动脉瘤复发的危险因素,对减少内管内治疗后复发有临床价值。方法：在本研究中,我们回顾性地分析了59例2006年1月至2012年10月间接受过弹簧圈栓塞治疗的前交通动脉瘤患者。研究其临床特点、形态学特征、原始血管造影以及3个月以上随访血管造影结果。分析患者各种临床特点、动脉瘤的形态特征、血管造影结果,通过逻辑回归模型找出能够预测动脉瘤栓塞治疗后复发的危险因素。结果：年龄、性别、吸烟史、饮酒史、糖尿病史及高血压史等临床特点在病例组和对照组间没有明显差异。]Hunter-Hess分级和血管内治疗时机在病例组和对照组间没有明显差异。瘤颈宽度在4mm以上（OR=5.570,95%CI,1.377-22.535；P=0.016）、瘤颈残留（OR=4.809,95%CI,1.015-22.792;P=0.048）以及动脉瘤腔的不完全填塞（OR=14.037,95%CI,2.683-73.447;P=0.002）是预测前交通动脉瘤血管内治疗后复发的独立危险因素。结论：瘤颈宽度在4mm以上、瘤颈残留、以及动脉瘤腔的不完全填塞是前交通动脉瘤血管内治疗后复发的独立危险因素。结果提示：1、在开发和评估宽颈动脉瘤新疗法时,要注重瘤颈的新内皮化问题。2、对前交通动脉瘤而言,血管内治疗要尽可能地做到致密填塞。3、对于瘤颈宽度在4mm以上、瘤颈残留、以及动脉瘤腔的不完全填塞的病例,必须进行严格的血管造影随访,以便早期发现早期治疗动脉瘤复发。
朱文焕[9]（2012）在《颅内动脉瘤动物模型的建立及发病机制的研究》文中研究指明第一部分颅内动脉瘤模型制作的研究目的：探寻建立稳定、快捷、理想的颅内动脉瘤动物模型的方法，同时进一步证明颅内动脉瘤的发生、生长、塑形机制。方法：选取48只新西兰大白兔，随机分为A、B、C、D、E五组，A组:新西兰大白兔8只，结扎对侧颈总动脉+2%盐水喂养；B组:兔8只，分叉内膜损伤法+A组法；C组:兔10只，胰弹力蛋白酶浸泡法+A组法；D组:兔12只，分叉内膜损伤法+胰弹力蛋白酶浸泡法+A组法；E组:兔10只，分叉内膜损伤法+胰弹力蛋白酶浸泡法。检测A、D、E三组术前、术后、术后4周的血压；各组于术后4周行CTA颈部血管造影，然后活体解剖左颈总动脉分叉造瘤部位，记录有无成瘤情况，并测量瘤体大小；处死动物，切取瘤体标本，行病理学HE染色，光镜下观察病理组织学变化。结果：A、D、E三组血压变化情况：A、D组术后和术后4周与术前相比P<0.0l，有显着性差异；E组术后和术后4周与术前相比P>0.0l，无显着性差异；A、D组术后和术后4周与E组术后和术后4周相比P<0.0l，有显着性差异。各组成瘤率比较：C、D、E组间p>0.05无显着性差异;C、D、E组与A、B组均p<0.05有显着性差异。形成动脉瘤体积的比较：D组与E组高度、宽度相比P<0.05有显着性差异,长度相比P>0.05无显着性差异;C组与D组长度、高度、宽度相比均P<0.05有显着性差异。病理组织学变化:正常动脉壁由内膜、中膜和外膜构成，各层结构保持完整。动脉瘤壁上没有内膜，结构排列紊乱，瘤壁变薄或厚薄不一，有炎性细胞浸润。结论:颈总动脉分叉内膜损伤法+胰弹力蛋白酶浸泡+血流动力因素诱导法成瘤率相对偏高，死亡率低，并可获得体积、病理形态学与人类颅内动脉瘤极为相似的动脉瘤模型，操作简单，损伤小，成瘤周期短，性能稳定可靠，通畅率好，制作费用低，可作为临床前期实验治疗脑动脉瘤和栓塞材料研究的良好模具。同时也证实了颅内动脉瘤的发生、生长塑形及破裂是多种因素综合作用的结果。第二部分PDGF-b、c-Jun、Caspase-3在人脑动脉瘤，兔动脉瘤模型中的表达及意义目的：探讨PDGF-b、c-Jun、Caspase-3在人脑动脉瘤、兔动脉瘤模型中的表达情况，揭示其在脑动脉瘤形成中的潜在作用机制。方法：采用免疫组织化学方法中的Envision法对22例人颅内动脉瘤、8例新西兰大白兔动脉瘤模型、6例正常脑动脉和6例正常兔颈总动脉的石蜡切片标本进行检测PDGF-b、c-Jun、Caspase-3的表达。用免疫组化laserpix图像分析系统进行图像分析，获取PDGF-b、c-Jun、Caspase-3表达的平均光密度值（mean density）进行统计学分析。结果：在22例人颅内囊状动脉瘤中，PDGF-b的表达：强染色6例，明显染色10例，轻度染色4例，无染色2例。正常脑动脉无染色。平均光密度值0.272。c-Jun的表达：强染色12例，明显染色7例，轻度染色2例，无染色1例。正常脑动脉2例轻度染色。平均光密度值0.437。Caspase-3的表达：强染色7例，明显染色9例，轻度染色4例，无染色2例。正常脑动脉无染色。平均光密度值0.284。统计学分析显示：PDGF-b、c-Jun、Caspase-3与对照组比较P<0.01；PDGF-b与c-Jun的相关分析:r=0.751，两者表达呈正相关；c-Jun与Caspase-3的相关分析:r=0.812，两者表达呈正相关。此类兔动脉瘤模型标本PDGF-b、c-Jun、Caspase-3较对照组均显示较强表达，对照组均阴性表达。结论：PDGF-b、c-Jun、Caspase-3参与脑动脉瘤的发生、生长、破裂演变过程，脑动脉瘤的形成是多因素综合作用的结果，各因素间存在相互影响、相互关联、相互作用。核转录因子c-Jun可能是颅内动脉瘤发生的病理学因素中血管活性生长因子、凋亡、酶学系列变化、炎性反因等损伤机制中的共同中间环节。为临床开发阻断颅内动脉瘤发生、破裂的新靶点抑制剂提供理论依据。第三部分流体切应力对动脉内皮细胞PDGF-b、c-Jun、Caspase-3mRNA表达的影响和意义目的:探讨高流体切应力作用下动脉内皮细胞PDGF-b、c-Jun、Caspase-3mRNA的表达水平和规律,揭示血流动力学因素在颅内动脉瘤形成演变过程中的具体分子病理学机制.方法:选择人胸主动脉血管内皮细胞培养、传代作为内皮细胞功能研究的细胞源，应用体外高切应力流场加载机,分别将各组内皮细胞置于切应力加载机的流室腔槽内。a.施加高强度流体切应力（40dyne/cm2）分别作用0h、1h、4h、6h,然后应用RT-PCR技术检测不同作用时间点内皮细胞PDGF-b、c-Jun、Caspase-3的转录水平和规律；b.施加正常强度流体切应力（20dyne/cm2）4h仍应用RT-PCR技术检测内皮细胞PDGF-b、c-Jun、Caspase-3的转录水平；c.比较同时间点（4h）高强度流体切应力与正常强度流体切应力PDGF-b、c-Jun、Caspase-3的转录水平的差异性。结果：高切应力作用下，PDGF-b组：1小时组内皮细胞PDGF-b转录水平就显着升高，4小时、6小时较1小时组有回落，且存在统计学差异，但仍较未加载切应力（0h）有显着差异，而6小时后又有回升趋势;c-Jun组：未加载切应力的内皮细胞组c-Jun mRNA表达几乎为零，而在1h、4h、6h时间点的高切应力加载组渐进性、与时间呈正相关性升高，与未加载切应力组比较有显着差异；随着切应力作用时间的延长，6h、4h、1h各组比较均有显着性差异;Caspase-3组：未加载流场的对照组（0h组）内皮细胞也检测到相对中等量的Caspase-3mRNA表达，而在40dyne/cm2的高切应力作用下，1h组表达量明显升高，较对照组（0h组）有显着性差异；但在4h组下降到对照组水平以下，较对照组（0h组）亦有显着性差异；6h组有回升趋势，升高到对照组（0h组）水平以上，仍接近对照组水平，比较无统计学差异。1h组较4h组、6h组有显着性差异。同时间点（4h）不同强度切应力比较：无流体切应力、正常强度流体切应力、高强度流体切应力PDGF-b、c-Jun的转录水平的差异有显着性p<0.05;4h时点Caspase-3组随着切应力增强渐下降且p<0.05有显着性差异。结论：高强度的流体切应力可诱导人胸主动脉内皮细胞内PDGF-b mRNA、c-JunmRNA、Caspase-3mRNA的转录表达。而且随着作用时间延长1h、4h、6h时间点各有其特征性表达规律。结合本文第二部分结果可推测出高流体切应力可能通过调节PDGF-b、c-Jun、Caspase-3的表达水平，进而诱导颅内动脉瘤的发生、形成塑形和破裂。在我们的实验研究中Caspase-3的表达水平在无流体切应力、正常强度流体切应力、高强度流体切应力4h时点随着切应力增强渐下降且有显着性差异，提示我们需进行更多更长时点进一步深入的研究，来揭示其作用表达规律。
姬斌[10]（2010）在《高血压对大鼠动脉瘤模型影响及新型弹簧圈栓塞治疗研究》文中进行了进一步梳理颅内动脉瘤（Intracranial aneurysm, ICA）是神经外科常见疾病,也是引起蛛网膜下腔出血的主要原因之一,致残率和致死率都很高,给社会和家庭带来极大负担,但其发病机制尚未明了。因此,探讨颅内动脉瘤的组织病理学与病理生理学改变、动脉瘤的演变过程和破裂机制,对预防颅内动脉瘤破裂和临床治疗具有极其重要的意义,而这些研究在一定程度上均依赖于建立稳定可靠的颅内动脉瘤模型。近年来,依托所建立的动物颅内动脉瘤模型进行基础与临床研究的报道逐渐增多,目前动脉瘤模型制作主要有以下几种方法：外科手术移植法、动脉局部结构破坏法、酶破坏血管壁法、病因诱导法、血管内介入法等。良好的动脉瘤模型的建立对研究其形成、发展、预防及治疗具有极其重大的作用。动脉瘤的发生和破裂与动脉瘤大小,动脉瘤部位,动脉瘤形态,高血压,性别及年龄等因素有关。有学者推测高血压是影响颅内动脉瘤的重要因素,但目前还缺乏确切的证据。因此,本课题拟探讨高血压与脑动脉瘤的组织病理学及病理生理学改变、动脉瘤的演变过程和破裂机制之间的关系。在治疗实验方面,近年来采用微弹簧圈经血管内途径栓塞颅内动脉瘤成为治疗颅内动脉瘤的首选。虽然应用电解可脱性微弹簧圈（Guglielmi detachablecoils, GDC）栓塞颅内动脉瘤已成为治疗的首选,但由于栓塞材料本身缺乏生物活性作用,造成铂金弹簧圈填塞于动脉瘤内不易形成血栓、瘢痕或内皮增生,导致栓塞后瘤颈部内皮覆盖不完全,动脉瘤难以真正达到解剖学治愈的目的；另也存在相对较高的复发率和再破裂出血风险,尤其是对于宽颈、大或巨大动脉瘤,这种风险就更大。为弥补现有GDC的不足、加速动脉瘤内的纤维化和内皮形成,以减少动脉瘤栓塞术后复发,人们试图采用细胞粘附、细胞外基质蛋白涂层、生物可吸收聚合物涂层等技术方法,对铂金微弹簧圈表面进行修饰,通过修饰材料的生物活性作用促进动脉瘤达到解剖学治愈。本研究在大鼠动脉瘤模型建立并改进的基础上,探讨了经血管内皮细胞生长因子（Vascular endothelial cell growth factor, VEGF）修饰的新型铂金微弹簧圈栓塞动脉瘤模型的治疗效果。第一部分大鼠颅内动脉瘤模型制作及高血压对其影响的实验研究目的建立大鼠颅内动脉瘤动物模型并初步探讨高血压对动脉瘤发生发展及相关生物因子的影响,为临床预防动脉瘤破裂提供参考。材料和方法45只雄性SD大鼠随机分为高血压组、正常血压组和正常对照组。对高血压组大鼠行“脑动脉瘤模型制作+双侧肾动脉狭窄术”；正常血压组只建立脑动脉瘤模型；正常对照组不予任何处理。各组在术前,术后6周、12周三个时间点分别测量各组大鼠动脉收缩压。术后12周测量动脉瘤大小,并灌注固定,取动脉瘤部位血管组织,应用HE染色、Van Geson染色和Verhoeff染色对动脉瘤血管组织进行病理检查。并且同时分别以免疫组织化学染色、Western Blot和RT-PCR比较分析相关蛋白[基质金属蛋白酶-9（Matrix metalloproteinases 9, MMP-9）,III型胶原蛋白（TypeⅢcollagen alphal, Col3a1）]和相关基因（MMP-9基因、Col31基因）的表达有无差别,以此推测高血压对动脉瘤增大和破裂的影响。结果高血压组动物在取材前血压明显升高（197.48±15.44mmHg）,与术前血压（104.40±14.70 mmHg）相比有显着性差异（P<0.01）；动脉瘤的长度（2.38±0.31mm）和宽度（1.89±0.35mm）与动脉瘤制作完成时的长度（1.62±0.18mm）和宽度（1.34±0.08 mm）相比,有显着性差异（P<0.01）。而正常血压组和正常对照组无明显变化。病理检查显示高血压组血管内膜消失,弹力层完全断裂；正常血压组尚存部分弹性纤维；正常对照组血管组织无改变。免疫组织化学染色、实时定量PCR及Western Blot检查结果均表明高血压组动脉瘤局部组织中两种蛋白（MMP-9蛋白,Col3a1蛋白）及基因（MMP-9基因、Col31基因）的表达明显比正常血压组和正常对照组高,提示在高血压直接影响动脉结构的同时还通过一些蛋白或基因的过度表达对血管壁的结构组成产生影响。结论本实验采用的大鼠颅内动脉瘤模型稳定性好,制作方便,具有与人类动脉瘤相似的形态和病理结构；高血压对动脉瘤的弹力蛋白和胶原蛋白有明显影响,并且通过影响一些蛋白如MMP-9蛋白和Col3a1蛋白或影响一些基因如MMP-9基因和Col3a1基因而影响动脉壁结构,导致动脉瘤形成,因此推测高血压是影响动脉瘤增大的重要因素之一。第二部分经VEGF修饰铂金微弹簧圈栓塞大鼠动脉瘤模型的实验研究目的探讨负载血管内皮生长因子（VEGF）的生物可降解聚合物修饰铂金微弹簧圈对实验性大鼠动脉瘤模型的栓塞效果。方法54只雌性SD大鼠随机分为普通铂金微弹簧圈组、聚合物涂层修饰铂金微弹簧圈组和负载VEGF修饰铂金微弹簧圈组,每组各18只。分离并暴露实验动物右侧颈总动脉,分别将各组弹簧圈片断（8mm）植入血管腔后,在微弹簧圈远端将颈总动脉结扎,恢复颈总动脉血流,则颈总动脉形成一囊状动脉瘤,弹簧圈片断位于动脉瘤囊内。每组实验动物分别在术后第15天、30天和90天各取6只,经过量麻醉将动物处死后把包含有弹簧圈的一段动脉切下,同时切取普通铂金微弹簧圈组的大鼠左侧一段颈总动脉作为空白对照。应用HE染色和VanWillebrand Factor （Vwf）免疫组织化学染色评估动脉瘤内皮细胞的增殖情况和纤维化程度,通过Western Blot技术检测经修饰的铂金微弹簧圈在体内释放VEGF的情况。结果负载VEGF修饰铂金微弹簧圈组的大鼠,在术后各时间点动脉瘤腔内细胞增殖和纤维化等级与普通铂金微弹簧圈组、聚合物涂层修饰铂金微弹簧圈组相比明显增高,具有统计学意义（P<0.01）。病理学观察显示,负载VEGF修饰铂金微弹簧圈组大鼠在术后动脉瘤腔（除栓塞部位外的其余腔隙）完全闭塞,并出现致密的纤维化细胞。普通铂金微弹簧圈组和聚合物涂层铂金微弹簧圈组则可观察到部分血栓未完全机化,增生的组织结构较疏松,且未完全覆盖动脉瘤腔,导致动脉瘤腔仍有部分残留。Western Blot检测结果表明,负载VEGF修饰铂金微弹簧圈组在术后15天及30天,组织中VEGF因子水平明显高于其它组；而90天时,由于负载VEGF修饰铂金微弹簧圈组血管腔的完全纤维化和4C00H-P（DLLA-co-TMC）的降解,组织中VEGF水平明显降低。结论通过含VEGF的可降解多聚物修饰铂金微弹簧圈表面,并在动脉瘤腔内缓慢释放VEGF,可以刺激动脉瘤内细胞增生、血栓形成,最终形成致密的纤维化组织,完全闭塞动脉瘤腔。与普通的铂金微弹簧圈相比,可达到更快、更完全地栓塞动脉瘤的目的。
二、大鼠实验性囊状动脉瘤生长塑形模型的建立（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、大鼠实验性囊状动脉瘤生长塑形模型的建立（论文提纲范文）
（1）基质金属蛋白酶对脑动脉瘤的影响及其相互关系研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 基质金属蛋白酶在脑动脉瘤形成和发展中的作用 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 血管内介入栓塞术和开颅夹闭术对MMPS、炎症因子、氧化应激因子和CASPASE3的影响 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 基质金属蛋白酶在脑动脉瘤形成发展中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 中英文缩略词表 |
| 攻读学位期间以第一作者公开发表的论文 |
| 致谢 |
（2）促红细胞生成素导致腹主动脉瘤形成的作用及分子机制研究（论文提纲范文）
| 论文Ⅰ 促红细胞生成素诱导小鼠发生腹主动脉瘤的作用及分子机制研究 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 缩略语说明 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附表 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 论文Ⅱ 促红细胞生成素在血管紧张素II诱导腹主动脉瘤小鼠模型中的作用和机制研究 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 缩略语说明 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 附表 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| 外文论文1 |
| 外文论文2 |
| 外文论文3 |
（3）植入镁对大鼠牙周炎作用的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 第1章 引言 |
| 1.1 牙周炎概述 |
| 1.1.1 牙周炎的表现及影响 |
| 1.1.2 牙周炎和相关骨缺损的治疗方法及缺陷 |
| 1.1.3 牙周组织炎症与骨代谢失调 |
| 1.2 镁对骨形成的作用 |
| 1.3 镁对炎症的调节作用 |
| 第2章 镁植入物对大鼠实验性牙周炎的作用 |
| 2.1 背景 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 材料与试剂 |
| 2.2.2 仪器设备 |
| 2.2.3 植入物的制备 |
| 2.2.4 大鼠植入手术与实验性牙周炎模型的建立 |
| 2.2.5 血清镁离子浓度检测 |
| 2.2.6 大鼠颌骨扫描电镜能谱分析 |
| 2.2.7 大鼠颌骨micro CT扫描及牙周骨组织参数测量 |
| 2.2.8 牙周组织及肝肾组织学检测 |
| 2.2.9 统计分析 |
| 2.4 结果 |
| 2.4.1 镁植入物的生物安全性 |
| 2.4.2 镁离子向周围组织的扩散 |
| 2.4.3 镁植入物对牙周骨组织的影响 |
| 2.4.4 镁植入物对牙周组织炎症的影响 |
| 2.5 讨论 |
| 2.5.1 植入材料的制备 |
| 2.5.2 动物模型的建立方法 |
| 2.5.3 镁的生物安全性 |
| 2.5.4 镁离子向周围组织的扩散 |
| 2.5.5 镁植入物对牙周骨组织的影响 |
| 2.5.6 镁植入物对牙周组织炎症的影响 |
| 2.6 结论 |
| 第3章 镁植入物对大鼠牙槽骨的成骨作用及机制研究 |
| 3.1 背景 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 材料与试剂 |
| 3.2.2 仪器设备 |
| 3.2.3 主要溶液的配制 |
| 3.2.4 镁植入物对牙槽骨的成骨作用的影像学和组织学分析 |
| 3.2.5 CGRP在镁植入物诱导的牙槽骨骨膜成骨中的作用 |
| 3.2.6 大鼠牙槽骨骨膜干细胞的培养和鉴定 |
| 3.2.7 细胞增殖实验 |
| 3.2.8 细胞成骨分化实验 |
| 3.2.9 统计分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 镁离子促进牙槽骨骨膜成骨和骨松质成骨 |
| 3.3.2 镁离子促进三叉神经节中CGRP的表达 |
| 3.3.3 CGRP拮抗剂对牙槽骨骨膜成骨无显着抑制作用 |
| 3.3.4 大鼠牙槽骨骨膜干细胞的培养和鉴定 |
| 3.3.5 CGRP对牙槽骨骨膜干细胞增殖和成骨分化无显着促进作用 |
| 3.3.6 镁离子直接促进骨膜干细胞增殖和成骨分化 |
| 3.4 讨论 |
| 3.4.1 镁植入物来源的镁离子促进牙槽骨骨膜成骨 |
| 3.4.2 CGRP对镁引发的牙槽骨骨膜成骨无显着促进作用 |
| 3.4.3 镁离子直接刺激成骨细胞/间充质干细胞成骨 |
| 3.4.4 镁植入物促进骨膜成骨的其他可能机制 |
| 3.5 结论 |
| 第4章 镁离子对牙周炎环境中骨膜干细胞的作用 |
| 4.1 背景 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 材料与试剂 |
| 4.2.2 仪器设备 |
| 4.2.3 主要溶液的配制 |
| 4.2.4 免疫组化染色及分析 |
| 4.2.5 ELISA检测 |
| 4.2.6 巨噬细胞系的培养和牙周炎症模型的建立 |
| 4.2.7 牙槽骨骨膜干细胞增殖实验 |
| 4.2.8 牙槽骨骨膜干细胞成骨分化实验 |
| 4.2.9 统计分析 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 镁离子抑制牙周炎环境中TNF-α的表达 |
| 4.3.2 镁离子在TNF-α模拟的牙周炎环境中对骨膜干细胞增殖的影响 |
| 4.3.3 镁离子在TNF-α模拟的牙周炎环境中对骨膜干细胞成骨基因表达的影响 |
| 4.4 讨论 |
| 4.4.1 植入物来源的镁离子抑制实验性牙周炎中TNF-α的表达 |
| 4.4.2 镁离子和TNF-α对骨膜干细胞增殖的作用 |
| 4.4.3 镁离子和TNF-α对骨膜干细胞成骨分化的作用 |
| 4.5 结论 |
| 第5章 结论与展望 |
| 5.1 结论 |
| 5.2 进一步工作的方向 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（4）二甲双胍对腹主动脉瘤发病的影响及分子机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 1 前言 |
| 2 资料和方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 各组大鼠AAA发生率 |
| 3.2 各组大鼠HE染色结果 |
| 3.3 免疫组化染色结果 |
| 3.4 动物实验组织中Western blot检测结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（5）早期动脉瘤模型大鼠形成过程中血管壁基质结构蛋白的表达（论文提纲范文）
| 文章亮点: |
| 0 引言 Introduction |
| 1 材料和方法 Materials and methods |
| 2 结果 Results |
| 3 讨论 Discussion |
（6）Src激酶抑制剂PP2抑制颅内动脉瘤形成的初步研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词表 |
| 第1章 前言 |
| 第2章 材料与方法 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 主要实验试剂 |
| 2.1.3 主要实验仪器 |
| 2.1.4 HE 染色所需自配试剂 |
| 2.1.5 弹性纤维 EVG 染色所需自配试剂 |
| 2.1.6 PBS（磷酸盐缓冲液）的配置 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 实验动物分组及术后腹腔用药 |
| 2.2.2 实验性 SD 大鼠颅内动脉瘤模型的建立 |
| 2.2.3 HE 染色的检测过程 |
| 2.2.4 弹性纤维 EVG 染色的检测过程 |
| 2.2.5 实验性 SD 大鼠脑动脉瘤有无形成的判定标准 |
| 2.2.6 统计学方法 |
| 第3章 结果 |
| 3.1 实验性 SD 大鼠各阶段血压变化情况 |
| 3.2 SD 大鼠颅内动脉瘤的形成率 |
| 3.2.1 实验性大鼠颅内动脉瘤形成情况 |
| 3.2.2 数据分析 |
| 3.3 各小组 SD 大鼠出现不同时期动脉瘤变化的情况 |
| 3.4 光学显微镜下观察大鼠右侧大脑 ACA-OA 分叉处血管壁的情况 |
| 3.4.1 SD 大鼠右侧大脑 ACA-OA 分叉处及相关血管显微镜下观察 |
| 3.4.2 正常的 SD 大鼠右侧大脑 ACA-OA 分叉处血管 |
| 3.4.3 SD 大鼠右侧大脑 ACA-OA 分叉处出现前期动脉瘤变化 |
| 3.4.4 SD 大鼠右侧大脑 ACA-OA 分叉处出现早期动脉瘤变化 |
| 3.4.5 SD 大鼠右侧大脑 ACA-OA 分叉处出现进展期动脉瘤变化 |
| 第4章 讨论 |
| 第5章 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 |
| 参考文献 |
（7）线粒体途径介导的细胞凋亡在颅内动脉瘤生成中的作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 单纯血流动力学诱导的兔基底动脉尖部动脉瘤生成模型的建立 |
| 一、 实验对象与方法 |
| 二、 结果 |
| 三、 讨论 |
| 四、 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 线粒体途径介导的细胞凋亡在单纯血流动力学诱导的兔基底动脉尖部动脉瘤生成过程中的作用机制研究 |
| 一、 实验对象与方法 |
| 二、 结果 |
| 三、 讨论 |
| 四、 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 Ac-DEVD-CHO 对兔基底动脉尖部动脉瘤生成的影响 |
| 一、 实验对象与方法 |
| 二、 结果 |
| 三、 讨论 |
| 四、 小结 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 综述 Caspase-3 基因与颅内动脉瘤 |
| 参考文献 |
| 在校期间发表学术论文 |
| 致谢 |
（8）前交通动脉瘤形成、破裂和复发的危险因素及破裂的血流动力学机制研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 目次 |
| 前言 |
| 第一部分 前交通动脉瘤生成的危险因素分析 |
| 1 资料与方法 |
| 1.1 资料来源 |
| 1.2 解剖结构上的测量和相关说明 |
| 1.3 数据收集 |
| 1.4 检验效能及样本大小的计算 |
| 1.5 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 研究群体 |
| 2.2 前交通动脉瘤形成的危险因素的单因素分析 |
| 2.3 前交通动脉瘤形成的危险因素的多因素分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 年龄是前交通动脉瘤形成的独立危险因素 |
| 3.2 性别差异在前交通动脉瘤形成中的影响 |
| 3.3 吸烟在前交通动脉瘤形成中的影响 |
| 3.4 饮酒在前交通动脉瘤形成中的影响 |
| 3.5 高血压是前交通动脉瘤形成的独立危险因素 |
| 3.6 高血脂和糖尿病在前交通动脉瘤形成中的影响 |
| 3.7 单侧优势A1段或一侧缺如A1段是前交通动脉瘤形成的独立危险因素 |
| 4 本研究的局限性 |
| 5 结论 |
| 6 参考文献 |
| 第二部分 年龄、瘤体大小和A1段血管构象预测前交通动脉瘤的破裂风险 |
| 1 资料与方法 |
| 1.1 资料来源 |
| 1.2 解剖测量和定义 |
| 1.3 数据收集 |
| 1.4 统计分析 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 3.1 年龄与前交通动脉瘤破裂的关系 |
| 3.2 瘤体大小与前交通动脉瘤破裂的关系 |
| 3.3 性别与前交通动脉瘤破裂的关系 |
| 3.4 吸烟与前交通动脉瘤破裂的关系 |
| 3.5 饮酒与前交通动脉瘤破裂的关系 |
| 3.6 高血压与前交通动脉瘤破裂的关系 |
| 3.7 糖尿病与前交通动脉瘤破裂的关系 |
| 3.8 高胆固醇血症与前交通动脉瘤破裂的关系 |
| 3.9 多发性动脉瘤与前交通动脉瘤破裂的关系 |
| 3.10 前交通动脉单侧优势A1段或一侧缺如A1段与前交通动脉瘤破裂的关系 |
| 4 本研究的局限性 |
| 5 结论 |
| 6 参考文献 |
| 第三部分 破裂与未破裂前交通动脉瘤血流动力学数值模拟研究 |
| 1 资料与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 MRA图像采集及处理 |
| 1.3 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 研究病人临床及解剖学特征 |
| 2.2 动脉瘤3D模型的建立 |
| 2.3 动脉瘤血流模式 |
| 2.4 动脉瘤冲击域大小 |
| 2.5 瞬时流线及峰值期壁切应力 |
| 3 讨论 |
| 3.1 动脉瘤血流模式与动脉瘤破裂 |
| 3.2 中击域大小与动脉瘤破裂 |
| 3.3 动脉瘤壁切应力与动脉瘤破裂 |
| 4 本研究的局限性 |
| 5 参考文献 |
| 第四部分 前交通动脉瘤的血管内栓塞复发的危险因素分析 |
| 1 资料与方法 |
| 1.1 研究设计,入选标准和排除标准 |
| 1.2 临床资料收集 |
| 1.3 形态学数据的测量和分析及其相关定义 |
| 1.4 栓塞结果的评估 |
| 1.5 血管内治疗程序 |
| 1.6 随访 |
| 1.7 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 患者群体 |
| 2.2 动脉瘤形态学 |
| 2.3 即时和随访血管造影 |
| 2.4 动脉瘤复发的危险因素的单因素分析 |
| 2.5 动脉瘤复发的危险因素的多因素分析 |
| 3 讨论 |
| 3.1 临床因素 |
| 3.2 解剖因素 |
| 3.3 即时血管造影结果 |
| 4 结论 |
| 5 参考文献 |
| 全文总结 |
| 综述一 |
| 参考文献 |
| 综述二 |
| 参考文献 |
| 作者简历及在学期间所取得的科研成果 |
（9）颅内动脉瘤动物模型的建立及发病机制的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一部分 颅内动脉瘤模型制作的研究 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 PDGF-b、c-Jun、Caspase-3 在人脑动脉瘤，兔动脉瘤模型中的表达及意义 |
| 前言 |
| 临床资料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 附图 |
| 参考文献 |
| 第三部分 流体切应力对动脉内皮细胞 PDGF-b、c-Jun、Caspase-3 mRNA 表达的影响和意义 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 综述（一） |
| 参考文献 |
| 综述（二） |
| 参考文献 |
| 英文缩略词表 |
| 攻读学位期间公开发表的论文 |
| 致谢 |
（10）高血压对大鼠动脉瘤模型影响及新型弹簧圈栓塞治疗研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 研究背景 |
| 第一部分 大鼠颅内动脉瘤模型制作及高血压对其影响的实验研究 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.1.1 材料设备 |
| 1.1.2 动物及分组 |
| 1.1.3 动物模型制作方法 |
| 1.1.4 血压测量与动脉瘤大小检测 |
| 1.1.5 取材和固定 |
| 1.1.6 病理学检查 |
| 1.1.7 免疫荧光 |
| 1.1.8 实时定量PCR |
| 1.1.9 Western Blot |
| 1.1.10 统计学分析 |
| 1.2 结果 |
| 1.2.1 血压值变化 |
| 1.2.2 动脉瘤解剖学形态观察 |
| 1.2.3 病理学观察 |
| 1.2.4 免疫荧光结果 |
| 1.2.5 实时定量PCR结果 |
| 1.2.6 Western Blot结果 |
| 1.3 讨论 |
| 1.3.1 关于动脉瘤模型 |
| 1.3.2 关于动脉瘤发生发展的影响因素 |
| 1.3.3 MMP-9与动脉瘤的关系 |
| 1.3.4 Col3a1与颅内动脉瘤的关系 |
| 1.3.5 关于本研究的实验结果分析 |
| 参考文献 |
| 图表及说明 |
| 第二部分 经VEGF修饰铂金微弹簧圈栓塞大鼠动脉瘤模型的研究 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 动物及材料 |
| 2.1.2 分组 |
| 2.1.3 各组弹簧圈片断的制备 |
| 2.1.4 动物模型制作方法 |
| 2.1.5 取材和固定 |
| 2.1.6 组织病理学检测及免疫组化评估 |
| 2.1.7 Western Blot |
| 2.1.8 统计学分析 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 动脉瘤组织细胞增殖情况 |
| 2.2.2 免疫组织化学染色 |
| 2.2.3 VEGF在动脉瘤局部组织表达情况 |
| 2.3 讨论 |
| 参考文献 |
| 图表及说明 |
| 缩略词中英文对照表 |
| 综述 |
| 攻读硕士学位期间成果 |
| 致谢 |
| 统计学审稿证明 |
四、大鼠实验性囊状动脉瘤生长塑形模型的建立（论文参考文献）
- [1]基质金属蛋白酶对脑动脉瘤的影响及其相互关系研究[D]. 邹亮. 苏州大学, 2021(06)
- [2]促红细胞生成素导致腹主动脉瘤形成的作用及分子机制研究[D]. 章萌. 山东大学, 2020(12)
- [3]植入镁对大鼠牙周炎作用的实验研究[D]. 何薇. 南昌大学, 2020(08)
- [4]二甲双胍对腹主动脉瘤发病的影响及分子机制研究[D]. 赵星智. 中国医科大学, 2019(02)
- [5]早期动脉瘤模型大鼠形成过程中血管壁基质结构蛋白的表达[J]. 王增亮,李绍山,赛力克·对山拜,汪永新,成晓江,周庆九,周凯,杜郭佳,王鑫,更·党木仁加甫. 中国组织工程研究, 2015(05)
- [6]Src激酶抑制剂PP2抑制颅内动脉瘤形成的初步研究[D]. 张贤华. 南昌大学, 2013(07)
- [7]线粒体途径介导的细胞凋亡在颅内动脉瘤生成中的作用机制研究[D]. 张海峰. 第二军医大学, 2013(04)
- [8]前交通动脉瘤形成、破裂和复发的危险因素及破裂的血流动力学机制研究[D]. 赖小彪. 浙江大学, 2013(11)
- [9]颅内动脉瘤动物模型的建立及发病机制的研究[D]. 朱文焕. 苏州大学, 2012(09)
- [10]高血压对大鼠动脉瘤模型影响及新型弹簧圈栓塞治疗研究[D]. 姬斌. 南方医科大学, 2010(04)