马腺疫链球菌SrtA的表达及其免疫原性评价

马腺疫链球菌SrtA的表达及其免疫原性评价

论文摘要

旨在表达马腺疫链球菌(Streptococcus equi subsp.equi)的SrtA蛋白并分析其免疫效果。以该菌基因组为模板,用PCR方法扩增SrtA基因,构建重组质粒pET-28a-SrtA,诱导表达SrtA,并以纯化蛋白免疫小鼠,间接ELISA检测小鼠血清中抗体水平效价及抗体亚型。首次免疫后第45天,对免疫小鼠用S.equi攻毒,测定免疫保护力、菌体载量和脾细胞表面CD4+T和CD8+T分子的表达,并对脏器进行病理组织学观察。结果表明,成功表达了SrtA蛋白,SDS-PAGE显示该蛋白分子量为27 kDa。初次免疫45 d后,小鼠血清抗体效价达1∶218 700,抗体亚型以IgG1和IgG2b为主;脾淋巴细胞中CD4+T和CD8+T细胞表达量升高;攻毒保护率可达75%;SrtA免疫可降低攻毒小鼠肺、脾、肝、肾组织的荷菌量。SrtA免疫可诱导小鼠产生特异性体液和细胞免疫应答。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材 料
  •     1.1.1 菌株和质粒
  •     1.1.2 主要试剂
  •     1.1.3 实验动物
  •   1.2 SrtA基因的扩增
  •   1.3 重组蛋白SrtA的诱导表达及纯化
  •   1.4 小鼠免疫
  •   1.5 抗体水平及滴度检测
  •   1.6 抗体分型检测
  •   1.7 流式细胞检测
  •   1.8 免疫保护力检测
  •   1.9 脏器荷菌量测定
  •   1.10 病理组织学观察
  •   1.11 统计学分析
  • 2 结果与分析
  •   2.1 SrtA基因扩增及原核表达载体的构建
  •   2.2 重组蛋白的表达纯化及鉴定
  •   2.3 间接ELISA检测抗体
  •     2.3.1 抗体水平及滴度的检测
  •     2.3.2 抗体亚型的检测
  •   2.4 流式细胞检测结果
  •   2.5 免疫保护力检测及体重变化
  •   2.6 脏器荷菌量测定
  •   2.7 病理组织学观察
  • 3 讨 论
  • 4 结 论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 汪丽,马陈,吕芬芬,蒲小峰,苏艳

    关键词: 马腺疫链球菌,表达与纯化,免疫效果

    来源: 新疆农业大学学报 2019年02期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 新疆农业大学动物医学学院

    基金: 国家自然科学基金项目(31660707,U1803108),新疆维吾尔自治区重大专项项目(2017A01002-2-6)

    分类号: S852.611

    页码: 121-127

    总页数: 7

    文件大小: 6871K

    下载量: 46

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