关节软骨细胞和骨髓间充质干细胞不同共培养方式对细胞增殖与分化的影响

论文摘要

背景:在关节软骨细胞和骨髓间充质干细胞共培养环境中,软骨细胞功能活跃,增殖速度加快,骨髓间充质干细胞促进了软骨细胞的表型维持,而且少量软骨细胞提供的微环境能够诱导骨髓间充质干细胞成软骨分化,降低了软骨分化过程中出现的肥大表型和软骨内骨化,但是影响共培养系统中细胞增殖分化的因素和细胞间相互作用的机制尚不明确。目的:观察软骨细胞和骨髓间充质干细胞接触共培养对细胞增殖分化的影响,进一步优化共培养方式,为探讨共培养系统中二者的相互作用机制提供依据。方法:分离和培养新西兰兔(南京医科大学实验动物中心提供)软骨细胞和骨髓间充质干细胞,取第2代软骨细胞和骨髓间充质干细胞,以1∶3的比例直接混合在24孔板进行接触共培养为接触共培养组,以1∶3比例分别在Transwell的上室和下室进行非接触共培养为非接触共培养组,共培养21d。细胞爬片进行甲苯胺蓝染色、COL2a1及Cx43细胞免疫化学染色。应用CCK8检测共培养系统中细胞的增殖情况,ELISA检测共培养细胞上清液中糖胺聚糖和转化生长因子β3水平,Western blot检测共培养细胞COL2a1和Cx43的表达。然后添加转化生长因子β3进行软骨细胞和骨髓间充质干细胞接触共培养和非接触共培养,比较细胞增殖、糖胺聚糖水平、COL2a1及Cx43蛋白表达的变化。结果与结论:(1)随着共培养时间的延长,细胞增殖能力逐渐增高,接触共培养组细胞吸光度值明显高于非接触共培养组(P <0.05),糖胺聚糖和转化生长因子β3水平以及COL2a1和Cx43的蛋白表达明显高于非接触共培养组;(2)添加10μg/L转化生长因子β3共培养21 d,接触共培养组细胞增殖、糖胺聚糖水平、COL2a1及Cx43的表达与未添加转化生长因子β3比较无明显变化(P>0.05),而非接触共培养组的细胞增殖、糖胺聚糖水平、COL2a1及Cx43蛋白表达明显提高(P<0.05),但仍明显低于未添加转化生长因子β3的接触共培养组(P <0.05);(3)结果表明,接触共培养比非接触共培养明显促进细胞的增殖和分化,Cx43在其中起重要作用。

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文题释义:

0引言Introduction

1 材料和方法Materials and methods

1.1 设计

1.2 时间及地点

1.3 材料

1.3.1 实验动物

1.3.2 实验试剂与仪器

1.4 实验方法

1.4.1 BMSCs和ACs的分离培养和共培养

1.4.2 ACs和BMSCs接触共培养和非接触共培养

1.4.3 添加转化生长因子β3进行BMSCs和ACs接触共培养和非接触共培养

1.5 主要观察指标

1.5.1 共培养后细胞形态学变化以及免疫化学染色检测共培养细胞COL2a1和Cx43的表达

1.5.2 CCK8试剂盒检测共培养细胞的增殖情况

1.5.3 ELISA法测定共培养系统中糖胺多糖和转化生长因子β3水平

1.5.4 Western blot检测共培养细胞COL2a1和Cx43的表达

1.6 统计学分析

2 结果Results

2.1 共培养细胞的形态变化

2.2 ACs和BMSCs接触共培养对细胞增殖分化的影响

2.3 外源性转化生长因子β3对共培养细胞增殖分化的影响

3 讨论Discussion

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 赵文慧,皮洪涛,冯万文,李向东,王建伟,刘岳鹏,姜洋,马建新,夏亚一,王翠芳,邵林林,李春辉,郁洪阳,刘尚林,董言斌,马亚辉

关键词: 软骨细胞,骨髓,间质干细胞,共同培养技术,转化生长因子,连接蛋白,组织工程,关节软骨细胞,骨髓间充质干细胞,共培养,增殖,分化,糖胺聚糖,型胶原,缝隙连接,干细胞

来源: 中国组织工程研究 2019年01期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技,基础科学

专业: 生物学,基础医学

单位: 徐州医科大学附属连云港市东方医院临床研究中心,蚌埠医学院研究生院,兰州大学第二医院骨科研究所

基金: 江苏省“333重点人才培养工程”项目(201412),项目负责人:冯万文,连云港市科技局社会发展项目(SH1545),项目负责人:冯万文,连云港市卫计委科研计划项目(201728),项目负责人:冯万文~~

分类号: R329.2

页码: 24-29

总页数: 6

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关节软骨细胞和骨髓间充质干细胞不同共培养方式对细胞增殖与分化的影响

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