拟南芥CKI1基因上游转录调控因子筛选及鉴定

拟南芥CKI1基因上游转录调控因子筛选及鉴定

论文摘要

拟南芥CKI1(cytokininindependent 1)是双组分信号系统中一个组氨酸激酶蛋白,通过作用于下游组氨酸磷酸转移蛋白激活双组分信号通路,在调控胚囊中央细胞命运分化和发育过程中具有重要作用。然而目前对于CKI1基因上游转录调控因子还知之甚少。本研究分析了不同长度的CKI1启动子在拟南芥胚囊中的活性,并利用酵母单杂交技术对CKI1上游转录调控因子进行了筛选和鉴定。结果表明,位于内含子区域中的F5/R2片段表现出与CKI1启动子全长相一致的表达活性。进一步选取3个串联重复的F5/R2片段用于构建诱饵表达载体,同时,选取拟南芥雌蕊构建cDNA文库,通过酵母单杂交筛选获得226个阳性克隆。去除低质量及冗余重复的序列后共获得66条可读序列,其中8条序列对应的基因编码具有DNA结合功能的蛋白。研究结果为进一步揭示CKI1基因的转录调控机制提供了重要参考信息。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •   1.2 不同片段长度CKI1启动子载体的构建
  •   1.3 转基因株系的筛选和观察
  •   1.4 诱饵表达载体的构建与酵母遗传转化
  •   1.5 抑制诱饵菌株生长的最低AbA浓度的筛选
  •   1.6 酵母单杂交文库的构建与筛选
  •   1.7 阳性克隆鉴定和测序
  • 2 结果与分析
  •   2.1 不同长度的CKI1基因启动子活性分析
  •   2.2 酵母单杂交文库的构建和筛选
  •     2.2.1 诱饵表达载体的构建
  •     2.2.2 酵母单杂交文库的建立和筛选
  •     2.2.3 目的序列的基因功能注释
  • 3 讨论
  •   3.1 CKI1基因的内含子具有启动子功能
  •   3.2 CKI1基因上游转录调控因子的候选基因
  •   3.3 转录调控因子基因的高通量筛选
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 刘振宁,袁黎,Venkatesan Sundaresan,余小林

    关键词: 转录调控,酵母单杂交,拟南芥

    来源: 遗传 2019年05期

    年度: 2019

    分类: 基础科学

    专业: 生物学

    单位: 临沂大学农林科学学院,加州大学戴维斯分校植物科学系加利福尼亚州戴维斯95616,浙江大学农业与生物技术学院,西北农林科技大学园艺学院

    基金: 国家自然科学基金项目(编号:31700272,31872110,31460521),山东省自然科学基金项目(编号:ZR2017PC012),浙江省农业新品种选育重大科技专项重点项目子课题(编号:2016C02051-6-1)~~

    分类号: Q943.2

    DOI: 10.16288/j.yczz.18-314

    页码: 430-438

    总页数: 9

    文件大小: 2156K

    下载量: 577

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