导读:本文包含了骨形态构建蛋白基因论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:蛋白,形态,转染,发生,干细胞,基因,骨髓。
骨形态构建蛋白基因论文文献综述
周珂,辛智倩,刘佩娟,马翠,师长宏[1]（2019）在《骨形态发生蛋白9基因敲除小鼠的构建》一文中研究指出目的运用CRISR/Cas9技术敲除小鼠基因组中Bmp9基因片段,构建Bmp9基因敲除小鼠。方法根据Bmp9基因的外显子序列,设计一段sgRNA并合成。sgRNA体外转录后和Cas9 mRNA混合后显微注射受精卵细胞,注射后的受精卵细胞移植至受体动物获得子代小鼠。提取子代小鼠基因组DNA测序鉴定其基因型。基因型鉴定正确的小鼠与野生型交配后筛选纯合子小鼠。同时取纯合子小鼠心脏、肝、脾、肺、肾,匀浆后提取总RNA和总蛋白,通过q PCR、WB和免疫组化检测BMP9在各组织中的表达。结果设计并合成20 bp的sgRNA并进行体外转录,显微注射并回植后得到基因突变小鼠,连续交配后得F2代纯合子。测序结果显示,突变小鼠存在两种基因型,一种为5 bp缺失突变,另一种为13 bp缺失并伴有1 bp插入突变。与野生型C57BL/6相比,q PCR、WB和免疫组化结果均表明基因敲除小鼠肝中BMP9表达显着降低。结论利用CRISPR/Cas9技术成功构建出了BMP9基因敲除小鼠。(本文来源于《中国实验动物学报》期刊2019年03期）
吴星,吴立忠,詹洋,康荣彬[2]（2018）在《高表达骨形态发生蛋白2小鼠骨髓间充质干细胞体系的构建及基因表达的研究》一文中研究指出目的建立稳定高表达骨形态发生蛋白2(BMP-2)的小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)体系。方法利用重组腺病毒载体Ad5-BMP-2-GFP将BMP-2基因转染到小鼠BMSCs中,倒置荧光显微镜下观察转染后细胞形态及生长情况,钙结节茜素红染色观察钙化斑的形成,RT-PCR检测转染后BMSCs中BMP-2基因的表达。结果重组腺病毒转染效率达80%,Ad5-BMP-2-GFP组21天后形成矿化钙结节,有明显目的基因(BMP-2)条带。结论建立了稳定高表达BMP-2的小鼠BMSCs体系,为后续研究BMP-2在小鼠BMSCs向成骨细胞分化过程中的作用提供了坚实基础。(本文来源于《福建医药杂志》期刊2018年01期）
栾永[3]（2014）在《在体转染RNA干扰沉默气道高敏感反应小鼠骨形态构建蛋白-2基因的研究》一文中研究指出目的探讨在体转染RNAi技术沉默气道高敏感反应模型小鼠骨形态构建蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)基因的可行性。方法 Balb/c小鼠20只,随机分为在体转染组10只和对照组10只。在体转染组小鼠于1、7d腹腔注射卵清白蛋白+氢氧化铝混悬液,第7天转染腺病毒载体,于14、21、22d雾化吸入卵清白蛋白制作气道高敏模型;对照组小鼠于1、7d腹腔注射氢氧化铝,于14、21、22d雾化吸入生理盐水。在体转染组14d采用活体荧光成像法检测在体转染表达情况,2组末次雾化吸入后取肺组织采用Western blot法检测肺组织BMP-2表达水平,采用荧光定量PCR法检测BMP-2mRNA表达水平。结果在体转染组小鼠肺部有清晰荧光影像,转染成功;对照组末次雾化后肺组织BMP-2蛋白及mRNA表达水平(0.85±0.08,0.45±0.09)高于在体转染组(0.27±0.03,0.20±0.03)(P<0.01)。结论在体转染RNA干扰气道高敏感反应模型小鼠BMP-2基因的方法可行。(本文来源于《中华实用诊断与治疗杂志》期刊2014年12期）
杨晓喻,李世轶,张迪,吴颖,杨涛[4]（2014）在《人骨形态发生蛋白2真核表达载体构建及其基因/壳聚糖纳米复合体制备》一文中研究指出目的构建人骨形态发生蛋白(BMP)2的真核表达型载体,并利用其与壳聚糖制备纳米复合体。方法体外利用双酶切法将pMD18T-hBMP2-His质粒与pIRES2-EGFP真核表达载体连接,构建pIRES2-EGFP-hBMP2-His真核表达载体;采用5种不同相对分子质量及脱乙酰度的壳聚糖,通过去溶剂法在不同N/P比(壳聚糖中的胺基含量与质粒中磷酸基含量的摩尔比)情况下制备壳聚糖/pIRES2-EGFP-hBMP2-His纳米复合体。ZetaPALS电位及粒度分析仪检测纳米复合体的粒径大小、分布及Zeta电位,琼脂糖凝胶电泳分析及荧光分光法评定壳聚糖对pIRES2-EGFP-hBMP2-His纳米复合体的包裹情况,原子力显微镜观察粒径形貌。结果 1)成功构建pIRES2-EGFP-hBMP2-His真核表达载体,并经酶切、测序证实;2)成功制备壳聚糖/pIRES2-EGFP-hBMP2-His纳米复合体,壳聚糖对pIRES2-EGFP-hBMP2-His质粒具有包裹作用;3)制备的壳聚糖/pIRES2-EGFP-hBMP2-His复合体呈球状,粒径为111.7~3 214.2 nm,Zeta电位为4.93~16.79 mV。结论壳聚糖可与pIRES2-EGFP-hBMP2-His复合形成纳米微粒。(本文来源于《华西口腔医学杂志》期刊2014年05期）
丁立峰,周振东,杨军,郑刚,李建军[5]（2013）在《骨形态发生蛋白2基因转染的兔骨髓间充质干细胞复合聚乳酸-聚己内酯支架体外构建载基因仿生骨的实验研究》一文中研究指出[目的]构建聚乳酸-聚己内酯(PLA/PCL)吸附骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)基因的聚乙二醇(PEG)纳米复合物形成生物可降解仿生骨材料,接种兔骨髓间充质干细胞(rabbit bonemesenchymal stem cells,rBMSCs),检测BMP-2基因的转染情况及其对细胞增殖、分化的影响。[方法]通过溶液共混法制备PLA/PCL载基因仿生骨,接种rBMSCs细胞于仿生骨之上,培养48h;Real-time PCR检测转染后细胞BMP-2及骨钙素mRNA表达水平;应用Western Blot及免疫组化检测rBMSCs转染后BMP-2蛋白表达;免疫荧光检测rBMSCs细胞Ⅰ型胶原蛋白表达;ELISA检测转染后细胞培养上清中分泌BMP-2浓度,同时检测细胞内碱性磷酸酶活性,从而分析细胞分化情况;流式细胞检测转染BMP-2后细胞周期的变化。[结果]以未转染细胞作为对照,免疫组化表明转染后细胞内BMP-2表达量明显上调(P<0.05);Real-time PCR检测结果表明BMP-2与骨钙素mRNA表达显着增加(P<0.05);同时Western Blot结果同免疫组化结果相似,BMP-2也有明显上调(P<0.01);免疫荧光检测Ⅰ型胶原表达量显着上升(P<0.01);ELISA检测细胞培养上清中BMP-2分泌量也有增加(P<0.05);碱性磷酸酶较对照组相比活性显着增强(P<0.05),而流式细胞检测S期细胞无明显变化(P>0.05)。[结论]载基因仿生骨具有稳定而安全的转染性能,其转染后对rBMSCs细胞的分化效果是明显的,而对于细胞周期变化的影响并不显着。(本文来源于《中国矫形外科杂志》期刊2013年09期）
孙欣,曾荣,吴浩俊,胡资斌,陈思圆[6]（2013）在《转染骨形态发生蛋白-2基因的血管内皮祖细胞的构建》一文中研究指出目的通过克隆、构建pEGFP-BMP-2表达质粒载体,观察骨形态发生蛋白-2(BMP-2)基因在血管内皮祖细胞(EPCs)中的表达与分布。方法采用密度梯度法分离兔骨髓的单个核细胞,应用细胞荧光化学法及DAPI染细胞核法鉴定培养的细胞;BMP-2重组于pEGFP-C3中,经酶切、测序分析鉴定后,将其转染入EPCs内并筛选稳定转染细胞。结果鉴定培养的细胞为EPCs;pEGFP-C3-BMP-2表达质粒载体经双酶切鉴定、测序分析证实其构建成功;成功转染的EPCs中绿色荧光弥散分布于细胞胞质内,表明pEGFP-C3-BMP-2蛋白高表达,表达率为46%。结论分离与培养出EPCs;构建的pEGFP-C3-BMP-2表达质粒载体转染后,BMP-2蛋白高效表达于EPCs胞质中。(本文来源于《广东医学》期刊2013年03期）
邱俊钦,尹承慧,曾昭勋,陈宗雄[7]（2012）在《人骨形态发生蛋白2基因重组腺病毒的构建与鉴定》一文中研究指出背景:骨形态发生蛋白2是诱导成骨关键物质,参与调节从细胞增殖、决定种系分化方向到细胞死亡等一系列的生物过程。目的:利用AdMax系统构建人骨形态发生蛋白2基因的重组腺病毒载体并鉴定。方法:以人cDNA为模板PCR扩增人骨形态发生蛋白2基因,转化E.coli感受态细胞,经菌落PCR鉴定阳性转化子、阳性克隆测序无误后,扩增、抽提。将带有目的基因的腺病毒表达载体和携带有腺病毒大部分基因的辅助包装质粒共转染293细胞进行病毒包装扩增,PCR检测目的基因、Western Blot检测目的蛋白及终点稀释法检测病毒滴度。结果与结论:PCR获得长度为1223bp的人骨形态发生蛋白2目的基因片段,同源重组表达载体经阳性克隆PCR及测序鉴定,结果正确。293细胞内包装、扩增,经Westernblot及PCR鉴定无误后,获得病毒滴度为5×1013pfu/L的重组腺病毒。实验成功构建携带有人骨形态发生蛋白2基因的重组腺病毒载体。(本文来源于《中国组织工程研究》期刊2012年50期）
赵瑾,陈洪,林陈水[8]（2012）在《骨形态发生蛋白-2基因工程菌的构建及可溶性研究》一文中研究指出骨形态发生蛋白是一类调节骨组织发育的生长因子,其中骨形态发生蛋白-2诱导成骨活性最强,在骨组织工程研究中最具研究意义.为获得能高效表达溶解性高的人骨形成蛋白-2(BMP-2)的基因工程菌,用PCR方法扩增得到BMP-2的基因序列,直接将PCR产物连接到胞内融合表达型T载体质粒pMT-L上,构建包括麦芽糖结合蛋白(MBP)、连接肽、6个His、EKsite(Asp-Asp-Asp-Asp-Lys)和BMP-2的表达载体,转化E.coli DH5α,经抗性筛选和菌落PCR鉴定,抽提阳性克隆质粒转化表达宿主E.coli BL21(DE3),成功构建可在大肠杆菌细胞质内表达MBP-BMP-2融合蛋白的基因工程菌.工程菌经0.1mmol/L IPTG诱导后,可获得表观分子量约为55kD的以可溶形式表达的BMP-2融合蛋白.(本文来源于《浙江工业大学学报》期刊2012年03期）
刘梦桃,张庆鸿,梁星[9]（2011）在《壳聚糖-人骨形态发生蛋白-2纳米粒基因载体的构建分析》一文中研究指出目的:旨在构建一种良好性能的壳聚糖-人骨形态发生蛋白(BMP)-2纳米粒基因载体。方法:通过复凝聚法制备的壳聚糖纳米粒与基因重组构建的BMP-2质粒相结合,形成含50,100和200μg/ml质粒BMP-2的壳聚糖纳米粒基因载体(分别命名为C-B50、C-B100和C-B200)。采用包封率测定壳聚糖与BMP-2目的(本文来源于《中华口腔医学会口腔材料学专业委员会第七次全国口腔材料学术交流会论文汇编》期刊2011-11-11）
刘梦桃,张庆鸿,翟浚江,梁星[10]（2011）在《壳聚糖-人骨形态发生蛋白-2纳米粒基因载体的构建分析》一文中研究指出目的旨在构建一种良好性能的壳聚糖-人骨形态发生蛋白(BMP)-2纳米粒基因载体。方法通过复凝聚法制备的壳聚糖纳米粒与基因重组构建的BMP-2质粒相结合,形成含50、100和200μg/mL质粒BMP-2的壳聚糖纳米粒基因载体(分别命名为C-B50、C-B100和C-B200)。采用包封率测定壳聚糖与BMP-2目的基因的结合情况,场发射扫描电子显微镜观察纳米粒的形态和大小,DNaseⅠ消化实验检测该基因载体对目的基因的保护作用,以及MTT试验检测基因载体对骨髓基质干细胞的生长抑制。结果壳聚糖-BMP-2纳米粒基因载体呈不规则球形,结构紧密,粒径约为(90±20)nm。C-B50、C-B100和C-B200的包封率分别为76.31%±1.58%、84.49%±1.81%和81.69%±1.77%。壳聚糖-BMP-2纳米粒基因载体有效地保护BMP-2目的基因不被DNaseⅠ消化,随着剂量和时间的增加,对细胞的生长抑制率也增加(P<0.05),但最大剂量100 mg/L作用后绝大部分细胞的正常生长没有受到明显影响。结论该壳聚糖-BMP-2纳米粒基因载体有望应用于骨组织工程。(本文来源于《四川大学学报(医学版)》期刊2011年04期）
骨形态构建蛋白基因论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的建立稳定高表达骨形态发生蛋白2(BMP-2)的小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)体系。方法利用重组腺病毒载体Ad5-BMP-2-GFP将BMP-2基因转染到小鼠BMSCs中,倒置荧光显微镜下观察转染后细胞形态及生长情况,钙结节茜素红染色观察钙化斑的形成,RT-PCR检测转染后BMSCs中BMP-2基因的表达。结果重组腺病毒转染效率达80%,Ad5-BMP-2-GFP组21天后形成矿化钙结节,有明显目的基因(BMP-2)条带。结论建立了稳定高表达BMP-2的小鼠BMSCs体系,为后续研究BMP-2在小鼠BMSCs向成骨细胞分化过程中的作用提供了坚实基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
骨形态构建蛋白基因论文参考文献
[1].周珂,辛智倩,刘佩娟,马翠,师长宏.骨形态发生蛋白9基因敲除小鼠的构建[J].中国实验动物学报.2019
[2].吴星,吴立忠,詹洋,康荣彬.高表达骨形态发生蛋白2小鼠骨髓间充质干细胞体系的构建及基因表达的研究[J].福建医药杂志.2018
[3].栾永.在体转染RNA干扰沉默气道高敏感反应小鼠骨形态构建蛋白-2基因的研究[J].中华实用诊断与治疗杂志.2014
[4].杨晓喻,李世轶,张迪,吴颖,杨涛.人骨形态发生蛋白2真核表达载体构建及其基因/壳聚糖纳米复合体制备[J].华西口腔医学杂志.2014
[5].丁立峰,周振东,杨军,郑刚,李建军.骨形态发生蛋白2基因转染的兔骨髓间充质干细胞复合聚乳酸-聚己内酯支架体外构建载基因仿生骨的实验研究[J].中国矫形外科杂志.2013
[6].孙欣,曾荣,吴浩俊,胡资斌,陈思圆.转染骨形态发生蛋白-2基因的血管内皮祖细胞的构建[J].广东医学.2013
[7].邱俊钦,尹承慧,曾昭勋,陈宗雄.人骨形态发生蛋白2基因重组腺病毒的构建与鉴定[J].中国组织工程研究.2012
[8].赵瑾,陈洪,林陈水.骨形态发生蛋白-2基因工程菌的构建及可溶性研究[J].浙江工业大学学报.2012
[9].刘梦桃,张庆鸿,梁星.壳聚糖-人骨形态发生蛋白-2纳米粒基因载体的构建分析[C].中华口腔医学会口腔材料学专业委员会第七次全国口腔材料学术交流会论文汇编.2011
[10].刘梦桃,张庆鸿,翟浚江,梁星.壳聚糖-人骨形态发生蛋白-2纳米粒基因载体的构建分析[J].四川大学学报(医学版).2011
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