导读:本文包含了表达盒论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:基因,转基因,头孢菌素,蛋白,瘟病,噬菌体,籽粒。
表达盒论文文献综述
刘金泽,刘云惠,余子豪,李永霞,王明晓[1]（2018）在《一种用于Red同源重组的正反筛选表达盒的构建及其反向筛选性能分析》一文中研究指出为建立能够应用于大肠杆菌基因无痕敲除的方法,本研究分别从大肠杆菌TG1基因组和pKD13质粒中扩增出链霉素敏感基因(str~S,即rpsL基因)和卡那抗性基因(kan~R),采用重迭延伸PCR方法将str~S基因和kan~R基因拼接,并将拼接片段分别克隆于pMD18-T和pBAD33载体中,再以重组载体为模板,以带有flgK基因同源臂的引物扩增获得Placstr~S-kan~R打靶片段和Parastr~S-kan~R打靶片段,然后结合Red重组技术构建了相应的flgK基因敲除菌株placSK-ΔflgK/TOP10和paraSK-ΔflgK/TOP10,并通过链霉素最小抑菌浓度(MIC)试验检测两种筛选系统的反向筛选性能。结果显示,野生型TOP10菌株、placSK-ΔflgK/TOP10菌株和paraSK-ΔflgK/TOP10菌株的链霉素MIC值分别为8 000μg/mL、2 000μg/mL和500μg/mL。表明采用两种筛选系统构建的敲除菌株均有一定的链霉素敏感表型,具有反向筛选的能力,但含Para启动子的筛选系统反向筛选性能更好。本研究建立了可用于大肠杆菌Red重组技术的反向筛选系统,为获得更有效的Red重组筛选工具提供了依据。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2018年10期）
刘玉万[2]（2017）在《一种增强基因表达的自激活GAL4/UAS系统表达盒的建立》一文中研究指出基因导入系统较低的转染效率限制了基因转移技术的治疗效用,尽管病毒介导的载体系统可以具备相对较高的基因表达水平,但它在基因治疗中插入或整合到染色体的位置是随机的,有引起插入突变及细胞恶性转化的潜在危险;非病毒载体系统的免疫原性较低,安全可靠,并适于大规模生产,在外源基因短暂表达中具有优势,并广泛应用于各种DNA疫苗的研制,它的不足是体内转导效率低,靶向性差,基因表达时间短。综上,采用生物安全性较好的非病毒方式,如何增强外源基因表达,进而延长基因治疗的时间,受到人们越来越多的关注。另一方面,重组蛋白表达技术是研究蛋白质结构、功能,及筛选靶向药物的有力工具,在基础科学以及医药学领域发挥了重要作用。截至目前,人们已经研究开发出多种原核和真核表达系统用以生产重组蛋白。原核表达系统方便,便宜、周期短,但有些蛋白折迭不好,不带有糖基化等修饰;而哺乳动物表达系统——作为典型的真核表达系统,主要用于制备分泌的重组蛋白。相较于其他表达系统的宿主,它具有最出色的蛋白质折迭和二硫键形成能力,表达出的蛋白最接近天然蛋白,有利于蛋白结构和功能研究,但也存在着产量低,培养成本较高的劣势。因此,人们期望发明一种简单高效的瞬时表达系统,提高重组蛋白的生产效率。此外,在利用重组酿酒酵母呈递外源性DNA或RNA产生特异性抗体和杀伤性T细胞过程中,重组DNA疫苗引起特异性免疫反应可能较慢,产生特异性抗体的剂量较小。Gal4/UAS系统是生物体中用于研究基因表达和功能的一种生物化学方法,本实验中我们在CMV表达载体的基础上增加一种自动激活的Gal4/UAS表达盒从而增强基因表达。首先,Gal4/UAS系统中2个上游激活序列(2UAS),VP64,Gal4AD和VP64-p65-Rta叁种DNA激活域进行比较,表达载体pRS426-2UAS-CMV-Luciferase-Gal4BD-VP64的Luciferase表达量最高,大概是阴性对照组的16倍以上;然后将2UAS替换成4UAS,构建新的表达载体pRS426-4UAS-CMV-Luciferase-T2A-NLS-Gal4BD-VP64-NLS,此表达载体激活的报告基因Luciferase的表达量是CMV启动表达载体的近23倍;接着我们在HEK293T细胞上研究了增强基因表达的稳定性,发现相比于阴性对照组,由表达载体pRS426-4UAS-CMV-Luciferase-T2A-NLS-Gal4BD-VP64-NLS激活的报告基因Luciferase的表达水平从转染后第6~10天一直维持较高水平的表达,在转染后第8天达到了峰值。还在专门用于生产重组蛋白的CHO细胞系上进行了验证,增强效果依然十分显着(8倍以上)。综上,我们构建的Gal4/UAS系统表达盒可以自动催化或激活,在增强基因表达上产生显着效果;而且与以往报道的增强系统相比,结构简单、增强效果持久高效,该Gal4/UAS系统表达盒有望在提高重组蛋白的生产中成为一种强有力的工具,在非病毒基因介导途径中作为一种新的增强系统来提高目的基因的表达,在重组酵母呈递DNA疫苗的免疫和预防中发挥重要作用。(本文来源于《西北农林科技大学》期刊2017-05-01）
宋洋[3]（2016）在《人细胞中CRISPR/Cas9介导的AAVS1位点可诱导型Cas9表达盒的插入》一文中研究指出AAVS1位点是位于人类基因PPP1R12C第一个内含子上的一段特定序列,在该位点中敲入外源基因片段具有稳定表达、不影响其他基因转录的优点。近几年来,出现一种新的基因编辑的技术CRISPR/Cas9,该技术进行基因编辑时需要在细胞内表达一个160kd的Cas9蛋白和很小片段sgRNA,目前主要通过瞬时表达载体在细胞内表达Cas9蛋白和sgRNA,由于在一些细胞中导入钱体效率不高而影响切割效率,而如果在人细胞的AAVS1位点插入一个可诱导型表达Cas9蛋白的表达盒,通过诱导,可在细胞内先表达Cas9蛋白,再通过转染的方式导入小片段的sgRNA即能大大提高切割效率,并且可同时导入多个sgRNA进行多基因的同时编辑。并且可诱导的Cas9蛋白的表达也避免了持续表达的Cas9蛋白在细胞内长期表达,对细胞有毒性,容易造成实验误差的影响。本课题拟尝试利用CR1SPR/Cas9技术在人细胞的AAVS1位点中插入可诱导型Cas9的表达盒。首先,本实验针对在AAVS1位构建了质粒LentiCRISPRv2-sgRNA1/2/3,检测其切割效率分别为22%、25%和27%,并检测发现LentiCRISPRv2-sgRNA2/3在其潜在脱靶位点上不存在脱靶效应。其次,利用LentiCRISPRv2-sgRNA2/3质粒和AAV-CAGGS-EGFP donor质粒进行了HEK293T和人牙胚间充质永生化细胞的AAVS1位点的敲入外源基因EGFP的实验。结果表明LentiCRISPRv2-sgRNA2/3质粒与AAV-CAGGS-EGFP doner质粒可以实现在这两种细胞的AAVS1位点中插入EGFP表达元件,并且插入效率差异不大。最后,利用LentiCRISPRv2-sgRNA2/3质粒以及可诱导型Cas9的表达盒的组件：Puro-Cas9 donor和Neo-M2rtTA donor质粒进行了HEK293T细胞的AAVS1位点上插入可诱导型Cas9表达盒的实验。蛋白质印记的结果显示可以在人的细胞中插入可诱导型Cas9表达盒。(本文来源于《福建师范大学》期刊2016-06-05）
徐海,鲍熹,王义伟,卢宇,许梦薇[4]（2015）在《转运真核表达盒的重组T7噬菌体构建》一文中研究指出为了构建转运真核表达盒的重组T7噬菌体,并分别在体外、体内条件下检测其标签蛋白质EGFP的表达。以T7噬菌体基因组左侧578 bp处为插入位点,取上游400 bp和下游200 bp片段作为左右同源臂,并在其中插入表达EGFP基因的真核表达盒(EEB),构建同源重组质粒p UC-L-EEB-R。将该质粒载体转化T7噬菌体宿主细菌BL21,在噬菌体繁殖过程中完成同源重组,PCR筛选重组T7-EEB噬菌体。提取该重组噬菌体基因组转染Vero细胞后体外检测EGFP蛋白质表达,纯化的噬菌体免疫小鼠后体内检测EGFP蛋白质表达。结果显示,通过同源重组方法成功构建了携带真核表达盒的重组T7噬菌体,PCR检测和酶切鉴定均证明表达盒已正确插入。T7-EEB基因组转染真核细胞可见明显的EGFP蛋白质表达,免疫小鼠后活体荧光检测到EGFP蛋白质信号,在小鼠肝脏、脾脏组织中RT-PCR检测到EGFP基因的mRNA转录。表明同源重组方法可以用于构建重组T7噬菌体,噬菌体能够转运真核表达盒并实现蛋白质表达。(本文来源于《江苏农业学报》期刊2015年01期）
谌颜[5]（2014）在《fad3b乳腺特异表达盒转基因小鼠的研制》一文中研究指出长链n-3多不饱和脂肪酸(n-3PUFAs)对人类的健康发挥着重要作用,而由于哺乳动物体内没有产生n-3PUFAs的脂肪酸去饱和酶基因,所以哺乳动物均不能自身产生n-3PUFAs。目前,常用于转基因动物的脂肪酸去饱和酶基因是fat-1,fat-1转基因小鼠和家畜的研究已经有不少报道。在本实验中,使用了来源于亚麻的脂肪酸去饱和酶基因fad3b,即将fad3b基因连入乳腺特异表达载体pBC-as1中,并通过M. Mun Ⅰ和Apa Ⅰ进行双酶切,得到了不含标记基因、抗性基因的fad3b乳腺特异基因表达盒pBC-as1-fad3b,其长度为12188bp,通过原核注射的方法制备转基因小鼠,并且繁殖到F3代。经鉴定,fad3b在Founder、F1、F2、F3代转基因小鼠的基因组中均有整合、表达。该研究证明,基因表达盒可以在哺乳动物体内整合、表达并可以稳定遗传给下一代。同时,选取四个与脂肪酸合成和代谢相关的基因,分别为：脂肪酸合成酶(fatty acid synthase, FASN),激素敏感脂酶(hormone-sensitive lipase, HSL),脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase, LPL)和乙酰辅酶A羧化酶(acety-CoA carboxylase, ACC),荧光定量PCR方法检测fad3b基因整合到小鼠基因组以后,在各个组织中对这四个基因表达情况的影响。(本文来源于《内蒙古大学》期刊2014-05-01）
黄娟娟,郭兆霞,李继安,刘伟,邵雷[6]（2013）在《增加cmcJ基因表达盒拷贝数对转化头孢菌素C效率的影响》一文中研究指出研究表明利用棒状链霉菌Streptomyces clavuligerus(ATCC27064)的粗酶液能够在头孢菌素C的7位添加一个甲氧基,得到的7α-甲氧基头孢菌素C,可以作为头霉素类抗生素的半合成前体。本研究首先构建含有棒状链霉菌中cmcJ基因的重组质粒pHJJ-2,再通过属间接合转移的方法将该基因片段导入棒状链霉菌中,得到cmcJ基因表达盒增加的棒状链霉菌重组突变株。结果表明,重组突变株将头孢菌素C转化为羟基化头孢菌素C的转化率,从野生型菌株的57.0%提高到重组突变株的67.4%;甲氧基头孢菌素C的转化率由野生型的43.1%提高到重组突变株的51.9%。(本文来源于《工业微生物》期刊2013年03期）
杨承槐,李俊平,李启红,刘丹,黄建华[7]（2013）在《含LacZ表达盒的鸭瘟病毒TK基因缺失转移载体的构建》一文中研究指出根据GenBank已发表的鸭瘟病毒活疫苗C-KCE株基因组序列设计一对引物,扩增出含TK基因完整ORF的2.7 kb的片段,克隆至pMD18T simple载体。利用该片段内的两个酶切位点Xho I和EcoR V,切除TK基因内的244 bp,用T4 DNA聚合酶补平末端;pVAX1-LacZ用Nru I和Nar I双酶切,回收含LacZ表达盒的4.1 kb片段,通过平末端连接将LacZ表达盒插入到TK基因中,从而获得了转移载体pTK-LacZ,为构建重组鸭瘟病毒奠定了基础。(本文来源于《中国兽药杂志》期刊2013年01期）
隋晓燕,赵琰,王树彬,段晓亮,许兰杰[8]（2012）在《无载体框架结构的大豆铁蛋白线性表达盒提高小麦籽粒铁含量的研究》一文中研究指出培育和推广铁强化型小麦品种对于经济有效地解决贫困人口的铁营养不良问题具有重要意义。本研究通过 RT-PCR 得到了大豆(Glycine max)铁蛋白基因,构建了无载体框架的大豆铁蛋白线性表达盒(即小麦籽粒特异的高分子量谷蛋白亚基 1Dx5 的启动子 - 大豆铁蛋白基因 -NOS 终止子酶切片段);用基因枪法转化"京花 1 号"小麦(Triticum aestivum)幼胚愈伤组织,经草胺膦筛选和分化后,得到 276 株转基因T0植株,通过 PCR 筛选出阳性植株 65 株;RT-PCR 检测发现 29 个株系的大豆铁蛋白基因在灌浆期籽粒中表达;与对照相比,对 8031 个 T1代株系所结的 T2代籽粒进行了铁含量测定,有 265 个株系成熟籽粒的铁含量均比对照有不同幅度提高,增幅在 4.93%~64.03%之间,其中 22 个株系的籽粒铁含量显着或极显着提高。结果提示,利用无载体框架的大豆铁蛋白线性表达盒可以有效地培育出籽粒铁含量显着提高的转基因小麦。(本文来源于《农业生物技术学报》期刊2012年07期）
孙爻[9]（2012）在《中国转基因棉Bt基因表达盒的检测》一文中研究指出转基因抗虫棉是我国种植面积最大的转基因作物，种植面积已超过棉花总种植面积的70%。我国转基因棉花品种众多，获得安全证书超过1600份，但对分子特征和特异性检测方法报道较少。本研究克隆和比较了我国转基因棉花中的Bt基因表达盒序列，建立了构建特异性筛查方法，并鉴别了我国部分省区样品，得到的主要结果如下：1.从我国转基因抗虫棉中鉴定了一种新的Bt基因表达盒并建立了构建特异性检测方法。采用通用元件与cry1A基因的通用引物组合在转基因抗虫棉南农6号F1中获得了一种新的Bt基因表达盒—cry1Aa基因表达盒。获得的表达盒序列全长2381bp，其中1-277bp为CaMV35S启动子区域；278-2125bp为cry1Aa基因；2126-2382bp为7S UTR终止子区域。通过与已经报道的其他2种Bt基因表达盒比较，建立了鉴别cry1Aa基因表达盒的构建特异性检测方法。采用建立的方法对18份棉花材料进行检测，结果表明共有8份材料含有cry1Aa基因表达盒的结构。2.建立了鉴别cry1Aa等3种Bt基因表达盒的构建特异性多重PCR方法，并对我国部分省区样品进行了分析。本研究以cry1Ac、cry1Ab/Ac和cry1Aa基因表达盒的Bt基因与终止子7S UTR的连接区域为靶标，分别在cry1Ac、cry1Ab/Ac基因表达盒中Bt基因上设计正向引物，其位置分别在两种表达盒3765-3782bp和2016-2036bp，再结合cry1Aa基因表达盒的构建特异性检测引物，用这四条引物组合成鉴别这叁种Bt基因表达盒的构建特异性多重PCR检测方法。使用该方法扩增cry1Ac、cry1Ab/Ac和cry1Aa基因表达盒的片段大小分别为183bp、329bp和462bp。检测方法的灵敏度测试表明，其检测灵敏度是22个拷贝，相当于0.05ng的棉花基因组。对我国四个省份采集的204份棉花样品检测表明：含有cry1Ac基因表达盒的173个，含有cry1Ac+cry1Ab/Ac基因表达盒的16个，含有cry1Ac+cry1Aa基因表达盒的11个，同时含有cry1Ac+cry1Ab/Ac+cry1Aa基因表达盒的4个。对含有3个表达盒的一个棉花材料进行了60粒单粒种子检测，结果表明：含有cry1Ac基因表达盒的28个，含有cry1Ab/Ac基因表达盒的1个，含有cry1Aa基因表达盒的16个，同时含有cry1Ac+cry1Aa基因表达盒的3个，未含有这叁种基因的12个。(本文来源于《中国农业科学院》期刊2012-06-01）
祁喜涛,吴景,杨婷,文天祥,郑锦荣[10]（2011）在《基因枪介导bar基因表达盒转化甜玉米初步研究》一文中研究指出以超甜玉米优良自交系1132幼胚的愈伤组织为受体材料,采用基因枪介导法将bar基因表达盒(启动子+基因+终止子)导入胚性愈伤组织,经选择培养、胚状体诱导、再生等过程,获得38个株系共101株转基因玉米。对转基因植株的叶片涂抹除草剂basta进行抗性鉴定,其中有8个株系共22株表现抗性;进一步进行PCR分析,结果表明,其中有6个株系共15株为阳性。试验结果初步证明bar基因已整合到1132的基因组中,转化效率为3%。转基因表达盒完整性分析表明,bar基因表达盒在受体基因组中的结构是完整的。(本文来源于《广东农业科学》期刊2011年S1期）
表达盒论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
基因导入系统较低的转染效率限制了基因转移技术的治疗效用,尽管病毒介导的载体系统可以具备相对较高的基因表达水平,但它在基因治疗中插入或整合到染色体的位置是随机的,有引起插入突变及细胞恶性转化的潜在危险;非病毒载体系统的免疫原性较低,安全可靠,并适于大规模生产,在外源基因短暂表达中具有优势,并广泛应用于各种DNA疫苗的研制,它的不足是体内转导效率低,靶向性差,基因表达时间短。综上,采用生物安全性较好的非病毒方式,如何增强外源基因表达,进而延长基因治疗的时间,受到人们越来越多的关注。另一方面,重组蛋白表达技术是研究蛋白质结构、功能,及筛选靶向药物的有力工具,在基础科学以及医药学领域发挥了重要作用。截至目前,人们已经研究开发出多种原核和真核表达系统用以生产重组蛋白。原核表达系统方便,便宜、周期短,但有些蛋白折迭不好,不带有糖基化等修饰;而哺乳动物表达系统——作为典型的真核表达系统,主要用于制备分泌的重组蛋白。相较于其他表达系统的宿主,它具有最出色的蛋白质折迭和二硫键形成能力,表达出的蛋白最接近天然蛋白,有利于蛋白结构和功能研究,但也存在着产量低,培养成本较高的劣势。因此,人们期望发明一种简单高效的瞬时表达系统,提高重组蛋白的生产效率。此外,在利用重组酿酒酵母呈递外源性DNA或RNA产生特异性抗体和杀伤性T细胞过程中,重组DNA疫苗引起特异性免疫反应可能较慢,产生特异性抗体的剂量较小。Gal4/UAS系统是生物体中用于研究基因表达和功能的一种生物化学方法,本实验中我们在CMV表达载体的基础上增加一种自动激活的Gal4/UAS表达盒从而增强基因表达。首先,Gal4/UAS系统中2个上游激活序列(2UAS),VP64,Gal4AD和VP64-p65-Rta叁种DNA激活域进行比较,表达载体pRS426-2UAS-CMV-Luciferase-Gal4BD-VP64的Luciferase表达量最高,大概是阴性对照组的16倍以上;然后将2UAS替换成4UAS,构建新的表达载体pRS426-4UAS-CMV-Luciferase-T2A-NLS-Gal4BD-VP64-NLS,此表达载体激活的报告基因Luciferase的表达量是CMV启动表达载体的近23倍;接着我们在HEK293T细胞上研究了增强基因表达的稳定性,发现相比于阴性对照组,由表达载体pRS426-4UAS-CMV-Luciferase-T2A-NLS-Gal4BD-VP64-NLS激活的报告基因Luciferase的表达水平从转染后第6~10天一直维持较高水平的表达,在转染后第8天达到了峰值。还在专门用于生产重组蛋白的CHO细胞系上进行了验证,增强效果依然十分显着(8倍以上)。综上,我们构建的Gal4/UAS系统表达盒可以自动催化或激活,在增强基因表达上产生显着效果;而且与以往报道的增强系统相比,结构简单、增强效果持久高效,该Gal4/UAS系统表达盒有望在提高重组蛋白的生产中成为一种强有力的工具,在非病毒基因介导途径中作为一种新的增强系统来提高目的基因的表达,在重组酵母呈递DNA疫苗的免疫和预防中发挥重要作用。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
表达盒论文参考文献
[1].刘金泽,刘云惠,余子豪,李永霞,王明晓.一种用于Red同源重组的正反筛选表达盒的构建及其反向筛选性能分析[J].中国预防兽医学报.2018
[2].刘玉万.一种增强基因表达的自激活GAL4/UAS系统表达盒的建立[D].西北农林科技大学.2017
[3].宋洋.人细胞中CRISPR/Cas9介导的AAVS1位点可诱导型Cas9表达盒的插入[D].福建师范大学.2016
[4].徐海,鲍熹,王义伟,卢宇,许梦薇.转运真核表达盒的重组T7噬菌体构建[J].江苏农业学报.2015
[5].谌颜.fad3b乳腺特异表达盒转基因小鼠的研制[D].内蒙古大学.2014
[6].黄娟娟,郭兆霞,李继安,刘伟,邵雷.增加cmcJ基因表达盒拷贝数对转化头孢菌素C效率的影响[J].工业微生物.2013
[7].杨承槐,李俊平,李启红,刘丹,黄建华.含LacZ表达盒的鸭瘟病毒TK基因缺失转移载体的构建[J].中国兽药杂志.2013
[8].隋晓燕,赵琰,王树彬,段晓亮,许兰杰.无载体框架结构的大豆铁蛋白线性表达盒提高小麦籽粒铁含量的研究[J].农业生物技术学报.2012
[9].孙爻.中国转基因棉Bt基因表达盒的检测[D].中国农业科学院.2012
[10].祁喜涛,吴景,杨婷,文天祥,郑锦荣.基因枪介导bar基因表达盒转化甜玉米初步研究[J].广东农业科学.2011
论文知识图
