导读:本文包含了牵丝蛋白论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:蛋白,基因,蜘蛛,细毛羊,转基因,毛囊,抗体。
牵丝蛋白论文文献综述
王海涛,孟凡华,房君,周欢敏[1]（2014）在《拟蜘蛛牵丝蛋白基因细毛羊毛囊特异表达载体的构建及其转基因细胞株的筛选》一文中研究指出试验旨在获得具有毛囊表达特性的转蜘蛛牵丝蛋白基因细胞株。根据GenBank上发表的棒络新妇属蜘蛛的cDNA片段合成拟蜘蛛牵丝蛋白基因单体S,加倍后连入pEGFP-N1框架载体以构建真核表达载体pK-2S,转染新疆美利奴细毛羊皮肤成纤维细胞后筛选单克隆,并通过PCR在DNA、RNA水平检测阳性克隆。基因合成后测序结果显示序列正确,酶切得到正确目的条带,筛选出阳性克隆并且可以在基因组及cDNA上扩增出目的片段。本研究成功将蜘蛛牵丝蛋白基因转入新疆美利奴细毛羊细胞,并在RNA水平表达,为培育毛囊特异表达蜘蛛牵丝蛋白基因并具有更高机械性能羊毛的新型细毛羊品种奠定基础。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2014年06期）
王海涛[2]（2014）在《拟蜘蛛牵丝蛋白基因细毛羊毛囊特异表达载体的构建及其转基因细胞系的建立》一文中研究指出蜘蛛丝是自然界具有最优异力学性能的生物纤维,主要成分为蛛丝蛋白,但是难以大量生产或收集。利用基因工程手段可实现蛛丝蛋白基因转入异源宿主中并表达。本实验通过脂质体转染法将蜘蛛牵丝蛋白基因真核表达载体pK-2S转入美利奴细毛羊胎儿皮肤成纤维细胞中,筛选稳定转入蛛丝蛋白基因的细胞株,通过DNA,RNA水平的检测初步鉴定基因是否转入细胞并表达,为培育能生产含有蛛丝蛋白羊毛的绵羊新品种奠定基础。主要结果如下：1.以已发表的棒络新妇蛛cDNA片段为模板,人工合成拟蜘蛛牵丝蛋白基因单体(S),并获得二聚体(2S)。2.建立了新疆美利奴细毛羊胎儿成纤维细胞系,细胞形态观察显示细胞形态良好,生长曲线表明细胞增殖状态较好,核型分析正常。3.克隆了绵羊毛囊特异性表达启动子Kap6.1,构建表达载体pKap-EGFP并转入细毛羊胎儿皮肤成纤维细胞中并表达绿色荧光蛋白,表明启动子具有表达活性。4.以pEGFP-N1为框架,将2S与绵羊毛囊特异性启动子Kap6.1相连,构建毛囊特异表达载体pK-2S。5.质粒pK-2S线性化后,转染新疆美利奴细毛羊胎儿皮肤成纤维细胞,并通过600μg/mL G418筛选单克隆。提取单克隆基因组进行PCR验证,表明了部分克隆转入蛛丝蛋白基因,对部分阳性克隆提取细胞总RNA进行RT-PCR,并以cDNA为模板进行PCR验证,表明蛛丝蛋白在RNA水平表达。(本文来源于《内蒙古农业大学》期刊2014-06-01）
房君[3]（2014）在《拟蜘蛛牵丝蛋白基因的原核表达及多克隆抗体制备》一文中研究指出蜘蛛牵丝因其优异的机械性能越来越多地作为材料应用于医疗、建筑等领域。但天然蛛丝产量低,利用原核生物反应器生产重组蛛丝是目前人工获得大量蛛丝的有效手段。本研究用拟蜘蛛牵丝蛋白基因单体(S)和二聚体(2S)分别构建了原核表达载体pGEX-S和pGEX-2S,转化大肠杆菌并诱导其表达,用产量多的重组蛋白为抗原,免疫小白鼠以制备抗血清。通过此方法可以探索建立适宜的重组蛛丝原核表达体系,也为检测其在真核表达提供材料。主要研究结果如下：1.拟蜘蛛牵丝蛋白基因序列的合成：根据棒络新妇蛛的cDNA片段人工合成拟蜘蛛牵丝蛋白基因单体(S),并构建了二聚体(2S)。2.原核表达载体的构建：基因单体(S)合成后与克隆载体pUC57相连,得到重组质粒pUC57-S再通过酶切、连接、转化等合成二聚体(2S)；分别将S和2S片段与表达载体pGEX-2T相连,获得可用于原核表达的重组质粒pGEX-S和pGEX-2S。3.重组蛋白的表达和纯化：将重组质粒pGEX-S和pGEX-2S转化入表达型感受态细胞BL21中,并对菌株的表达条件进行了摸索,发现0.8mmol/l的IPTG诱导4小时为最好。提取总蛋白进行Western Blot,发现S-GST的表达量明显高于2S-GST。利用亲和层析法纯化重组蛋白S-GST,用于多克隆抗体的制备。4.拟蜘蛛牵丝蛋白基因单体(S)多克隆抗体的制备：取适量纯化后S-GST重组蛋白与佐剂混合乳化,利用皮下多点注射的方法免疫8只CD I小白鼠,免疫结束后经ELISA检测,发现其中的两只小鼠的抗血清浓度较高,可用于后续实验。(本文来源于《内蒙古农业大学》期刊2014-06-01）
高晋芳[4]（2014）在《转拟蜘蛛牵丝蛋白基因细毛羊重组胚的构建、移植及转基因羊的鉴定》一文中研究指出蜘蛛牵丝是由蜘蛛体内一对主壶腹腺合成的天然蛋白质纤维,被誉为“生物钢”,具有广泛的应用前景。本研究主要目的是通过体细胞核移植手段制备被毛表达蛛丝蛋白基因的新疆美利奴细毛羊,有效改善羊毛品质,对提高细毛羊毛纤维的商业价值具有非常重要的意义。本文采用体细胞核移植技术,以转拟蜘蛛牵丝蛋白基因细毛羊胎儿皮肤成纤维细胞为核供体,去核卵母细胞为受体,制备转基因克隆重组胚716枚,取发育到桑葚期的胚胎进行RT-PCR检测显示外源基因已表达；胚胎移植受体羊44只,受孕12只,出生7只。对出生的转拟蜘蛛牵丝蛋白基因细毛羊在DNA、RNA水平进行检测,结果表明目的基因成功整合到细毛羊宿主基因组中并得以表达；检测转基因和非转基因细毛羊羊毛纤维韧性,结果表明,转基因细毛羊羊毛的拉力及拉伸度均高于非转基因细毛羊。(本文来源于《内蒙古农业大学》期刊2014-06-01）
房君,孟凡华,王海涛,周欢敏[5]（2013）在《转拟蜘蛛牵丝蛋白基因新疆美利奴细毛羊成纤维细胞系的建立及初步鉴定》一文中研究指出[目的]建立含有拟蜘蛛牵丝蛋白基因的新疆美利奴细毛羊成纤维细胞系。[方法]采用脂质体转染,将表达拟蜘蛛牵丝基因的质粒pKap-EGFP4S转入新疆美利奴细毛羊成纤维细胞,通过G418毒性筛选获得阳性细胞系,并采用PCR、RT-PCR检测重组细胞中的目的基因表达。[结果]对体外分离培养的成纤维细胞观察表明细胞形态均为长梭形、活性良好(细胞生长曲线呈S型)、染色体数目为2n=54;通过G418筛选出共43株单克隆细胞系,经PCR鉴定拟蜘蛛牵丝蛋白基因随机整合的细胞系15株,其中挑选4个阳性细胞系经过RT-PCR检测目的基因已转录为mRNA。[结论]成功建立了拟蜘蛛牵丝蛋白基因的新疆美利奴细毛羊成纤维细胞系,为进一步通过体细胞核移植技术制备被毛含转拟蜘蛛牵丝蛋白基因克隆羊奠定基础。(本文来源于《安徽农业科学》期刊2013年22期）
孟凡华,房君,王海涛,邢燕平,齐昱[6]（2013）在《拟蜘蛛牵丝蛋白基因单体(S)原核表达及多克隆抗体制备》一文中研究指出利用原核表达获得的拟蜘蛛牵丝蛋白制备多克隆抗体,将为我们在真核水平检测其表达情况奠定基础。以质粒pGEX-2T为骨架载体,在其多克隆位点处连接人工合成的拟蛛丝蛋白基因单体(S),构建含有GST标签的融合蛋白原核表达载体pGEX-S;利用IPTG诱导重组质粒pGEX-S在大肠杆菌感受态细胞BL21中表达,并利用GST标签亲和纯化重组蛋白,获得的S-GST蛋白与佐剂混合后,采用多点皮下免疫注射8只健康的CDⅠ小白鼠,免疫期结束后收集抗血清进行ELISA检测。序列分析后,确定原核表达载体pGEX-S编码正确;诱导表达后,Western blot检测显示在41 kD处有重组蛋白条带出现,与我们预期的结果相符;抗血清Elisa检测显示有2只小鼠A和F抗血清效价较高。采用原核表达生产的拟蜘蛛牵丝蛋白成功制备了多克隆抗体。(本文来源于《生物技术通报》期刊2013年03期）
杜文华[7]（2012）在《棒络新妇蜘蛛拖牵丝蛋白基因编码序列的克隆及重组表达》一文中研究指出蜘蛛丝既质轻又坚韧,是一种集强固性与柔韧性于一体的综合性能优良的天然蛋白质纤维,作为高性能材料在工业、军事如降落伞绳索、轻质吸能的军事防护服、航天用复合材料等方面有重要的应用价值。同时蜘蛛丝具有良好的生物相容性和可降解性,在生物医学领域如手术缝合材料、人工肌腱、药物运转载体、组织支架等方面极具潜在开发价值。但是由于天然蜘蛛丝产量少而且无法对蜘蛛进行规模饲养,通过基因工程技术来大量获取蜘蛛丝是人们研究和解决纤维材料来源问题的一条途径。在基因工程中微生物表达系统有着生长快、产量高、周期短、培养条件简单、遗传背景清楚且开发有多种表达载体、菌株和纯化系统的优点,天然的或者人工合成的蜘蛛丝蛋白最初都在大肠杆菌、酵母等微生物表达系统中进行表达,现已开发出多种蜘蛛丝蛋白表达系统。由于对蜘蛛丝蛋白后期组装、纺丝机理等相关研究相对滞后,目前的研究还未能把获得的蜘蛛丝蛋白形成力学性能理想的丝纤维。家蚕是被人类驯化并得到充分利用的泌丝昆虫。家蚕丝腺具有强大的合成和分泌蛋白的能力,其分泌的蚕丝和蜘蛛丝一样富含甘氨酸和丙氨酸。利用家蚕丝腺高效的蛋白质表达系统表达蜘蛛丝蛋白,并通过其天然的纺丝系统将重组蛛丝蛋白分泌并纺丝,可以轻松解决其它表达系统存在的后期纺丝困难的问题,是外源表达蜘蛛丝蛋白获得高性能丝纤维材料最有希望的表达系统。本研究通过PCR方法从络新妇属棒络新妇蜘蛛(Nephila clavata)基因组DNA中克隆获得拖牵丝蛋白基因的部分序列,对该基因编码的蛋白质进行预测分析表明其氨基酸存在蜘蛛拖牵丝蛋白典型(A)n、(GGX)n模序,螺旋结构占优势,具有蜘蛛大壶状腺丝蛋白结构域。将克隆基因与载体pET-28a(+)连接构建原核表达载体pET28-NcMaSp,在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中进行拖牵丝蛋白的表达,SDS-PAGE显示表达分子量与预期一致约为27kD,表达的蛋白具可溶性部分以包涵体形式存在。在此基础上通过原核表达载体自身携带的His标签,对表达的重组蜘蛛丝蛋白进行通过镍柱亲和层析进行纯化,为下一步的真核表达做好准备工作。选用家蚕丝腺表达系统进行蜘蛛拖牵丝蛋白基因的真核表达。从家蚕品种大造(P50)中克隆了serl基因启动子、serl基因3’端终止子,人工合成serl基因信号肽编码序列。serl基因启动子序列分析表明,家蚕serl基因启动子的TATA框保守序列为TATAAAA(-24--30),CAAT框位于-112-115处。对serl基因信号肽编码序列与拖牵丝蛋白编码序列形成的融合蛋白进行信号肽剪切位点预测,显示信号肽剪切位点位于20-21位氨基酸。在序列分析的基础上构建重组质粒pFFa[MCS-ser1-signal-NcMaSp1-ser3'],将该重组质粒的ser1-signa1-NcMaSp1-ser3'融合片段与携带报告基因的piggyBac[3xp3-DsRed]转座载体融合构建丝腺特异表达基因ser1启动子驱动的转基因表达载体piggyBac[ser1-signa1-NcMaSp1-ser3',3xp3-DsRed],并进行了转基因注射。为后续分析该转基因家蚕茧丝特性,定向改造转蜘蛛拖牵丝基因家蚕蚕丝的结构与性能,开发高性能丝纤维材料的研究奠定基础。(本文来源于《西南大学》期刊2012-05-10）
刘丹梅,王芬,李文利[8]（2011）在《蜘蛛拖牵丝蛋白基因的克隆与表达》一文中研究指出蜘蛛丝具有极高的强度和韧度,工业和医学应用价值很高,但由于蜘蛛的不可驯养性使其应用受到限制。因此,本文尝试利用基因工程的方法获得蛛丝蛋白的表达。我们利用巢式PCR技术从大腹圆蛛Araneus ventricosus基因组中克隆了长度为837bp的拖牵丝蛋白基因(ASP),并分别将其构建至原核表达载体pGEX-6p-1和真核表达载体pGFP-N2上,分别命名为pASG和pASN。pASG在大肠杆菌中16℃下24h诱导表达后,经蛋白质印迹证明成功地表达了GST-ASP融合蛋白;pASN转染昆虫sf9细胞48h后观察到了绿色荧光蛋白GFP的表达,表明ASP基因在大肠杆菌和真核细胞中分别得到了正确表达。本研究为利用基因工程的方法开发蛛丝蛋白的生产途径提供了有益的尝试。(本文来源于《基因组学与应用生物学》期刊2011年01期）
许红韬,樊宝良,曹更生,胡晓湘,李宁[9]（2006）在《在大肠杆菌内高效表达大分子量拟蜘蛛牵丝蛋白》一文中研究指出依据已报道的蜘蛛(Nephilaclavipes)牵丝蛋白部分cDNA序列,设计合成两种不同结构的拟蜘蛛牵丝蛋白基因单体,大小分别为360和390bp。多聚化得到8倍体和16倍体后,克隆到表达载体pET-30a,得到4种表达载体,转化大肠杆菌(Escherichiacoli)BL21(DE3)诱导表达。用自制的抗蜘蛛牵丝蛋白血清Westernblot检测,表达产物呈梯度排列,主带与预计大小一致。蜘蛛牵丝蛋白表达量最高为800mg/L。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2006年04期）
王昌河,蒋平,刘辉芬,吴灵芝,郭聪[10]（2006）在《转蜘蛛拖牵丝蛋白基因家蚕蚕丝氨基酸组成及其机械性能》一文中研究指出将以绿色荧光蛋白基因为报告基因、含有人工合成的1.6 kb的蜘蛛拖牵丝蛋白基因及转座子pig-gyBac的转基因载体成功导入减秋无滞育家蚕受精卵,得到转蜘蛛拖牵丝蛋白基因家蚕及绿色荧光茧。对转基因家蚕与对照家蚕丝素蛋白进行了氨基酸组成分析,结果表明转基因蚕茧丝素蛋白甘氨酸和丙氨酸的百分含量分别增加了1.65%和1.80%(平均值);对其生丝的机械性能进行了测试研究,结果表明转基因蚕茧生丝的伸长率降低,断裂强度和初始模量增加,且差异均显着,与理论预期结果吻合。结果表明转基因家蚕蚕丝的机械性能一定程度上得到了提高。(本文来源于《四川动物》期刊2006年03期）
牵丝蛋白论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
蜘蛛丝是自然界具有最优异力学性能的生物纤维,主要成分为蛛丝蛋白,但是难以大量生产或收集。利用基因工程手段可实现蛛丝蛋白基因转入异源宿主中并表达。本实验通过脂质体转染法将蜘蛛牵丝蛋白基因真核表达载体pK-2S转入美利奴细毛羊胎儿皮肤成纤维细胞中,筛选稳定转入蛛丝蛋白基因的细胞株,通过DNA,RNA水平的检测初步鉴定基因是否转入细胞并表达,为培育能生产含有蛛丝蛋白羊毛的绵羊新品种奠定基础。主要结果如下：1.以已发表的棒络新妇蛛cDNA片段为模板,人工合成拟蜘蛛牵丝蛋白基因单体(S),并获得二聚体(2S)。2.建立了新疆美利奴细毛羊胎儿成纤维细胞系,细胞形态观察显示细胞形态良好,生长曲线表明细胞增殖状态较好,核型分析正常。3.克隆了绵羊毛囊特异性表达启动子Kap6.1,构建表达载体pKap-EGFP并转入细毛羊胎儿皮肤成纤维细胞中并表达绿色荧光蛋白,表明启动子具有表达活性。4.以pEGFP-N1为框架,将2S与绵羊毛囊特异性启动子Kap6.1相连,构建毛囊特异表达载体pK-2S。5.质粒pK-2S线性化后,转染新疆美利奴细毛羊胎儿皮肤成纤维细胞,并通过600μg/mL G418筛选单克隆。提取单克隆基因组进行PCR验证,表明了部分克隆转入蛛丝蛋白基因,对部分阳性克隆提取细胞总RNA进行RT-PCR,并以cDNA为模板进行PCR验证,表明蛛丝蛋白在RNA水平表达。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
牵丝蛋白论文参考文献
[1].王海涛,孟凡华,房君,周欢敏.拟蜘蛛牵丝蛋白基因细毛羊毛囊特异表达载体的构建及其转基因细胞株的筛选[J].中国畜牧兽医.2014
[2].王海涛.拟蜘蛛牵丝蛋白基因细毛羊毛囊特异表达载体的构建及其转基因细胞系的建立[D].内蒙古农业大学.2014
[3].房君.拟蜘蛛牵丝蛋白基因的原核表达及多克隆抗体制备[D].内蒙古农业大学.2014
[4].高晋芳.转拟蜘蛛牵丝蛋白基因细毛羊重组胚的构建、移植及转基因羊的鉴定[D].内蒙古农业大学.2014
[5].房君,孟凡华,王海涛,周欢敏.转拟蜘蛛牵丝蛋白基因新疆美利奴细毛羊成纤维细胞系的建立及初步鉴定[J].安徽农业科学.2013
[6].孟凡华,房君,王海涛,邢燕平,齐昱.拟蜘蛛牵丝蛋白基因单体(S)原核表达及多克隆抗体制备[J].生物技术通报.2013
[7].杜文华.棒络新妇蜘蛛拖牵丝蛋白基因编码序列的克隆及重组表达[D].西南大学.2012
[8].刘丹梅,王芬,李文利.蜘蛛拖牵丝蛋白基因的克隆与表达[J].基因组学与应用生物学.2011
[9].许红韬,樊宝良,曹更生,胡晓湘,李宁.在大肠杆菌内高效表达大分子量拟蜘蛛牵丝蛋白[J].农业生物技术学报.2006
[10].王昌河,蒋平,刘辉芬,吴灵芝,郭聪.转蜘蛛拖牵丝蛋白基因家蚕蚕丝氨基酸组成及其机械性能[J].四川动物.2006
论文知识图
