CREBBP-m6A报告系统的建立和验证

论文摘要

N6-甲基腺嘌呤（N6-methyladenosine,m6A）是真核生物信使RNA（Messenger RNA,mRNA）上最丰富的一种化学修饰,受到甲基转移酶和去甲基化酶的调控而呈现动态变化的状态。m6A识别蛋白可识别并特异性结合到m6A修饰位点,调控mRNA的剪接、降解和翻译进程,从而调节基因的表达。选择包含3个m6A修饰位点的CREBBP基因3’UTR序列连接到红色荧光mCherry序列的下游,将得到的mCherry-CREBBP 3’UTR片段插入到pCD513B-CMV载体的EcoRⅠ和BamHⅠ酶切位点之间,得到CREBPP-m6A报告质粒pCMV-mCherry-CREBBP,并在GC-1细胞和293T细胞中验证了CREBBP-m6A报告质粒的功能,发现红色荧光强度和m6A水平呈负相关。研究结果提示,可将pCMV-mCherry-CREBBP质粒转入靶细胞,通过红色荧光的强度来检测m6A修饰的变化。

论文目录

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 郭佳银,黄瑫,曾文先

关键词: 甲基腺嘌呤,修饰

来源: 家畜生态学报 2019年03期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学

单位: 西北农林科技大学动物科技学院

基金: 国家自然科学基金项目(31572401)

分类号: Q78

页码: 10-16

总页数: 7

文件大小: 385K

下载量: 51

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