水牛KDM4D基因克隆分析及其真核表达载体的构建

论文摘要

旨在克隆水牛组蛋白去甲基化酶KDM4D （lysine K-specific demethylase 4D）基因,对其进行生物信息学分析,并构建KDM4D基因的真核表达载体,为研究KDM4D基因在水牛体细胞核移植（somatic cell nuclear transfer,SCNT）胚胎发育中的作用奠定基础。试验从水牛睾丸组织中提取总RNA,反转录cDNA后, RT-PCR技术克隆KDM4D基因片段,并运用生物信息学软件对序列进行分析;随后将KDM4D基因片段连接至真核表达载体pEGFP-C1,再把重组质粒转染进HEK293T细胞。结果表明,克隆所得的水牛KDM4D基因片段编码区全长1 155 bp,共编码384个氨基酸。水牛KDM4D基因与黄牛、山羊、绵羊、犬、猫、猪、人、小鼠、大鼠的同源性分别为98.4%,96.6%,96.3%,84.9%,84.1%,81.4%,80.4%,77.4%,77.3%。多重比较和进化树分析结果显示,KDM4D基因在不同物种及生物进化中具有较高的保守性。蛋白结构域分析显示,克隆所得的KDM4D蛋白结构特殊,只具有1个JmjN （Jumonji N）和1个JmjC （jumonji C）结构域,与KDM4家族其他成员相比缺少PHD （plant homeodomain）和Tud （tudor）功能域。KDM4D蛋白质三级结构预测结果显示,水牛、黄牛和人3种物种间具有较高的相似性。转染结果显示,构建的重组质粒可以在HEK293T细胞中表达。本试验成功克隆水牛KDM4D基因,对其进行生物信息学分析,构建了真核表达载体pEGFP-C1-KDM4D,并在HEK293T细胞中成功表达。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 俸云,赵鑫,许洁,余庆,沈朋雷,王露露,吴飞,石德顺,陆凤花

关键词: 水牛,基因,基因克隆,生物信息学分析,载体构建

来源: 中国兽医学报 2019年10期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 广西大学亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室

基金: 国家高技术研究发展计划“863”资助项目(2011AA100607),国家自然科学基金资助项目(31560633,31760666)

分类号: Q813;S823.83

DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.10.29

页码: 2067-2074

总页数: 8

文件大小: 3950K

下载量: 131

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标签：水牛论文;  基因论文;  基因克隆论文;  生物信息学分析论文;  载体构建论文;