论文摘要
目的·探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ1（peroxisome proliferator activated receptorγ1,PPARγ1）的SUMO化修饰在白介素4（interleukin-4,IL-4）诱导巨噬细胞M2极化过程中的作用和机制。方法·在HEK293T细胞中共转染FLAG-PPARγ1-WT/突变体质粒、HA-SUMO1质粒,使用标签FLAG及HA的抗体分别进行免疫共沉淀后进行蛋白质印迹分析,确认PPARγ1的SUMO化修饰和修饰位点。过表达FLAG-PPARγ1-WT、HA-SUMO1及野生型RGS-SENP1以及去SUMO化修饰酶活缺失的突变体RGSSENP1mut,证明SENP1是PPARγ1的去SUMO化修饰酶。用IL-4刺激小鼠巨噬细胞系RAW264.7和体外分离的原代小鼠腹腔巨噬细胞,使其向M2型活化,使用PPARγ及SUMO1的抗体进行免疫共沉淀,明确内源性PPARγ1的SUMO化修饰在M2极化过程中的变化。采用实时荧光定量聚合酶链反应检测IL-4刺激后的PPARγ1野生型及突变型稳转细胞系RAW264.7中M2相关基因的m RNA水平。用染色质免疫共沉淀实验比较PPARγ1 WT及突变体结合于精氨酸酶Ⅰ（arginaseⅠ,Arg1）启动子的能力。结果·PPARγ1蛋白第77位赖氨酸（K77R）能被SUMO化修饰,并能被SENP1去SUMO化。在IL-4诱导巨噬细胞M2型极化时,PPARγ1的SUMO化水平降低。稳定表达SUMO化位点突变体PPARγ1-K77R的RAW264.7细胞,Arg1 mRNA水平升高;PPARγ1-K77R与Arg1的启动子结合能力增强,促进Arg1表达。结论·PPARγ1通过去SUMO化促进下游Arg1基因的表达从而参与调控巨噬细胞M2型极化。
论文目录
文章来源
类型: 期刊论文
作者: 王秀芝,左勇
关键词: 化修饰,巨噬细胞,极化
来源: 上海交通大学学报(医学版) 2019年12期
年度: 2019
分类: 医药卫生科技
专业: 基础医学
单位: 上海交通大学基础医学院生物化学与分子细胞生物学系
分类号: R392
页码: 1402-1408
总页数: 7
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