牛分枝杆菌PPE68与Mb1230以及PPE57和PE-PGRS35的表达纯化及其在牛结核病血清学诊断中的初步应用

牛分枝杆菌PPE68与Mb1230以及PPE57和PE-PGRS35的表达纯化及其在牛结核病血清学诊断中的初步应用

论文摘要

为筛选和评估牛分枝杆菌毒力菌株与卡介苗(BCG)基因差异区域(region ofdifferences,RD)蛋白在牛结核病诊断中的效果,本研究表达了牛分枝杆菌RD1区的PPE68、RD9区的Mb1230、R11区的PPE57和RD2区的PE-PGRS35,并纯化得到纯度大于90%的重组蛋白。通过优化条件建立了间接ELISA检测方法,并采用该方法检测了结核病阳性牛和健康牛血清中针对PPE68、Mb1230、PPE57和PE-PGRS35的IgM和IgG抗体水平,评价其在牛结核病血清学诊断中的潜力。结果显示,在结核病阳性牛中,针对PPE68、Mb1230、PPE57和PE-PGRS35的IgG抗体检出率分别为13.3%、43%、50%和30%,IgM抗体检出率分别为30%、10%、36%和33%。结果表明,R11区的PPE57和RD2区的PE-PGRS35有潜力作为牛结核病血清学检测的候选抗原,用于牛结核病的诊断。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 菌株和载体
  •   1.2 主要试剂
  •   1.3 牛结核病阳性血清和阴性血清
  •   1.4 重组质粒的构建
  •   1.5 重组蛋白的表达和纯化
  •   1.6 重组蛋白的Western-blot鉴定
  •     1.6.1 抗His标签抗体的Western-blot检测
  •     1.6.2 牛阳性血清的Western-blot检测
  •   1.7 检测IgM抗体间接ELISA方法的建立
  •   1.8 结核病阳性牛和阴性牛IgM抗体水平的间接ELISA检测
  •   1.9 结核病阳性牛和阴性牛IgG抗体水平的间接ELISA检测
  • 2 结果
  •   2.1 重组质粒的构建
  •   2.2 重组蛋白的表达和纯化
  •   2.3 重组蛋白的Western-blot鉴定
  •   2.4 检测IgM抗体间接ELISA方法的建立
  •   2.5 结核病阳性牛和阴性牛血清中针对重组蛋白IgM抗体水平的检测
  •   2.6 结核病阳性牛和阴性牛血清中针对重组蛋白IgG抗体水平的检测
  • 3 讨论
  • 4 结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 李明,张雅娜,林伟东,隋修锟,贾红,侯绍华,姜一曈,房立春,朱鸿飞,鑫婷

    关键词: 牛分枝杆菌,血清学检测,重组蛋白

    来源: 中国兽医科学 2019年01期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所,比利时列日大学让布鲁农学院分子生物学实验室

    基金: 国家自然科学基金项目(31602086),“十三五”国家重点研发计划项目(2016YFD0500902,2017YFD0500906),北京市自然科学基金项目(6164039)

    分类号: S852.618

    DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0007

    页码: 20-28

    总页数: 9

    文件大小: 1460K

    下载量: 107

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