导读:本文包含了人纤溶酶原论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:乳腺,转基因,血栓,丝氨酸,上皮细胞,组织,特异性。
人纤溶酶原论文文献综述
葛秋月[1]（2019）在《人纤溶酶原丝氨酸蛋白酶结构域制备及其对巨噬细胞极化影响的探究》一文中研究指出人纤溶酶是人体血液中的具有溶解多种蛋白作用的酶,在体内多种正常及病理状态发挥作用。现已有研究表明,人纤溶酶不但可以降解纤维蛋白,其与其酶原形式也可直接作用于白细胞,参与免疫调节。目前已证实人纤溶酶及人纤溶酶原可影响巨噬细胞极化作用及促进中性粒细胞凋亡和胞葬作用。但天然人纤溶酶及其酶原来源有限,仅能从人血浆中纯化分离。且由于其分子量较大,分子结构复杂,难以重组表达。但人纤溶酶原的丝氨酸蛋白酶结构域(Plasminogen Serine Protease Domain,Plg-SP)被激后可保留完整的人纤溶酶活性,且分子量小,结构相对简单。故本文利用毕赤酵母表达系统构建表达了人纤溶酶原的丝氨酸蛋白酶结构域,并对其对巨噬细胞极化的影响做了初步探究。本文利用基因工程方法,使用X33组成型毕赤酵母表达菌株构建表达了人纤溶酶原丝氨酸蛋白酶结构域。并通过亲和层析纯化得到纯度为97%的蛋白样品,样品经鉴定为构建蛋白,且浓度为0.53mg/ml,为后续研究提供了满足需要的蛋白样品。本文就人纤溶酶原丝氨酸蛋白酶结构域对两种来源巨噬细胞极化的影响做了初步探究。研究发现,经Plg-SP蛋白刺激后,鼠源巨噬细胞RAW264.7及人源巨噬细胞MV-4-11中M2型巨噬细胞表面标志物Arg-1和CD206基因表达水平明显升高,而M1型巨噬细胞表面标志物iNOS基因表达水平显着降低。初步的研究表明,Plg-SP可影响巨噬细胞向M2方向极化。(本文来源于《吉林大学》期刊2019-06-01）
马洁雪,吴乐乐,丁向真,李志英,王盛[2]（2019）在《在烟草叶片中瞬时表达具有生物活性的重组人纤溶酶原激活剂》一文中研究指出目的探索在植物中瞬时高效表达重组人纤溶酶原激活剂(rhPA)的可行性,探寻低成本rhPA表达新途径。方法构建表达rhPA的烟草花叶病毒(TMV)表达载体pTMV rhPA-NSK和Zera融合标签植物表达载体pJ Zera-rhPA;农杆菌渗滤接种受体植物Nicotiana benthamiana和N. excelsiana叶片;观察叶片接种部位表型变化;Western blot和ELISA测定和分析rhPA在受体烟草中的表达情况及表达产物特点;纤维蛋白琼脂糖平板法评价rhPA的体外生物活性。结果病毒载体实验结果显示,pTMV rhPA-NSK病毒载体在N. benthamiana和N. excelsiana叶片接种部位产生不同程度的坏死症状;在坏死组织中依然存在完整的rhPA蛋白;N. benthamiana中rhPA的表达量略高于N. excelsiana(P<0.05),约占接种叶片可溶性总蛋白的0.6%;表达的rhPA具有体外溶栓活性。Zera融合标签实验结果显示,pJ Zera-rhPA表达载体在烟草叶片接种部位未造成坏死;Zera标签与其融合蛋白rhPA之间可能存在着易断裂位点;Zera标签蛋白微粒的形成是一种逐步积累聚集的过程;在微粒形成过程中,部分可溶性多肽可能被包裹进了微粒。结论在烟草中可以快速地表达具有生物学活性的rhPA,植物病毒表达系统为低成本rhPA的生产提供一种富有潜力的新平台。(本文来源于《南方医科大学学报》期刊2019年05期）
陈秀[3]（2018）在《人纤溶酶原Kringle 5与电压依赖性阴离子通道蛋白VDAC1的相互作用研究》一文中研究指出恶性肿瘤已成为威胁人类生命健康的重大疾病之一。现有研究证实,人纤溶酶原Kringle 5通过与电压依赖性阴离子通道蛋白VDAC1相互作用来诱导细胞凋亡,抑制肿瘤增长。但二者之间具体的相互作用尚不清楚。对此,本研究采用分子动力学模拟和实验相结合的方法,对人纤溶酶原Kringle 5与VDAC1的相互作用机理进行了研究。利用分子动力学模拟得到二者相互作用的轨迹。对两者相互作用的氨基酸分析,发现二者通过氢键,静电力与范德华力相互作用,对构象变化进行分析,发现复合物中由268VAL,269ASN,270ALA与由165THR,166GLN,167SER构成的β片层消失变为无规则卷曲;由162SER,163ARG,164VAL与由327PRO,328GLU,329THR构成的无规则卷曲变为了小的β片层,且163ARG,166GLN分别通过氢键与Kringle 5中的361TYR和357PRO产生作用。对结合能量进行了分析并分解,发现二者的结合可以自发进行,且静电力为二者相互作用的主要驱动力,29GLU为二者相互作用的关键氨基酸。对关键氨基酸进行了突变研究,也从反面验证了二者之间存在相互作用。实验方面采用了前沿色谱法和表面等离子共振来研究。结果表明Kringle 5能与VDAC1发生相互作用。前沿色谱中,结合常数采用两种方法计算得到分别为3.63×10~6 L/mol,3.5×10~6 L/mol,用SPR法得到的结合常数为1.63×10~4 L/mol。这些参数均能从实验方面验证VDAC1与Kringle 5之间的相互作用。(本文来源于《西北大学》期刊2018-06-01）
岳胜兰,李策生[4]（2017）在《人纤溶酶原/纤溶酶的研究进展》一文中研究指出人纤溶酶(plasmin,Plm)是人纤溶酶原(plasminogen,Plg)的活化形式,其为纤溶系统的重要组成部分。Plg/Plm的生理功能使其在临床中具有很好的应用前景,目前已有Plg/Plm产品进入临床试验阶段。本文就Plg/Plm转化机制、相关疾病及功能、临床(前)研究以及生产工艺作一综述。(本文来源于《中国生物制品学杂志》期刊2017年02期）
岳胜兰,李策生[5]（2016）在《人纤溶酶原/纤溶酶的研究进展》一文中研究指出人纤溶酶(Plasmin,Plm),人纤溶酶原(Plasminogen,Plg)的活化形式,是纤溶系统的重要组成部分。Plg/Plm的生理功能使其在临床中有很好的应用前景,目前已有Plg/Plm产品进入临床实验阶段。本文就Plg/Plm转化机制、相关疾病、功能、临床(前)研究、以及生产工艺作一综述。(本文来源于《中国输血协会第八届输血大会论文专辑》期刊2016-11-08）
成勇,陆睿,宋绍征,陈思,姜磊[6]（2016）在《转基因兔乳腺特异性表达重组人纤溶酶原激活剂(rhPA)及其药效学研究》一文中研究指出自上世纪以来,血栓性疾病一直是危害人类健康和生命安全的头号因素,溶栓疗法是目前临床上使用最广泛而有效的一种治疗方法,而且溶栓药物已经历了叁代发展。重组人纤溶酶原激活剂(rhPA)是一种丝氨酸蛋白酶,能够高效特异地溶解血栓,属的第叁代溶栓药物。本研究构建了rhPA乳腺特异性表达载体,应用到转基因兔制备一种新颖、高效的溶栓药物。相关研究方法和结果如下:在获得rhPA表达兔(1mg/mL)以上的基础上,应用3株自制的高效价小鼠单克隆抗体制备亲和层析柱。通过离心脱脂、饱和硫酸铵沉淀、超滤及透析等兔乳前处理,获得粗纯品。将C4株抗体与CNBr activated Bestarose 4FF偶联来制备免疫亲和层析柱。0.75mol/L硫酸铵斗40%丙二醇的TE缓冲液(pH7.9)洗脱获得半纯品。Sephedex75凝胶过滤纯化目标蛋白,获得纯度96%-99%rhPA。与阿替普酶对照品相比,圆二色谱分析显示,该纯化产物与阿替普酶有相似的二级结构;FAPA测定纯化产物rhPA的体外溶栓比活性,其值高达约214倍,远远高于阿替普酶溶栓药。纯品经去内毒素处理后,分别以0.3mL/只小鼠腹腔注射角叉菜胶诱导的尾部血栓小鼠,结果显示以不同的"给药"浓度0.1mg/只剂量组、0.4mg/只剂量组、1.6mg/只剂量组及阿替普酶、生理盐水对照组对小鼠进行溶栓试验,结果显示rhPA各剂量组能有效消除小鼠尾部血栓。结果表明,转基因兔表达产物rhPA能够能够从兔奶中分离纯化出来;纯化产物具有高回收率、高纯度、高生物活性,体内外溶栓试验显示rhPA具有较阿替普酶更好的疗效。同时表明已经建立一套比较完备的转基因动物制药下游技术体,这在国内外尚未见报道,为以后大量生产新型溶栓药物提供了新的思路,也为后期进一步临床试验奠定了基础。(本文来源于《中国畜牧兽医学会兽医产科学分会第十叁次学术研讨会论文集》期刊2016-10-22）
宋绍征[7]（2016）在《转基因兔乳腺特异性表达重组人纤溶酶原激活剂（rhPA）及其药效学研究》一文中研究指出自上世纪以来,血栓性疾病一直是危害人类健康和生命安全的头号因素,溶栓疗法是目前临床上使用最广泛而有效的一种治疗方法,而且溶栓药物已经历了叁代发展。人组织纤溶酶原激活剂(tissue-type plasminogen activator, t-PA)是由血管内皮细胞合成并分泌的一种丝氨酸蛋白酶,能够高效特异地溶解血栓,是一种良好的第二代溶栓药物。重组人纤溶酶原激活剂(recombinant human plasminogen activator, rhPA)是天然t-PA的重组突变体,属于新型第叁代溶栓药物,具有较天然t-PA更加优越的溶栓功能。利用动物乳腺生物反应器来生产t-PA及其重组突变体,具有产量高、成本低、翻译后修饰、生物活性高等优于其它表达系统的特点。应用多种纯化技术相结合的策略,能够方便、快捷、高效地将目标蛋白从动物乳汁中分离纯化出来。现今,国内外已有很多关于以上研究内容的报道。本研究目的旨在：将构建正确而有效的rhPA乳腺特异性表达载体(F、E、K1区缺失重组体t-PA)应用到转基因兔中,研究其表达水平和活性功能,以期获得高效表达rhPA的转基因兔；研究各种分离纯化表达兔乳中rhPA的方法和策略,以期获得高纯度、高回收率、高活性的rhPA;研究小鼠血栓和溶栓模型,以期获得最佳的动物溶栓效果；同时,还研究了rhPA单克隆抗体的制备和筛选方法,以期获得能够用作亲和层析配体的多羟基反应单克隆抗体(PR-mAb)。从而,最终获得一种新颖、高效的溶栓药物。相关研究方法和结果如下：1.采用常规分子生物学技术,分别以山羊p-酪蛋白基因(β-casein)、山羊p-乳球蛋白基因(BLG)和牛αs1酪蛋白基因(asl-casein)作为调控元件,以天然t-PA的F、E、K1区缺失体作为编码蛋白序列,构建了乳腺特异性表达载体PCL25/rhPA、BLC14/rhPA和AP/rhPA。经酶切图谱和测序比对结果显示,构建的载体与理论序列完全一致。2.通过胶原酶消化组织法建立山羊乳腺上皮细胞分离培养体系,电转染叁种载体,经600μg/mL G418筛选两周后,挑取生长旺盛、状态较好的单克隆细胞集落,传代扩大培养。经PCR检测,PCL25/rhPA、BLC14/rhPA、AP/rhPA叁种载体分别获得了79株、66株、63株整合阳性单克隆细胞株,并应用51μM催乳素进行诱导表达。ELISA检测72h后细胞诱导上清液,25株转PCL25/rhPA基因细胞株高水平表达rhPA,3株转BLC14/rhPA基因细胞株表达rhPA,而转AP/rhPA基因细胞株未见表达。经纤维蛋白平板溶圈法(FAPA)检测,所有诱导表达上清液均具有体外溶栓活性功能。结果表明,在细胞水平,PCL25/rhPA和BLC14/rhPA载体能够有效地驱动rhPA基因特异性表达,且PCL25/rhPA载体的表达水平明显高于其它两种载体。从而,验证了构建的PCL25/rhPA载体是合理而有效的。3.将以上叁个构建(PCL25/rhPA、BLC14/rhPA、AP/rhPA)经显微注射导入到兔受精卵中,共移植94只受体,妊娠71只,出生319只仔兔,PCR检测85只为转基因整合阳性兔,妊娠率为75.5%(71/94),整合率为26.6%(85/319)。ELISA检测57只存活转基因兔(或后代)乳汁,共12只乳腺特异性表达rhPA (PCL25/rhPA11只,BLC14/rhPA1只),表达水平约在5.2-630 μg/mL之间。SDS-PAGE电泳和Western Blot检测该12只兔乳,均出现约39KDa大小的目标特异性条带。FAPA结合ELISA测定表达产物的体外溶栓比活性,最高可达360倍左右(A29,与阿替普酶相比)。测交检测高表达水平的A29系转基因兔,1只F2代(A29F2-09)的所有后代仔兔均为整合阳性(100%,13/13)；Real-time PCR检测相对拷贝数,该只兔约是其它同系转基因兔的2倍。从而,证明了A29F2-09为纯合子转基因兔,且rhPA表达水平约1000μg/mL,明显高于非纯合子兔；不同系转基因兔拷贝数与表达水平间没有相关性。以上结果表明,PCL25/rhPA载体能够在转基因兔乳腺中高效表达活性rhPA;表达水平主要与整合位点有关；当整合位点一致时,表达水平随拷贝数的增加也相应地累积提高。4.通过传统弗氏佐剂和快速免疫佐剂两种方法免疫小鼠,结果显示在免疫小鼠血清效价、免疫原剂量和免疫周期上,快速免疫佐剂都大大地优越于弗氏佐剂(1010/109,20μg/1300μg,35d/70d)。通过电脉冲和化学PEG两种方法将免疫后的小鼠脾脏淋巴细胞与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,结果显示电融合效率明显高于化学PEG融合(166%/88.4%)。通过HAT和HT筛选及有限稀释法亚克隆后,共获得12株能够稳定分泌高效价抗体的杂交瘤细胞株(标号Cl-C12)。ELISA-elution检测,有3株为多羟基反应单克隆抗体(PR-mAb,标号C1、C4、C8),占单克隆抗体总数的25%(3/12)。小鼠腹腔诱导法大量制备抗体,C1、C4、C8株腹水效价分别是108、1010、108,且无交叉非特异性反应,能够为亲和层析所用。5.通过离心脱脂、35%饱和硫酸铵沉淀、超滤及透析等方法进行兔乳前处理,获得粗纯样品。将C4株抗体与CNBr activated Bestarose 4FF偶联来制备免疫亲和层析柱,偶联率高达96.5%。尝试五种不同的洗脱液(A:0.1mol/L甘氨酸,pH2.5;B:0.1mol/L甘氨酸,pH3.5；C:0.1mol/L甘氨酸,pH5.0; D:0.75mol/L硫酸铵+40%丙二醇的TE缓冲液,pH7.9; E:0.2M NaH2PO4-柠檬酸,pH2.2),来探索最佳洗脱效果的条件,结果显示0.75mol/L硫酸铵+40%丙二醇的TE缓冲液(pH7.9)洗脱效果最佳,但pH较低的强酸缓冲液(A、B、E)也能够达到洗脱要求,而pH较高的C洗脱液则出现杂蛋白较多且回收率低。再尝试Chromdex75 prep grade凝胶过滤预装柱来进一步分离纯化目标蛋白rhPA,上样体积为1%和2.5%能够将目标蛋白完全分开,出现两个独立的峰；而上样体积为5%则不能够将目标蛋白完全分开,出现两个相互交叉重迭峰。经免疫检测及飞行时间质谱鉴定该纯化产物为目标rhPA。与BSA对照品相比,双向电泳结果显示,纯化产物的大小约39KDa(在35-40KDa之间),等电点约7.1(BSA等电点约4.7),纯度可达96%-99%或更高(BSA纯度96%-99%)。与阿替普酶对照品相比,圆二色谱分析显示,该纯化产物与阿替普酶有相似的二级结构；FAPA测定纯化产物rhPA的体外溶栓比活性,其值高达约214倍,远远高于阿替普酶溶栓药。6.以HitrapTM CaptoTM Q-1mL离子交换柱去内毒素,经试剂盒测试,内毒素含量低于0.015EU/mL.分别以0.3mL/只小鼠腹腔注射1%、0.5%、0.1%、0.05%、0.01%浓度的角叉菜胶,来探索诱导小鼠尾部血栓形成的最佳条件,结果显示以0.05%浓度的角叉菜胶诱导小鼠尾部血栓形成条件最佳。以不同的“给药”浓度(低剂量组0.1mg/只、中剂量组0.4mg/只、高剂量组1.6mg/只及阿替普酶、生理盐水对照组)对小鼠血栓模型病进行治疗,结果显示纯化产物rhPA作为溶栓药物治疗小鼠尾部血栓,在效果和剂量上明显优越于阿替普酶,且rhPA高剂量组(1.6mg/只)在叁次给药后(32h)能够完全治愈小鼠尾部血栓疾病。以上结果表明,我们构建的F、E、K1区缺失重组体t-PA (PCL25/rhPA载体)是合理、有效的,且能够在转基因兔乳腺中高效表达；表达产物rhPA能够相对单独地存在于兔乳中,且能够被分离纯化出来；纯化产物具有高回收率、高纯度、高生物活性功能,且能够用于动物溶栓模型试验,具有较阿替普酶对照品更好的疗效。同时,也证明了我们所建立的这一整套技术体系是相对完善、可行的,在国内外较少见报道,为以后大量新型重组溶栓药物的研发提供了新的思路,也为后期进一步临床试验奠定了扎实的基础。(本文来源于《扬州大学》期刊2016-06-01）
陆睿,宋绍征,祁正强,葛欣,邵宾[8]（2015）在《重组人纤溶酶原激活剂转基因兔的制备及其表达产物的检测》一文中研究指出人组织纤溶酶原激活剂(ht-PA)是临床血栓疾病治疗的主要生物药品,应用转基因动物乳腺生物反应器制备已有报道,但重组人纤溶酶原激活剂(rh PA)在转基因动物中表达尚未见报道。设计了以人t-PA的F、E、K1区位点缺失体为编码序列,以山羊β-酪蛋白/CMV杂合启动/增强子,构建了乳腺特异性表达载体PCL25/rh PA,通过受精卵原核显微注射法制备转基因兔。用PCR检测及其产物测序筛选转基因兔,ELISA试剂盒及纤维蛋白平板溶圈法检测转基因兔的表达产物。实验获得原代转基因兔5只(2♂,3♀),其中2只乳腺中表达人重组纤溶酶原激活剂,rh PA浓度最高可达400μg/m L,表达产物比活性是现有阿替普酶的150-200倍。实验结果表明,重组人纤溶酶原激活剂(rh PA)可以在山羊β-酪蛋白/CMV杂合启动/增强子调控下获得乳腺特异性表达,表达重组蛋白具有较高的溶栓活性。(本文来源于《生物技术通报》期刊2015年10期）
崔佳,万翠香[9]（2015）在《人纤溶酶原丝氨酸蛋白酶(SP)活性区基因的克隆、表达与功能研究》一文中研究指出目的克隆和表达人纤溶酶原(plasminogen,Plg)的丝氨酸蛋白酶(SP)活性区基因μplg,并进行重组蛋白的纯化及功能探索。方法用PCR方法从p DNR-plg质粒上扩增μplg,构建原核表达载体p ET22b(+)-μplg,IPTG诱导重组蛋白表达后复性,再经Ni+-NTA树脂亲和层析纯化,通过与双歧杆菌外膜蛋白Serpin的共孵育实验来探索μPlg的功能。结果 PCR成功扩增出了680 bp的人纤溶酶原Plg的SP区基因μplg,测序正确后与表达载体p ET22b(+)重组,重组质粒p ET22b(+)-μplg在大肠杆菌BL21中成功表达出分子量约为35 k D的μPlg蛋白质,经纯化后的蛋白纯度高达约90%以上,与Serpin蛋白共孵育后得到了二者的复合物。结论人纤溶酶原μPlg的成功克隆、表达及纯化对于研究SP区功能和与双歧杆菌的黏附作用有重要意义。(本文来源于《山西医科大学学报》期刊2015年10期）
祁正强[10]（2015）在《重组人纤溶酶原激活剂（rhPA）转基因兔纯合子的筛选及表达特性》一文中研究指出血栓性疾病是一类严重危害人类健康和生命的疾病,可累及全身各个器官及系统,目前利用溶栓药物成为治疗此类疾病的主要方法。溶栓药物经过不断研究已发展到第叁代,其中以重组人纤溶酶原激活剂(r-tPA)作为治疗人类血栓性疾病的新型药物。重组人组织纤溶酶原激活剂与天然t-PA具有相似的生物学活性,更具有溶栓能力强、与纤维蛋白亲和力高、全身出血副作用小、半衰期长、总使用剂量少等特点。作为第叁代溶栓药物的新型代表,重组人纤溶酶原激活剂越来越受到血栓病患者的青睐,具有广阔的应用前景。外源基因在转基因纯合子动物的整合拷贝数是转基因半合子动物的两倍。本研究旨在筛选出转rhPA基因纯合子兔,比较外源基因rhPA在转基因纯合子兔和转基因半合子兔乳腺中的表达水平,探索在整合位点相同时,rhPA在转基因兔乳腺中的表达量与其拷贝数之间的关系。筛选高水平表达的转基因纯合子兔,培育用于生物制药的rhPA的转基因纯合子兔品系,为以后大规模制备溶血栓生物药品建立基础,并且用于药理学和生物学活性分析,有利于后期药品开发应用。本研究应用已经构建的乳腺特异表达载体PCL25/rhPA,通过原核期受精卵显微注射制备转rhPA基因家兔。经过PCR整合检测和ELISA表达检测筛选出原代转基因表达兔。F1代转基因表达兔兄妹同胞交配或回交获得F2代转基因兔,通过对F2代转基因兔测交筛选出其中的转基因纯合子兔。ELISA检测比较转基因纯合子兔与半合子兔乳清中rhPA的表达水平。实验以成年新西兰母兔为实验动物,将rhPA基因片段通过显微注射导入受精卵,移植受体64只,其中46只怀孕,出生仔兔207只,PCR整合阳性兔56只,存活37只。妊娠率为71.9%,阳性整合率为27.1%。ELISA检测37只转基因兔(或后代)乳汁,其中12只兔乳腺特异性表达rhPA。获得的rhPA基因表达公兔K29与正常新西兰母兔交配,共获得了F1代仔兔25只,经PCR检测筛选出F1代转基因兔16只,其中母兔10只,公兔6只。从F1代转基因兔中挑选公兔和母兔同胞交配,共获得F2代仔兔10只,经PCR检测筛选出F2代转基因兔5只,其中母兔4只,公兔1只。将F2代转基因兔再与正常兔测交配种,通过对后代的PCR检测,筛选出F2代中转基因纯合子兔。我们从F2代转基因兔中筛选出2只雌性转rhPA基因纯合子兔(编号K29 F2-05和K29 F2-09)。通过对K29 F2-09奶样的ELISA检测,发现其乳汁中重组人纤溶酶原激活剂(rhPA)的表达水平明显高于半合子转基因兔。本研究获得了乳腺特异性表达转基因兔,建立了PCL25/rhPA转基因兔基本繁殖群(K29系),并培育筛选出2只转rhPA基因纯合了母兔(编号K29 F2-05和K29 F2-09),经ELISA检测结果显示K29 F2-09母兔奶样中的rhPA表达量明显高于转rhPA基因半合子兔。实验研究结果证明PCL25/rhPA在转基因纯合子兔乳腺中的表达量高于转基因半合子兔的表达量。本研究验证了以培育转基因纯合子动物来提高外源基因表达量的可行性,为建立PCL25/rhPA转基因纯合子兔新品系做好铺垫,更为大量研制新型溶栓制剂奠定了基础。(本文来源于《扬州大学》期刊2015-06-17）
人纤溶酶原论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的探索在植物中瞬时高效表达重组人纤溶酶原激活剂(rhPA)的可行性,探寻低成本rhPA表达新途径。方法构建表达rhPA的烟草花叶病毒(TMV)表达载体pTMV rhPA-NSK和Zera融合标签植物表达载体pJ Zera-rhPA;农杆菌渗滤接种受体植物Nicotiana benthamiana和N. excelsiana叶片;观察叶片接种部位表型变化;Western blot和ELISA测定和分析rhPA在受体烟草中的表达情况及表达产物特点;纤维蛋白琼脂糖平板法评价rhPA的体外生物活性。结果病毒载体实验结果显示,pTMV rhPA-NSK病毒载体在N. benthamiana和N. excelsiana叶片接种部位产生不同程度的坏死症状;在坏死组织中依然存在完整的rhPA蛋白;N. benthamiana中rhPA的表达量略高于N. excelsiana(P<0.05),约占接种叶片可溶性总蛋白的0.6%;表达的rhPA具有体外溶栓活性。Zera融合标签实验结果显示,pJ Zera-rhPA表达载体在烟草叶片接种部位未造成坏死;Zera标签与其融合蛋白rhPA之间可能存在着易断裂位点;Zera标签蛋白微粒的形成是一种逐步积累聚集的过程;在微粒形成过程中,部分可溶性多肽可能被包裹进了微粒。结论在烟草中可以快速地表达具有生物学活性的rhPA,植物病毒表达系统为低成本rhPA的生产提供一种富有潜力的新平台。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
人纤溶酶原论文参考文献
[1].葛秋月.人纤溶酶原丝氨酸蛋白酶结构域制备及其对巨噬细胞极化影响的探究[D].吉林大学.2019
[2].马洁雪,吴乐乐,丁向真,李志英,王盛.在烟草叶片中瞬时表达具有生物活性的重组人纤溶酶原激活剂[J].南方医科大学学报.2019
[3].陈秀.人纤溶酶原Kringle5与电压依赖性阴离子通道蛋白VDAC1的相互作用研究[D].西北大学.2018
[4].岳胜兰,李策生.人纤溶酶原/纤溶酶的研究进展[J].中国生物制品学杂志.2017
[5].岳胜兰,李策生.人纤溶酶原/纤溶酶的研究进展[C].中国输血协会第八届输血大会论文专辑.2016
[6].成勇,陆睿,宋绍征,陈思,姜磊.转基因兔乳腺特异性表达重组人纤溶酶原激活剂(rhPA)及其药效学研究[C].中国畜牧兽医学会兽医产科学分会第十叁次学术研讨会论文集.2016
[7].宋绍征.转基因兔乳腺特异性表达重组人纤溶酶原激活剂（rhPA）及其药效学研究[D].扬州大学.2016
[8].陆睿,宋绍征,祁正强,葛欣,邵宾.重组人纤溶酶原激活剂转基因兔的制备及其表达产物的检测[J].生物技术通报.2015
[9].崔佳,万翠香.人纤溶酶原丝氨酸蛋白酶(SP)活性区基因的克隆、表达与功能研究[J].山西医科大学学报.2015
[10].祁正强.重组人纤溶酶原激活剂（rhPA）转基因兔纯合子的筛选及表达特性[D].扬州大学.2015
论文知识图
