导读:本文包含了脊髓肽论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:牛脊髓,酶解,多肽,抗氧化活性
脊髓肽论文文献综述
柳慧琴[1]（2019）在《牛脊髓肽的制备及其抗氧化活性研究》一文中研究指出牛脊髓是牛中枢神经系统的一部分,经常被人们作为一种高营养食物食用。中医认为其具有补中益气、滋养脾胃、强筋健骨、化痰息风、止渴止涎之功效,适宜于中气下陷、气短体虚、筋骨酸软、久病贫血及面黄目眩之人食用。其富含丰富的蛋白质、脂肪、碳水化合物、花生四烯酸、棕榈酸、硬脂酸、亚油酸、锌、钙等。牛脊髓其氨基酸组成很接近人体需要,可使机体抗病能力增强,适宜病后调养的人食用,能起到补血益气、修复组织的作用,极具开发潜力。但是目前牛脊髓利用方式有限,对于牛脊髓中的蛋白质开发率较低,因此本试验以新鲜牛脊髓为原料,经高温蒸煮、打浆、均质、脱脂等步骤,从牛脊髓中以酶解法分离多肽。酶解过程分别采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶单酶以及碱性蛋白酶与中性蛋白酶、中性蛋白酶与木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶与木瓜蛋白酶复合酶酶解,以水解度和DPPH清除率为指标优化酶解条件,采用超滤技术分级分离牛脊髓多肽,运用体外化学法和细胞生物法初步研究牛脊髓多肽的抗氧化活性。最后以新鲜牛脊髓为原料制备牛脊髓速溶营养全粉。主要研究结果如下;1.新鲜牛脊髓中基本成分如下:蛋白质15.9%、脂肪17.2%、碳水化合物2.47%、锌4.44 mg/kg、钙39.7 mg/kg。鲜脊髓中各类脂肪酸占比分别为棕榈酸21.16%、硬脂酸23.53%、油酸42.66%、花生四烯酸12.65%,含有人体所需全部氨基酸,每100 g鲜脊髓含有的氨基酸总和为10.51 g,其中谷氨酸的含量达到1.77g/100g。2.通过SDS-PAGE凝胶电泳对牛脊髓蛋白分析得,牛脊髓蛋白分子量主要集中分布在18.5 kDa左右且杂带几乎没有。以水解度和DPPH清除率为指标对比3种单酶酶解和3种复合酶酶解工艺,最终选择酶解效果较好的双酶:碱性蛋白酶与木瓜蛋白酶酶解,采用正交试验优化碱性蛋白酶与木瓜蛋白酶酶解工艺。3.碱性蛋白酶与木瓜蛋白酶1︰1酶解,以水解度、DPPH自由基清除率为指标,正交试验优化最佳酶解工艺条件为:加酶量3%、酶解pH值8、酶解时间3h、酶解温度55℃,最终水解度为56.2、DPPH自由基清除率54.67%。4.牛脊髓酶解产物经不同超滤膜分离得到不同多肽组分,运用体外化学法以ABTS自由基清除率、DPPH自由基清除率、超氧阴离子自由基清除率、羟自由基清除率为指标,测定抗氧化活性如下:当多肽浓度从0.1 mg/mL上升到5mg/mL时ABTS、DPPH、超氧阴离子、羟自由基清除率均呈现上升趋势,ABTS自由基清除率最高达84.67%。5.细胞试验表明,不同浓度牛脊髓多肽对H_2O_2诱导的HepG_2细胞氧化损伤均具有一定保护作用,H_2O_2诱导的HepG_2细胞经牛脊髓多肽作用后其细胞存活率提高,细胞内超氧化物歧化酶SOD、谷胱甘肽GSH含量上升,丙二醛MDA含量下降。6.以喷雾干燥法制备牛脊髓速溶粉,并对干燥工艺进行优化,最终得出喷干条件为:进风温度185℃、进料量20 mL/min、可溶性固形物14%、β-环状糊精添加量25%。(本文来源于《吉林大学》期刊2019-06-01）
李冬梅,张兴群,李湛军,徐康森[2]（2008）在《脊髓肽MP1的固相合成工艺及其免疫活性的研究》一文中研究指出目的:对脊髓肽 MP1的固相合成工艺进行优化,并研究其免疫活性。方法:采用 Fmoc 法对脊髓肽 MP1进行固相合成,利用反相高效液相、质谱和氨基酸分析的方法对其进行性质鉴定,并采用 MTT 法对其进行免疫活性检测。通过探索不同的缩合时间、氨基酸用量和切割条件对合成效率的影响,由此找出适宜的合成条件。结果:以 DMF 为反应溶剂、HBTU/HOBt 为缩合剂、缩合时间50 min 和氨基酸过量两倍进行多肽 MP1的合成,并采用配方为:TFA-水-EDT-TES(90:6:3:1)的切割剂进行常温切割3.5 h,此条件下粗品纯度可达到83.20%。质谱分析的分子离子峰[M+H]+是681.4与脊髓肽 MP1的理论分子量680.80基本一致,氨基酸分析结果表明:脊髓肽 MP1的氨基酸残基的实测摩尔比与理论摩尔比基本一致。纯化后的 MP1具有明显的促进 ConA 刺激脾淋巴细胞增殖的作用。结论:本实验建立的固相合成工艺条件可以成功地合成具有免疫活性的脊髓肽 MP1。(本文来源于《药物分析杂志》期刊2008年12期）
王焕灵,张兴群,李湛军,徐康森[3]（2008）在《脊髓肽MP-2的Fmoc法固相合成、HPLC纯化及其活性检测》一文中研究指出目的:用固相法合成脊髓肽 MP-2并验证其生物活性。方法:采用 Fmoc 固相法对脊髓肽 MP-2进行仪器自动合成,通过正交实验对反应条件进行了优化,肽-树脂复合物酸裂解后获得小肽粗品。用高效液相色谱法对所得粗品纯化制备,并利用 LC-MS 色谱仪确定目标产物,最后对纯品的生物活性进行检测。结果:通过正交实验优化 PSSM-8多肽合成仪合成MP-2的反应条件,粗品得率达到82%,HPLC 峰归一化法检测纯度为62.9%,中压柱制备后纯品纯度达到96.7%。纯品对S180肿瘤细胞进行抑瘤试验,证明 MP-2 0.25 mg·kg~(-1)对 S180有明显抑制作用,抑瘤率50.4%,且毒性低,不影响动物的发育生长。结论:合成实验证明,Fmoc 固相合成法合成脊髓肽 MP-2,操作条件温和且粗品得率较高,质谱检定主峰为目标峰后中压柱进行制备,分离操作简单,可以进行小批量生产;活性试验证明 MP-2具有抑制肿瘤S180生长的效果,为进一步进行药效学验证提供了初探基础。(本文来源于《药物分析杂志》期刊2008年12期）
王焕灵[4]（2007）在《脊髓肽MP-2及其类似物retro-MP-2的Fmoc法固相合成、纯化及活性检测》一文中研究指出环磷酰氨是目前常用抗肿瘤化疗药物,对各种肿瘤的抑制作用明显,但其毒性较大,副作用显着。因此,寻找高效、无毒抗肿瘤新药是现在药学界重要的课题,具有十分重要的意义。MP-2(Myelopeptide-2)是由俄罗斯的科学家从脊髓肽混合物中分离出的一种小肽分子,它由六个氨基酸组成,能有效抑制多种移植性肿瘤的生长。retro-MP-2由组成MP-2的氨基酸按照相反的酰胺键连接顺序构成,具有类似于MP-2的抗肿瘤活性,但作为一种非体内物质,它可以克服体内环境的生物降解作用,理论上讲,药物有效时间长、药效好,MP-2及retro-MP-2很可能成为临床抗肿瘤新药,得到广泛应用。因此,对此类功能多肽进行化学合成、制备及活性研究具有重要意义。Fmoc固相法合成多肽,可以避免传统液相合成中反应时间过长、操作过程复杂等缺点,利于反应的自动化,成为多肽合成重要的发展方向。论文应用;Fmoc-OSU、氨基酸及wang树脂对固相合成所需中间产物进行制备,氨基酸衍生物纯度达到90%以上,Leu-wang resin载重达到0.40mmol.g~(-1),满足下一步实验需求。论文对PSSM-8多肽合成仪合成的条件进行优化,得到最佳反应条件为;树脂浸泡时间30min,临时保护基Fmoc分两次,每次7分钟进行脱除,氨基酸预活化10min,耦联时间40min,粗品得率达到82%。论文通过对不同的活化试剂、切割条件进行比较,得HBTU/DIEA/HOBT催化体系合成效率较高,切割配方TFA/DCM/EDT/H_2O/Phenol=70%;20%;2.5%;5%;2.5%所得副产物少,粗品产率较高。利用HPLC技术对粗品的分离、纯化条件进行优化,通过考察流动相、pH、柱温、流速、梯度等因素的影响,确定了Waters高效液相色谱反相柱分析条件,并利用LC-MS确定了主要产物及目标峰,中低压液相色谱(MPLC)进行纯化制备,优化了制备条件,分离出的产品溶液经冷冻干燥得到白色易于保存的产品,且纯度达到95%以上,满足活性试验要求。论文进行了MP-2和retro-MP-2的体内抗肿瘤活性研究,成功建立了S180实体肿瘤模型,通过试验得出MP-2最佳剂量组为;0.25mg·kg~(-10,抑瘤率达到50.4%,retro-MP-2最佳剂量组为;1mg·kg~(-1),抑瘤率达到49.9%,比常用阳性对照组效果略低,但合成产品不影响小鼠生长发育。论文为MP-2、retro-MP-2的PSSM-8合成及HPLC纯化优化了实验条件,并为进一步进行药效学验证提供了初探基础。(本文来源于《东华大学》期刊2007-12-05）
李冬梅[5]（2007）在《脊髓肽MP1的固相合成及其免疫活性的研究》一文中研究指出脊髓肽MP1最初是从新鲜的猪骨髓细胞培养液的表层中提取出来的,其氨基酸序列是:Phe-Leu-Gly-Phe-Pro-Thr,它具有良好的免疫活性,能矫正具有免疫缺陷动物的免疫系统,恢复动物体内抗体产生的数量,调节和增强细胞的免疫功能,并且能促进ConA诱导的脾淋巴细胞的分裂繁殖。本论文研究的主要内容是:1)对脊髓肽MP1的固相合成工艺条件、树脂切割工艺条件和RP-HPLC分离条件进行优化,确定固相合成和分离脊髓肽MP1的较佳工艺条件。2)对固相合成出的多肽进行RP-HPLC、质谱和氨基酸分析,验证其是否为脊髓肽MP1。3)对纯化冻干后的脊髓肽MP1进行免疫活性的研究,验证化学合成的脊髓肽MP1是否具有同样的生物活性,以及生物活性与其剂量的关系。采用Fmoc法对脊髓肽MP1进行固相合成,通过探索了不同的缩合时间、树脂的浸泡时间、氨基酸的用量、缩合剂的浓度、催化剂的浓度、氨基酸的活化条件、树脂的用量克数与溶剂的体积数的比值以及每步反应中树脂的洗涤次数等对合成效率的影响,从而找出的脊髓肽MP1较佳的合成工艺条件为:80mg树脂浸泡于900μLDMF溶剂中,树脂的浸泡时间为40min,缩合剂HBTU/HOBt的浓度为0.5mmol·L~(-1),催化剂DIEA的浓度为1.5mmol·L~(-1),氨基酸的物质的量过量2倍,氨基酸活化条件是活化2次,每次7min,缩合时间为50min,每步反应脱Fmoc保护基后树脂的洗涤次数为6次。在此合成工艺条件下,根据树脂增重计算脊髓肽MP1的合成效率可达90%以上。应用酸类物质对合成产物脊髓肽MP1-Wang树脂进行树脂的切割和侧链的脱除,探索了不同的切割剂、切割时间和切割温度等对切割工艺条件的影响,从而找出的较佳切割条件为:采用TFA-水-EDT-TES(90:6:3:1)作为切割剂,在室温条件下切割3.5h。在此切割条件下,根据残留树脂的质量百分数来表示脊髓肽MP1-Wang树脂的切割效率,树脂的切割效率可达99%以上。应用RP-HPLC对粗品脊髓肽MP1进行分离纯化,探索了洗脱梯度、乙腈的浓度、流速、离子对试剂TFA的浓度和色谱柱等对脊髓肽MP1在RP-HPLC上分离效果的影响,从而确定的较佳分离条件为:在Waters反相高效液相色谱仪上,选用色谱柱为VP-ODS C_(18)(150×4.6mm,5μm),紫外检测波长为214nm,流动相为:A相0.1%TFA的水溶液;B相0.1%TFA/70%乙腈的水溶液,洗脱梯度为:5min,B相0→35%;35min,B相35%→55%,流速0.7mL·min~(-1)。采用质谱仪LC-MS对粗品脊髓肽MP1进行分析鉴定,检测谱图表明:固相合成粗肽的分子离子峰是681.40为[M+H]~+峰,与脊髓肽MP1的理论相对分子质量680.80基本一致,340.20对应的是脊髓肽MP1的双电荷碎片,这一鉴定结果表明合成的粗肽中含有脊髓肽MP1。采用氨基酸分析的方法对纯化后的脊髓肽MP1进行进一步的性质鉴定,其实验结果表明:实际测量的脊髓肽MP1的氨基酸残基的摩尔比与理论摩尔比基本一致。通过脾淋巴细胞转化实验的MTT法,对纯化后的脊髓肽MP1进行免疫活性的研究,探索了化学合成的脊髓肽MP1是否同样具有免疫调节活性及其剂量对生物活性的影响。结果表明:本论文固相合成的脊髓肽MP1具有免疫调节作用,能促进ConA诱导的脾淋巴细胞的分裂繁殖,且当脊髓肽MP1的剂量为1.00×10~(-3)μg·mL~(-1)时,这种免疫调节作用最明显。综上所述,本论文成功的合成制备了脊髓肽MP1,建立了其完整的固相合成、树脂切割和粗品分离的较佳工艺条件,并且验证了化学合成的脊髓肽MP1同样具有免疫调节的生物活性,及其剂量对生物活性的影响。(本文来源于《东华大学》期刊2007-12-05）
脊髓肽论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的:对脊髓肽 MP1的固相合成工艺进行优化,并研究其免疫活性。方法:采用 Fmoc 法对脊髓肽 MP1进行固相合成,利用反相高效液相、质谱和氨基酸分析的方法对其进行性质鉴定,并采用 MTT 法对其进行免疫活性检测。通过探索不同的缩合时间、氨基酸用量和切割条件对合成效率的影响,由此找出适宜的合成条件。结果:以 DMF 为反应溶剂、HBTU/HOBt 为缩合剂、缩合时间50 min 和氨基酸过量两倍进行多肽 MP1的合成,并采用配方为:TFA-水-EDT-TES(90:6:3:1)的切割剂进行常温切割3.5 h,此条件下粗品纯度可达到83.20%。质谱分析的分子离子峰[M+H]+是681.4与脊髓肽 MP1的理论分子量680.80基本一致,氨基酸分析结果表明:脊髓肽 MP1的氨基酸残基的实测摩尔比与理论摩尔比基本一致。纯化后的 MP1具有明显的促进 ConA 刺激脾淋巴细胞增殖的作用。结论:本实验建立的固相合成工艺条件可以成功地合成具有免疫活性的脊髓肽 MP1。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
脊髓肽论文参考文献
[1].柳慧琴.牛脊髓肽的制备及其抗氧化活性研究[D].吉林大学.2019
[2].李冬梅,张兴群,李湛军,徐康森.脊髓肽MP1的固相合成工艺及其免疫活性的研究[J].药物分析杂志.2008
[3].王焕灵,张兴群,李湛军,徐康森.脊髓肽MP-2的Fmoc法固相合成、HPLC纯化及其活性检测[J].药物分析杂志.2008
[4].王焕灵.脊髓肽MP-2及其类似物retro-MP-2的Fmoc法固相合成、纯化及活性检测[D].东华大学.2007
[5].李冬梅.脊髓肽MP1的固相合成及其免疫活性的研究[D].东华大学.2007