OEPR法构建mETX-mCPA表达质粒及其重组蛋白的免疫效果评价

论文摘要

为了确定产气荚膜梭菌ε毒素（ETX）和α毒素（CPA）无毒突变体作为亚单位疫苗同时预防D型和A型产气荚膜梭菌病的免疫效果,试验用点突变结合OEPR法构建重组质粒pET32a-mETX-mCPA。将阳性重组质粒转入E.coli BL21（DE3）中,以预先添加乳糖的自诱导培养基表达目的蛋白。经SDS-PAGE分析,其表达的蛋白相对分子质量约为92 000,与预期值一致。Western blot检测结果表明,重组蛋白可被A型产气荚膜梭菌阳性血清所识别。致死性试验结果表明,重组蛋白不致死小鼠。以铝胶为佐剂将重组蛋白免疫家兔,二免血清0.1 mL可分别中和3个小鼠MLD的A型毒素和100个小鼠MLD的D型毒素。本研究用OEPR法成功构建了无毒突变体pET32a-mETX-mCPA质粒,获得的重组蛋白在家兔上显示出良好的免疫效果,为研发A、D型产气荚膜梭菌二价亚单位疫苗奠定理论基础。

论文目录

1 材料与方法

1.1 质粒、菌种

1.2 毒素、血清和培养基

1.3 主要试剂

1.4 试验用动物

1.5 主要仪器

1.6 引物设计与合成

1.7 含载体同源臂的mCPA毒素基因的扩增

1.8 pET32a-cpeH106P质粒的构建

1.9 OEPR法构建pET32a-mETX-mCPA质粒

1.10 重组菌的诱导表达与Western blot检测

1.11 致死性试验

1.12 重组蛋白的免疫血清效价测定

2 结果

2.1 含载体同源臂的mCPA毒素基因的扩增

2.2 pET32a-cpeH106P质粒的构建

2.3 pET32a-mETX-mCPA质粒的构建

2.4 重组蛋白在大肠杆菌中的表达和Western blot

2.5 致死性试验

2.6 重组疫苗在家兔上的免疫血清效价测定

3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 彭小兵,彭国瑞,李旭妮,董令赢,冯丽芳,蒋玉文

关键词: 产气荚膜梭菌,免疫效果,家兔

来源: 中国兽医学报 2019年08期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 中国兽医药品监察所,北京中海生物科技有限公司

基金: 国家重点研发计划基金资助项目(2017YFD0500905)

分类号: S852.4

DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.08.14

页码: 1500-1505

总页数: 6

文件大小: 1778K

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