导读:本文包含了人胃粘膜上皮细胞论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:SFRP1,失巢凋亡,RNA干扰,Wnt,β-catenin信号通路
人胃粘膜上皮细胞论文文献综述
汤晓琳[1]（2019）在《SFRP1基因沉默抑制人胃粘膜上皮细胞失巢凋亡及其机制研究》一文中研究指出目的正常上皮细胞与细胞外基质或相邻细胞脱离粘附后,发生的程序化细胞死亡称为失巢凋亡。研究发现许多肿瘤细胞,包括胃癌细胞具有抵抗失巢凋亡的能力,进而通过血液及淋巴转移至远处器官进行异位定植。但胃癌细胞发生失巢凋亡抵抗的分子机制还尚不明确。分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)在胃癌等多种恶性肿瘤组织中呈低表达或表达缺失。研究发现SFRP1基因启动子区甲基化导致基因表达沉默,促进胃癌的形成和发展,但SFRP1表达沉默在胃癌发展中具体机制仍不十分明确。SFRP1表达沉默是否在正常胃粘膜上皮细胞癌变中发挥作用尚未见报道。我们在前期研究中发现人胃粘膜上皮细胞GES-1(Gastric mucosal Epithelial Cells-1,GES-1)为失巢凋亡敏感细胞,本研究通过RNA干扰沉默GES-1细胞中SFRP1表达,检测细胞失巢凋亡,非锚定生长及迁移侵袭能力的变化,探讨SFRP1对GES-1细胞失巢凋亡敏感性的影响,并进一步研究了SFRP1调控胃粘膜上皮细胞失巢凋亡的分子机制,为研究SFRP1在胃癌发展中的作用及机制提供新的思路和理论依据。方法1.应用SFRP1基因小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)转染处理人胃粘膜上皮细胞GES-1后,分别应用实时定量RT-PCR和Western blot检测SFRP1 mRNA和蛋白表达,筛选出沉默效应最显着的siRNA。2.应用poly-HEMA悬浮培养细胞模拟失巢环境。3.应用流式细胞术和Calcein AM/EthD-1荧光双染法检测转染SFRP1siRNA对细胞失巢凋亡的影响。4.应用软琼脂集落形成实验检测转染SFRP1siRNA对细胞非锚定生长的影响。5.应用Transwell小室实验检测转染SFRP1siRNA后细胞迁移力和侵袭力的变化。6.应用细胞免疫荧光和Western blot实验检测转染SFRP1siRNA后Wnt通路中β-catenin的定位及表达变化。7.应用实时定量RT-PCR检测转染SFRP1siRNA后β-catenin下游靶基因c-Myc和CyclinD1 mRNA表达变化。结果1.实时定量RT-PCR和Western blot结果表明,叁组SFRP1 siRNA及对照组Control siRNA分别转染GES-1细胞后,siRNA-891组SFRP1 mRNA表达较对照组显着降低(P<0.01)。SFRP1蛋白表达较对照组显着降低(P<0.05)。2.流式细胞术检测结果表明,悬浮培养24 h后,siRNA-891组细胞失巢凋亡率较对照组明显降低(P<0.05)。Calcein AM/EthD-1荧光双染法检测表明,与对照组比较,siRNA-891组EthD-1荧光染色的失巢凋亡细胞数目明显减少,Calcein AM荧光染色的存活细胞数目明显增多,荧光值分析显示siRNA-891组较对照组有显着差异(P<0.05)。3.软琼脂集落形成实验检测表明,siRNA-891组细胞与对照组比较,所形成的集落明显变大,集落数量明显增多,两组差异有统计学意义(P<0.05)。4.Transwell小室检测显示,与对照组相比,siRNA-891组细胞迁移及侵袭能力显着增强(P<0.05)。5.细胞免疫荧光结果显示,与对照组比较,siRNA-891组β-catenin在细胞核中表达增强。Western blot结果表明siRNA-891组β-catenin蛋白表达水平较对照组明显增加(P<0.05)。6.实时定量RT-PCR结果表明,与对照组相比,siRNA-891组细胞中c-Myc mRNA和CyclinD1 mRNA表达显着增高(P<0.01)。结论SFRP1基因沉默可抑制GES-1细胞失巢凋亡,诱导其获得失巢凋亡抗性,激活Wnt分子通路可能是其机制之一。(本文来源于《沈阳医学院》期刊2019-03-01）
严展鹏,徐婷婷,安振涛,胡莹,陈婉珍[2]（2018）在《单功能烷化剂MNNG对人胃粘膜上皮GES-1细胞的损伤及其对Wnt/β-catenin信号通路的影响》一文中研究指出本文旨在从Wnt/β-catenin信号通路的角度探讨单功能烷化剂MNNG诱导人胃粘膜上皮GES-1细胞损伤的机制。用MNNG(2×10-5 mol/L)处理GES-1细胞24 h,处理后第3天用倒置显微镜对GES-1细胞形态进行观察,用MTT法检测GES-1细胞活力,用流式细胞术检测GES-1细胞凋亡和周期变化,用q PCR检测GES-1细胞中β-catenin、GSK-3β、c-Met和MMP7m RNA表达情况,用Western blot检测β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β和c-Met蛋白表达情况。结果显示:MNNG能够明显损伤GES-1细胞,细胞形态变为不规则的长梭形;MNNG能够诱导GES-1细胞凋亡,明显阻滞细胞周期进程;MNNG能够上调β-catenin、GSK-3β、c-Met和MMP7 m RNA表达水平,并上调β-catenin、GSK-3β和p-GSK-3β蛋白表达水平。上述结果提示,MNNG对GES-1细胞的损伤可能与Wnt/β-catenin信号通路的激活相关,这为胃粘膜损伤的细胞模型研究提供了参考。(本文来源于《生理学报》期刊2018年03期）
周业[3]（2018）在《RTN4高表达对永生化胃粘膜上皮GES1细胞增殖的影响及机制》一文中研究指出目的:胃癌是严重威胁我国人们健康与生命的常见的恶性肿瘤之一。为阐明其发生发展机制,课题组前期筛选出胃癌组织高表达差异蛋白质RTN4,进一步了解其在胃癌发病过程中的作用与机制,可为揭示胃癌发病的分子机制提供实验资料。方法:1、采用PCR方法构建p IRESneo3-RTN4真核表达载体,利用脂质体转染法将p IRESneo3-RTN4真核表达载体,转染永生化胃粘膜上皮GES1细胞,500mg/L G418筛选2周后汇合克隆,扩大培养,建立RTN4高表达GES1细胞系,即GES1-RTN4(GES1-p IRESneo3为载体对照)细胞;2、通过细胞免疫荧光和Western-blot检测GES1-RTN4(GES1-p IRESneo3为载体对照)细胞中RTN4的表达;3、运用细胞生长曲线、平皿克隆与软琼脂集落形成实验、流式细胞仪等,观察RTN4高表达对GES1细胞生长与增殖、周期与凋亡的影响。4、采用Western-blot检测GES1-RTN4(GES1-p IRESneo3为载体对照)细胞中IκBα蛋白的表达。结果:1、细胞生长曲线结果显示:GES1-RTN4细胞的生长速度较GES1和GES1-p IRESneo3细胞明显加快,说明RTN4高表达后促进GES1细胞的生长与增殖(P<0.01);2、平皿克隆形成实验结果显示:GES1、GES1-p IRESneo3和GES1-RTN4细胞的克隆数分别为56±8、65±12和128±21(个),GES1-RTN4细胞形成克隆数目较GES1和GES1-p IRESneo3细胞明显增多(P<0.01),且克隆体积大,说明RTN4高表达后,GES1细胞的克隆形成能力明显增加;3、软琼脂集落形成实验结果显示:GES1、GES1-p IRESneo3和GES1-RTN4细胞的集落数分别为64±12、72±16和146±28(个),GES1-RTN4细胞形成的集落较GES1和GES1-p IRESneo3细胞明显增多(P<0.01),且集落体积大,说明RTN4高表达后GES1细胞的集落形成能力明显增加;4、流式细胞仪检测结果显示:GES1细胞S期细胞比为45.63±4.62,G1期细胞比为49.57±8.49,细胞增殖指数为50.43;GES1-p IRESneo3细胞S期细胞比为30.10±6.28,G1期细胞比为48.75±7.86,细胞增殖指数为51.25;GES1-RTN4细胞S期细胞比为55.28±9.15,G1期细胞比为26.88±3.42,细胞的增殖指数为73.13。说明RTN4高表达后GES1细胞中S期细胞比例明显增加,G1细胞比例降低,细胞增殖指数增加(P<0.01);同时,GES1、GES1-p IRESneo3和GES1-RTN4细胞的凋亡率降分别为24.65±4.58、24.43±3.36和17.52±1.23,说明RTN4高表达后,细胞的凋亡率降低(P<0.01)。5、Western-blot结果显示:GES1-RTN4细胞中IκBα蛋白表达较GES1和GES1-p IRESneo3细胞减少(P<0.01)。结论:RTN4通过活化NF-κB信号通路,提高细胞增殖指数,抑制细胞凋亡,促进GES1细胞的增殖。(本文来源于《南华大学》期刊2018-05-01）
沈和德,褚明亮,易韦,杨文秀[4]（2017）在《胆汁酸诱导胃粘膜上皮细胞肠化生模型的建立与快速鉴定》一文中研究指出目的:建立诱导胃粘膜上皮细胞肠化生的模型及快速鉴定方法。方法:选取鹅脱氧胆酸(CDCA)对人永生化的胃粘膜上皮细胞进行诱导刺激,以CDX2作为鉴定抗体,行免疫组织化学技术。结果:CDX2抗体在CDCA诱导的GES-1细胞上呈阳性表达,而在空白诱导的GES-1细胞上呈现阴性表达。结论:CDCA可以快速诱导胃粘膜上皮细胞肠化生;将细胞制成石蜡细胞块,以CDX2作为鉴定抗体行免疫组织化学方法,可以作为一种快速简便的鉴定方法。(本文来源于《甘肃医药》期刊2017年06期）
任海风[5]（2017）在《CagA诱导的miR-155上调靶向KLF4促进胃粘膜上皮细胞的恶性转化》一文中研究指出【实验研究背景】在全世界范围内,胃癌发病率高,大约是癌症总发病率的8%,是癌症致死的主要恶性疾病之一,是常见的恶性肿瘤。更为重要的是,约有70%的胃癌相关的死亡病例均位于不发达国家,尤其是东亚地区。在中国,肺癌、乳腺癌、胃癌、肝癌、结肠癌是男性和女性中5种最常见的高发肿瘤。胃癌的发生是宿主基因多态性、我们日常饮食或是吸烟等环境因素、表观遗传学改变等多种危险因素共同作用的结果。目前,幽门螺旋杆菌长期慢性感染胃粘膜上皮被认为是导致胃恶性肿瘤发生的最危险的因素,尤其是胃腺癌。但是幽门螺旋杆菌的致病机制并不清楚,已经报道的幽门螺旋杆菌如何与宿主基因相互作用影响胃癌的发生发展非常少。目前仍然有许多关键性的问题需要进一步探索。最近研究表明,细胞毒素相关抗原A蛋白(CagA)和细胞空泡毒素A(VacA)是幽门螺旋杆菌当中致病性最强的毒力因子,研究最为广泛。进入细胞内的CagA蛋白能够异常激活NF-κB、β-catenin等信号通路,促进细胞增殖、促炎性细胞因子产生及相关miRNA的产生等细胞反应,参与致癌过程。虽然全世界有将近一半的人感染了幽门螺旋杆菌,却只有3%的感染人群最终发展为胃癌。这就说明幽门螺旋杆菌感染能否致病还依赖于与宿主基因的相互作用。表观遗传学包括点突变、剪切、复制、重组、与肿瘤相关基因的甲基化等等的改变,以及肿瘤抑癌基因的失活是从炎症转变为癌症的重要分子机制。胃癌的发生是幽门螺旋杆菌感染与细胞内抑癌基因之间相互作用的结果。miRNA是一类小的,非编码的RNAs,它通过直接与靶mRNA 3′UTR结合,负向调控与肿瘤发生相关的癌基因或者抑癌基因的m RNA水平,促进癌症的发展。广泛的参与到了基因的转录后调控。有报道研究,miR-155是免疫反应和炎症反应的关键调控因素。但是,miR-155在幽门螺旋杆菌感染导致的胃疾病当中发挥了怎样的功能作用并不清楚,已有的报道也有相矛盾的地方。KLF4是一个含有锌指结构的转录因子。我们前期对KLF4进行了研究,实验结果显示,过表达KLF4明显的增加了细胞的凋亡；体内实验说明过表达KLF4抑制了胃癌增殖和侵袭,KLF4在胃癌中具有抑癌基因的作用。胃癌组织中KLF4蛋白表达较正常胃粘膜上皮明显降低,KLF4的表达和功能作用与胃癌的发生发展关系密切。但是KLF4在胃癌中表达异常的分子机制却不清楚。我们提出了以下假设:KLF4在胃癌中表达异常是不是由于幽门螺旋杆菌感染引起的?幽门螺旋杆菌中致病性最强的毒力因子CagA是如何与宿主基因KLF4相互作用,导致KLF4在胃粘膜上皮细胞异常表达?KLF4在胃癌中表达异常是否可能由于miRNA靶向干扰KLF4表达?为了探索抑癌基因KLF4在胃癌中表达降低可能存在的分子机制,本课题在细胞水平上和临床病例相结合的方式进行实验验证。【实验研究方法】1、Western blot检测胃粘膜上皮细胞和胃癌细胞中KLF4蛋白表达。将HA标记的WT-CagA质粒转染进入GES-1细胞,通过转染不同的时间、不同的剂量,检测GES-1细胞中KLF4蛋白和m RNA表达。2、免疫组化方法检测胃癌组织和癌旁组织中KLF4蛋白表达。3、将HA标记的WT-CagA质粒转染进入GES-1细胞,细胞行为学实验检测CagA对GES-1细胞恶性生物学行为的影响。4、搜集33例体检者和胃癌患者血清标本,提取血清中miRNA,用RT-PCR的方法检测miR-155表达的差异性；原位杂交方法检测胃癌组织和癌旁组织中miR-155表达。5、RT-PCR检测胃粘膜上皮细胞和胃癌细胞株中miR-155的表达。将HA标记的WT-CagA质粒转染进入GES-1中,提取细胞中总RNA。用普通PCR的方法,琼脂糖凝胶电泳观察CagA对miR-155表达的影响。6、在GES-1细胞中瞬时转染miR-155-3p minic和miR-155-5p-minic,普通PCR检测其对KLF4 mRNA影响；通过转染不同的时间、不同的剂量,Western blot检测其对KLF4蛋白表达的影响；WT-KLF4 luciferase reporter和MUT-KLF4 luciferase reporter与miR-155 minic/NC共转染,48h后检测荧光素酶活性,从而对miR-155下游靶点的预测进行验证。7、建立稳定表达miR-155-5p-negative control&miR-155-5p minic的胃粘膜上皮细胞株GES-1和胃癌细胞株AGS。建立稳定表达miR-155-5p-negative&miR-155-5p-inhibitor的胃癌细胞株SGC-7901。通过western blot实验分析稳定表达miR-155和敲低miR-155的细胞株中,KLF4蛋白表达。【实验研究结果】1、与正常的胃粘膜上皮细胞相比,胃癌细胞株当中KLF4蛋白表达明显降低；高表达CagA后很明显的降低了KLF4蛋白和m RNA表达,并且呈现出时间和剂量依赖性的抑制；2、免疫组化结果显示,胃癌组织当中KLF4的表达明显降低,且幽门螺旋杆菌感染的胃癌组织KLF4表达降低更为明显。3、幽门螺旋杆菌毒力因子CagA的高表达促进了胃粘膜上皮细胞的增殖、迁移、平板克隆等恶性生物学行为的改变。4、与正常人的血清相比,胃癌患者血清标本中miR-155的表达增高,尤其在TNM分期Ⅱ期和Ⅲ期更为明显；并且miR-155表达的升高与幽门螺旋杆菌感染密切相关。miR-155在胃癌组织中表达明显高于癌旁组织。5、细胞水平上,在胃上皮细胞GES-1和恶性程度相对较低的胃癌细胞株AGS表达相对较低,在恶性程度较高的胃癌细胞株中miR-155表达水平相对较高；高表达CagA诱导了miR-155表达上调；6、荧光素酶报告基因证实KLF4可能是miR-155的靶基因。7、成功构建了稳定表达miR-155-5p-negative control&miR-155-5p minic的胃粘膜上皮细胞株GES-1和胃癌细胞株AGS。建立了稳定表达miR-155-5p-negative&miR-155-5p-inhibitor的胃癌细胞株SGC-7901。Western blot结果显示miR-155可能负向调控KLF4表达。【结论】CagA可能通过诱导miR-155表达,靶向干扰KLF4转录及翻译,抑制KLF4表达,从而促进胃粘膜上皮的恶性转化。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2017-02-01）
常伟龙[6]（2016）在《自噬通过mTOR信号通路保护胃粘膜上皮细胞免于乙醇诱导的氧化损伤》一文中研究指出第一部分乙醇抑制mTOR信号通路并诱导胃粘膜上皮细胞与组织自噬目的：重建乙醇损伤胃粘膜上皮细胞与组织的模型,探索其中自噬的表达情况以及相关通路的调控作用与意义。方法：胃粘膜上皮细胞系(GES-1细胞)与大鼠胃组织经过不同浓度的乙醇干预后,通过MTT、流式细胞凋亡实验、病理学评估等方法验证细胞与组织的损伤情况,并采用Western blot、免疫荧光法与免疫组织化学法等技术检测自噬相关蛋白的表达水平并评估mTOR信号通路的调控情况,从而探索自噬在乙醇诱导的胃粘膜上皮细胞中的分子机制。结果：细胞实验显示乙醇干预可以抑制GES-1细胞增殖活力并诱导细胞凋亡,动物实验显示大鼠经乙醇灌胃处理后胃粘膜切片可见胃小凹破坏及粘膜出血。此外,Western blot结果显示乙醇能上调自噬相关蛋白Beclin-1与ATG12-ATG5的表达并促使LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转化,而且这一过程伴随着mTOR及其下游的p70S6激酶的去磷酸化。结论：乙醇诱导胃粘膜上皮细胞与组织损害,此外乙醇也可以通过抑制mTOR信号通路诱导胃粘膜上皮细胞与组织自噬的产生。第二部分调控细胞自噬对乙醇诱导的胃粘膜上皮细胞与组织损伤的影响及相关机制目的：探究乙醇诱导的胃粘膜上皮细胞与组织的损伤与自噬之问的联系以及作用机制。方法：使用自噬抑制剂3-MA或采用Atg7-siRNA沉默自噬相关基因的方法抑制GES-1细胞自噬过程,乙醇干预后运用PCR或Western blot等技术测定自噬相关蛋白改变,采用MTT与流式细胞凋亡实验等方法评估细胞增殖活性并检测细胞凋亡过程：通过灌胃法使用自噬抑制剂CQ预处理大鼠胃粘膜,并经乙醇干预后取胃组织做病理评分及H&E染色,评估胃粘膜的损伤情况,从而探讨自噬在胃粘膜中的作用意义。结果：细胞实验中Western blot显示抑制剂3-MA可以抑制GES-1细胞中LC3-II的生成,Atg7-siRNA可以通过沉默ATG7而抑制细胞自噬,MTT及流式凋亡实验数据显示,相比于乙醇单独干预,联合3-MA或Atg7-siRNA增强乙醇对GES-1细胞损伤作用,即增殖活性更低且凋亡率更高；动物实验结果显示,与单用乙醇灌胃相比,使用CQ预处理可以增加乙醇诱导的胃粘膜损伤的病理评分以及更加严重的胃小凹损伤及粘膜出血。结论：抑制细胞自噬可以增强乙醇诱导的胃粘膜上皮细胞或组织损伤,提示自噬在胃粘膜上皮细胞或组织中的保护作用。第叁部分 细胞自噬参与调控乙醇诱导的胃粘膜上皮细胞与组织氧化应激目的：探讨胃粘膜上皮细胞与组织中乙醇所诱导的氧化应激与自噬之问的相互关系。方法：乙醇与自噬抑制剂分别或联合干预GES-1细胞后采用DCFH-DA孵育,应用荧光酶标仪检测细胞内ROS的含量；乙醇或自噬抑制剂联合或分别通过灌胃法饲喂大鼠,取胃粘膜组织匀浆后检测其中SOD与MDA的表达水平。结果：乙醇联合自噬抑制剂干预GES-1细胞后DCF荧光强度明显高于单用乙醇干预：乙醇联合自噬抑制剂大鼠灌胃后,胃粘膜组织匀浆液中SOD活性显着低于单用乙醇组,而MDA水平明显多于单用乙醇组。结论：自噬对乙醇诱导的胃粘膜上皮细胞或组织损伤的保护作用,可能是由于这种保护性细胞自噬抑制了ROS的产生、抗氧化酶的降解以及脂质过氧化反应。(本文来源于《华中科技大学》期刊2016-05-01）
张水莲[7]（2016）在《组蛋白修饰参与化学致癌剂MNNG和MNU诱发人胃粘膜上皮细胞恶性转化的机制研究》一文中研究指出单功能烷化剂N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)和N-甲基-N-亚硝基脲(MNU)是实验室普遍使用的模式化学诱变剂,用于研究环境中广泛存在的N-亚硝基化合物(NOC)的致癌机制。我们实验室利用低剂量的MNNG和MNU多次、反复处理人胃粘膜上皮细胞GES-1,建立了化学致癌物诱导的细胞恶性转化模型。为研究表观遗传修饰参与细胞恶性转化的机制,我们对组蛋白H3和H4的主要修饰位点进行了差异分析。结果显示恶性转化细胞中以H3S10p和H3S28p为代表的H3磷酸化水平发生明显上调,而以H4K16ac为代表的H4乙酰化水平却显着降低。我们的进一步研究表明,引起H3S10p上调的主要上游激酶是MSK1,其激活仅部分依赖于ERK/MAPK信号通路,更主要的调控机制可能来源于其表达水平的显着增高。同时,我们发现细胞恶性转化后出现了MSK1/H3S10p通路下游靶基因c-fos, c-jun和jund的不同程度上调,提示组蛋白磷酸化异常可能参与细胞恶性转化过程中重要基因的调控。我们对组蛋白H4乙酰化水平广泛下调的研究显示：引起乙酰化下调的主要修饰酶是组蛋白去乙酰化酶HDAC1,其蛋白和mRNA水平以及酶活性在恶性转化细胞中均发生上调；抑制HDAC1的活性能显着恢复H4K16的乙酰化水平。此外,我们还发现HDAC6的表达水平也发生了上调,其重要底物α-tubulin的乙酰化水平降低,抑制HDAC6表达可逆转α-tubulin的低乙酰化。进一步研究组蛋白乙酰化异常可能影响的靶基因,我们发现抑癌基因FHIT在致癌物暴露后早期即发生显着下调。深入研究表明：该基因不存在纯合性缺失,其启动子区H4乙酰化水平明显降低,而DNA甲基化水平却显着增高。我们的结果表明包括DNA甲基化和组蛋白修饰在内的表观遗传机制参与了细胞恶性变过程中FHIT基因的表达调控。为进一步明确上述组蛋白修饰通路异常对恶性变细胞的影响,我们分别单独或联合使用MSK1抑制剂、HDAC抑制剂和DNA甲基转移酶抑制剂对恶性变细胞的恶性表型进行研究,发现逆转表观遗传修饰改变可显着抑制恶性表型。综上所述,我们研究了MNNG和MNU诱导人胃粘膜上皮细胞恶性转化过程中组蛋白异常修饰的调控机理及可能作用。研究结果为阐明NOC类致癌物诱发细胞恶性变、甚至胃癌发生的表观遗传调控机制提供了重要依据,并为胃癌等肿瘤的早期诊断与治疗提供了新的思路和线索。(本文来源于《浙江大学》期刊2016-01-01）
张宝珍,谷连坤,崔成华,柯杨,邓大君[8]（2015）在《人胃粘膜上皮细胞系GES-1对联合免疫缺陷小鼠具有致瘤性》一文中研究指出目的:SV-40病毒永生化的人胚胃粘膜上皮细胞系GES-1一直被当作正常胃上皮细胞使用,本研究的目的是明确该细胞是否具有致瘤性。方法:根据STR位点基因型鉴定细胞,免疫荧光方法鉴定GES-1细胞SV40大T抗原表达。Matrigel胶包裹GES-1细胞后接种联合免疫缺陷(SCID)小鼠皮下,观察成瘤情况,福尔马林固定、石蜡包埋、切片、伊红-苏木精和PAS粘液染色,显微镜下观察肿瘤组织形态。结果:本文所使用的连续传代培养GES-1细胞核SV40大T抗原染色阳性,10个STR位点的基因型与建系初代细胞完全一致,说明本研究用GES-1细胞系与初代细胞的遗传背景相同。皮下接种1.4×10~6个用Matrigel胶包裹的传代培养GES-1细胞,7周后6个接种点均有肿块形成,肿块最大直径可达2cm,镜下观察为高分化胃腺癌,PAS粘液染色阴性;未经Matrigel胶包裹的对照接种点无肿块形成。这些瘤组织直接再接种的成瘤率为4/8;瘤组织的原代培养细胞成瘤率:不用Matrigel胶再包裹组为1/4,用Matrigel胶继续包裹组为4/4。结论:GES-1细胞系对SCID小鼠具有致瘤性,是肿瘤细胞。(本文来源于《全国肿瘤流行病学和肿瘤病因学学术会议论文集》期刊2015-08-19）
常玉娟[9]（2015）在《基于Nrf2/ARE通路辛开苦降方胃康宁对人胃粘膜上皮细胞SOD2、GSTP1相关调控机制的研究》一文中研究指出背景：功能性消化不良(functional dyspepsia, FD)是指一组无器质性(organic pathologic changes与功能性相对)原因可究的,以持续性或反复性发作的上腹部疼痛、胀满、嗳气及早饱等为主要症状的临床症候群,是消化系统的常见病,占国内消化门诊的20%-50%。F D的病因和发病机制现代医学尚不明确,目前主要认为与胃肠动力障碍、内脏敏感性异常、幽门螺旋杆菌感染、胃肠激素的改变、脑一肠轴功能障碍、精神心理障碍、遗传易感性等多方面因素有关。目前5-HT激动剂类等调节胃肠动力类药物包括替加色罗、西沙比利、莫沙必利、普卡比利、伦扎必利等,在对抗FD方面表现出了良好的疗效,但安全记录难以令人完全放心。替加色罗会导致患者的心肌梗死、心源性猝死等心血管时间风险增加,西沙比利QT间期延长、室性心动过速及心脏骤停。FD病因和机制的复杂性和不明确性,患者临床症状的多样性和反复发作性,给FD一一种虽不会危及患者生命,但却严重影响患者生命质量的疾病的治疗带来一定的难度。在用药的安全性,对患者身心症状的整体调节以及复发率的改善方面,中医药治疗功能性胃肠病表现出了一定的优势。中药胃康宁以辛开苦降法为基本治法,治疗功能性消化不良效果明确,在临床上得到广泛应用。研究表明胃康宁可通过调节FD患者胃壁肌电活动和自主神经功能,从而起到治疗作用。但其作用的分子机制仍有待于进一步阐明。在我们前期的研究中,应用蛋白组学技术筛选FD大鼠正常组、模型组胃康宁给药组表达具有明显差异的蛋白点,经质谱鉴定,与正常组相比,其中VDAC1, GSTP1, Enolase, SOD2这4个蛋白在模型组表达量下降,胃康宁给药后表达量又上调。电压依赖性阴离子通道(Voltage-dependent anion channel 1, VDAC1),位于在线粒体上的结合位点的线粒体外膜蛋白,可以促进ATP的释放,从整体上调节细胞的能量代谢水平。烯醇化酶(Enolase)是糖酵解中的关键酶,可通过参与调节能量代谢来满足细胞生长所需能量。二者的状态在调节线粒体内外的物质代谢和能量代谢中发挥着非常重要的作用,与细胞的生存密切相关。SOD2,即超氧化物歧化酶2,主要分布在线粒体,是细胞内部重要的抗氧化系统组成,能够通过减少超氧阴离子等超氧化物,维持氧化抗氧化平衡。谷胱甘肽S-转移酶(Glutathione S-transferases, GSTs)作为Ⅱ相解毒酶,可清除体内有害物质、保护DNA及一些蛋白质免受损伤。(GSTs)和 Superoxide dismutases (SODs)是细胞内重要的抗氧化的酶系,能自发的对抗氧化应激(Oxidative Stress),具有帮助细胞抵御外来毒物与活性氧簇的毒害和损伤的效应。本实验将在细胞水平,对VDAC1、Enolase、SOD2、GSTP1这四个靶点进行进一步研究,探讨在胃黏膜上皮细胞中,胃康宁对GSTP2、SOD2、VDAC-1、 Enolase等蛋白的表达调控作用,及转录因子Nrf2对GSTP2、SOD2、VDAC-1、 Enolase等蛋白的调控机制,以及这种调控作用对细胞生物学功能的影响,进一步探索辛开苦降方胃康宁治疗FD的机制,为临床上FD的防治研究提供可借鉴的基础研究数据和新的思路。目的：在前期蛋白组学的基础上,观察胃康宁对能量代谢相关指标VDAC1、 Enolase以及细胞内部重要的抗氧化物质SOD2、GSTP1的影响,以及胃康宁通过转录因子Nrf2对GSTP1、SOD2、VDAC-1、Enolase等蛋白的调控机制,研究胃康宁对胃粘膜GES-1细胞氧化应激损伤的保护作用及其相关机制。方法：体外培养人胃GES-1细胞,MTT和CCk8法检测细胞增殖和活力,运用RT-PCR法和Western b lot法检测胃康宁在基因和蛋白水平对VDAC1、 Enolase、SOD2、GSTP1的影响。Western blotting检测评价Nrf2核内和胞质蛋白水平,激光共聚焦法观察Nrf2核转位情况,实时定量PCR检测Nrf2及其下游基因NQO1、HO-1、GCLM 和 GCLC mRNA表达水平。分别建立Nrf2过表达(OE Nrf2细胞)和沉默细胞株(shNrf2细胞),Western blotting检测评价Nrf2过表达和沉默效果；通过RT-PCR和Western blot实验观察胃康宁在Nrf2基因过表达和抑制表达时GSTP1、SOD2等蛋白的表达变化。通过细胞功能学实验,微量酶标法测定胃黏膜上皮GES-1细胞还原型谷胱甘肽(GSH)含量和丙二醛(MDA)含量,黄嘌呤氧化酶法(羟胺法WST-1法)测定超氧化物歧化酶(SOD)活性,分别检测正常阴性对照细胞(shMock细胞)及Nrf2沉默情况下细胞(shNrf2细胞)GSH、MDA含量和SOD活性,以及胃康宁分别对shMock细胞和shNrf2细胞GSH、MDA含量以及SOD活性的影响。结果：研究发现胃康宁在基因和蛋白水平上均可促进VDAC1、Enolase、 SOD2、GSTP1的表达(P<0.05)。胃康宁能显着诱导Nrf2核转位,其下游Ⅱ相解毒酶基因和抗氧化酶基因NQO1、GCLC、GCLM 和 HO-1 mRNA表达水平也显着增加(P<0.05),并且具有时间和浓度依赖性。Nrf2过表达可导致GES-1细胞中SOD2、GSTP1表达增高(P<0.05)；而当GES-1细胞Nrf2的表达被siRNA-Nrf2抑制后,胃康宁诱导SOD2和GSTP1基因mRNA和蛋白表达水平升高的能力也随之减弱(P<0.05)。正常GES-1细胞中,与空白组相比,胃康宁干预组MDA水平明显降低(P<0.05),SOD的活性上调(P<0.05),GSH含量显着升高(P<0.05)。在Nrf2沉默细胞中,胃康宁这种保护细胞抗氧化应激的能力则大大降低,并且shNrf20.05组与shMock 0.05组,shNrf20.3组与shMock 0.3组相比,MDA水平显着上升(P<0.05), SOD的活性以及GSH含量则均明显下调(P<0.05)。结论：1.胃康宁能促进胃黏膜上皮GES-1细胞能量代谢相关指标VDAC1、Enolase以及细胞内部重要的抗氧化物质SOD2、 GSTP1的表达。2.胃康宁能通过激活Nrf2、ARE通路,调节SOD2、GSTP1等蛋白的表达,以此调节细胞能量代谢水平,及抗氧化应激应答,以维持细胞能量代谢及氧化应激平衡,保护胃肠组织生物膜免受损伤,可能是中药胃康宁治疗功能性消化不良的作用机理之一。3.功能性消化不良患者胃组织氧化应激水平升高,可能是功能性消化不良发生、发展的环节之一。超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)是机体最重要的内源性抗氧化酶,还原型谷胱甘肽(Glutathione, GSH)是机体内最重要的非酶性抗氧化剂。胃康宁对内源性抗氧化剂的上调可能是其抗氧化作用的重要机制之一。(本文来源于《北京中医药大学》期刊2015-05-01）
林金锋[10]（2015）在《肠叁叶因子激活ERK1/2信号通路对胃粘膜上皮细胞的保护作用研究》一文中研究指出背景：胃酸、胃蛋白酶、药物、食物及应激等因素常导致胃粘膜上皮损伤,高效的胃粘膜上皮修复对维持胃粘膜上皮的结构和功能十分重要,胃粘膜上皮修复是以粘膜细胞增殖和迁移为基本步骤的复杂生物学过程。多种调节肽可调节胃粘膜上皮修复。肠叁叶因子(intestinal trefoil factor, ITF, trefoil factor 3,TFF3)是叁叶肽家族(trefoil factor family, TFFs)重要成员,可促进多种细胞系的增殖和迁移,在胃肠道粘膜修复中起重要作用。同时,ITF能对吲哚美辛、酒精、阿司匹林和应激等引起的胃粘膜上皮细胞损伤产生细胞保护作用。然而,对ITF介导的胃粘膜上皮细胞保护机制尚不完全清楚。激活下游信号通路可能是ITF发挥对胃粘膜保护作用的机制之一,ERK1/2(extracellular signal-regulated kinase1/2)信号通路是MAPK信号通路的重要组成部分,可促进多种细胞的增殖、迁移、分化和细胞存活。目的：探讨ITF对胃粘膜上皮细胞的增殖和迁移的作用,ITF对NS398(非甾体抗炎药)导致胃粘膜上皮细胞坏死和凋亡的影响,及ERK1/2信号通路在其中的作用。方法：体外培养人胃粘膜上皮细胞(GES-1),不同浓度ITF及U0126(ERK1/2信号通路抑制剂)在不同时间点处理GES-1细胞,用CCK-8实验检测GES-1细胞增殖,用细胞迁移实验观察GES-1细胞迁移,用蛋白免疫印迹实验检测GES-1细胞ERK1/2和pERK1/2的表达水平；以ITF、U0126及NS398处理GES-1细胞,FDA-PI染色观察细胞坏死情况,流式细胞检测细胞凋亡情况。计量资料用均数±标准差(SD)表示。用SPSS软件进行统计分析,均数比较采用单因素方差(SNK法)分析。以P<0.05(*)和P<0.01(**)为差异有统计学意义。结果：1、ITF(100 ng/ml和500 ng/m1)促进了GES-1细胞的增殖和迁移；2、ITF能激活ERK1/2信号通路,从ITF (150 ng/ml)作用后的5 min开始,pERK1/2表达水平达到峰值,并持续高表达约10min; 3、ITF通过激活ERK1/2信号通路促进GES-1细胞增殖和迁移；4、ITF通过激活ERK1/2信号通路减弱NS398导致的GES-1细胞坏死和凋亡。结论：ITF通过激活ERK1/2信号通路促进了GES-1细胞的增殖、迁移和存活。ITF激活ERK1/2信号通路或许能成为胃粘膜上皮修复的新的治疗策略。(本文来源于《南京大学》期刊2015-05-01）
人胃粘膜上皮细胞论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文旨在从Wnt/β-catenin信号通路的角度探讨单功能烷化剂MNNG诱导人胃粘膜上皮GES-1细胞损伤的机制。用MNNG(2×10-5 mol/L)处理GES-1细胞24 h,处理后第3天用倒置显微镜对GES-1细胞形态进行观察,用MTT法检测GES-1细胞活力,用流式细胞术检测GES-1细胞凋亡和周期变化,用q PCR检测GES-1细胞中β-catenin、GSK-3β、c-Met和MMP7m RNA表达情况,用Western blot检测β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β和c-Met蛋白表达情况。结果显示:MNNG能够明显损伤GES-1细胞,细胞形态变为不规则的长梭形;MNNG能够诱导GES-1细胞凋亡,明显阻滞细胞周期进程;MNNG能够上调β-catenin、GSK-3β、c-Met和MMP7 m RNA表达水平,并上调β-catenin、GSK-3β和p-GSK-3β蛋白表达水平。上述结果提示,MNNG对GES-1细胞的损伤可能与Wnt/β-catenin信号通路的激活相关,这为胃粘膜损伤的细胞模型研究提供了参考。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
人胃粘膜上皮细胞论文参考文献
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[9].常玉娟.基于Nrf2/ARE通路辛开苦降方胃康宁对人胃粘膜上皮细胞SOD2、GSTP1相关调控机制的研究[D].北京中医药大学.2015
[10].林金锋.肠叁叶因子激活ERK1/2信号通路对胃粘膜上皮细胞的保护作用研究[D].南京大学.2015
标签：SFRP1; 失巢凋亡; RNA干扰; Wnt; β-catenin信号通路;