胎生蜥蜴MHC Ⅰ类基因的多态性及对母胎免疫影响的研究

胎生蜥蜴MHC Ⅰ类基因的多态性及对母胎免疫影响的研究

论文摘要

胎生蜥蜴作为古北界蜥蜴的代表,具有卵胎生繁殖模式。在中国的分布仅局限于黑龙江、内蒙古和新疆3个省区。由于人为干扰对其生境的破坏,导致胎生蜥蜴已处于渐危状态。主要组织相容性复合体(Major histocompatibility complex,MHC)基因是免疫系统中的具有高度多态性的功能基因之一,且由于识别多种病原体和适应环境的需要,使其抗原结合区存在较高的变异性。本研究首次对大小兴安岭山区共4个地区的胎生蜥蜴的74个个体的MHC Ⅰ类基因多态性和母胎免疫影响进行分析,得出以下4个结果:1.从19个个体中克隆出570条序列,其中α2的核苷酸长度为201223 bp,α3的核苷酸长度为181184 bp,α2和α3的氨基酸长度为111178 aa。实验中共得到47个等位基因,推测至少有36个MHC Ⅰ类基因座,符合基因“出生-死亡”进化模式,说明其在进化过程中经历了基因复制或丢失。2.通过对核苷酸序列变异位点的计算得出4个种群核苷酸多态性π在0.3050.659之间,表明胎生蜥蜴核苷酸多态性水平较高,其中牙克石种群核苷酸多态性最高,嫩江种群最低。3.综合平均氨基酸距离小于平均核苷酸距离、非同义突变率大于同义突变率(ω>1),MEME和MEGA方式预测的37个选择位点有26个在抗原结合位点附近等结果可以推测位于抗原结合位点的序列经历过正选择作用,与平衡选择有关,且未检测到的重组作用。在构建的系统进化树中发现有跨种多态性的存在。4.通过MHC Ⅰ基因对母胎免疫影响的研究发现,胎生蜥蜴除了受到免疫系统季节性影响外,还与成功妊娠有关;同时,不同组织面临的抗原威胁和组织自身功能的协同作用导致MHC Ⅰ基因相对表达量发生变化。综上所述,胎生蜥蜴MHC Ⅰ基因在进化中经历了基因复制,具有高度多态性,且由平衡选择维持。在母胎免疫调控中表现出降低MHC Ⅰ基因相对表达量的现象,与胎生动物的相关研究类似。本研究为胎生蜥蜴的物种保护和母胎免疫研究提供理论依据。

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 第1章 绪论
  •   1.1 胎生蜥蜴研究现状
  •   1.2 主要组织相容性复合体研究进展及其应用
  •     1.2.1 MHC分子结构与功能
  •     1.2.2 MHC基因特征
  •     1.2.3 MHC分子在非爬行动物中的研究概况
  •     1.2.4 爬行类动物经典MHCⅠ类基因的遗传进化机制研究
  •   1.3 母胎免疫机制与遗传多态性
  •     1.3.1 母胎免疫机制概述
  •     1.3.2 遗传多态性分析与应用
  •   1.4 研究目的及意义
  • 第2章 材料和方法
  •   2.1 实验材料
  •     2.1.1 样品的采集与饲养
  •     2.1.2 主要仪器和设备
  •     2.1.3 主要的实验试剂及配制
  •   2.2 实验方法
  •   2.3 数据分析
  •     2.3.1 等位基因的确定及序列比对
  •     2.3.2 计算遗传多态性指标
  •     2.3.3 系统进化关系分析
  •     2.3.4 选择信号检测
  •     2.3.5 重组检测
  • 第3章 胎生蜥蜴MHCⅠ类基因的多态性
  •   3.1 基因组DNA提取结果的检测
  •   3.2 总RNA提取结果的检测
  •   3.3 常规PCR产物检测及纯化测序
  •   3.4 遗传多态性分析
  •     3.4.1 序列多态性分析
  •     3.4.2 正选择位点分析
  •     3.4.3 跨种多态性分析
  •     3.4.4 重组检测
  •   3.5 讨论
  •     3.5.1 MHCⅠ基因多态性分析
  •     3.5.2 正选择
  •     3.5.3 跨物种多态性
  •     3.5.4 重组现象
  •   3.6 本章小结
  • 第4章 胎生蜥蜴MHCⅠ类基因对母胎免疫的影响
  •   4.1 RT-PCR产物检测
  •   4.2 不同生理时期基因的相对表达量
  •   4.3 不同组织基因相对表达量
  •   4.4 讨论
  •   4.5 本章小结
  • 结论
  • 参考文献
  • 攻读学位期间发表的学术论文
  • 致谢
  • 文章来源

    类型: 硕士论文

    作者: 刘婉丽

    导师: 赵文阁,刘玉芬

    关键词: 胎生蜥蜴,类基因,多态性,平衡选择,母胎免疫

    来源: 哈尔滨师范大学

    年度: 2019

    分类: 基础科学

    专业: 生物学,生物学

    单位: 哈尔滨师范大学

    基金: 国家自然科学基金项目(31172079),黑龙江省自然科学基金项目(C2016035)

    分类号: Q953

    总页数: 73

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