利用CRISPR技术鉴定拟南芥miR171a的功能

利用CRISPR技术鉴定拟南芥miR171a的功能

论文摘要

miRNA是一段长约21 nt的RNA小分子,能够影响多种植物生理生化功能。CRISPR/Cas9是近年发展的可以靶向编辑DNA序列的技术,已广泛应用于多种植物。miR171a是一类保守的miRNA家族,参与对植物生长发育和逆境胁迫的调控。利用CRISPR/Cas9技术鉴定拟南芥miR171a的功能,结果表明基因编辑拟南芥株系中的miR171a表达量降低,靶基因SCL22表达量上调。干旱处理后基因编辑拟南芥株系中的脯氨酸含量上升幅度小于野生型。基因编辑拟南芥株系的叶绿素含量有不同程度的降低,株高和生长势增强。干旱胁迫结果显示对miR171的抑制使得拟南芥抗旱能力减弱,表明利用CRISPR技术鉴定miRNA的功能是有效的。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 实验材料
  •     1.1.1 植物材料
  •     1.1.2 菌株和质粒
  •     1.1.3 试剂
  •     1.1.4 数据处理方法
  •   1.2 实验方法
  •     1.2.1 靶位点的选取
  •     1.2.2 CRISPRCas9-miR171a载体构建
  •     1.2.3 拟南芥的遗传转化与阳性株检测
  •     1.2.4 miR171a及靶基因的qRT-PCR
  •     1.2.5 基因编辑拟南芥株系的农艺性状与抗旱性鉴定
  • 2 结果与分析
  •   2.1 CRISPR-Cas9在拟南芥中的编辑效率与类型
  •     2.1.1 T0代编辑结果
  •     2.1.2 T1代编辑结果
  •   2.2 miR171a靶基因的表达分析
  •   2.3 基因编辑拟南芥抗旱性鉴定
  •     2.3.1 脯氨酸含量
  •     2.3.2 叶绿素含量
  •     2.3.3 生长势分析
  •     2.3.4 干旱胁迫鉴定
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 黄格格,张静文,张天豹,柯智,翟楠鑫,龙艳,袁潜华,裴新梧

    关键词: 干旱胁迫

    来源: 中国农业科技导报 2019年05期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学

    单位: 海南大学热带农林学院,中国农业科学院生物技术研究所农业农村部转基因安全评价重点实验室

    基金: 国家转基因生物新品种培育重大专项(2006ZX08011-001),国家自然科学基金项目(31570330,31560188)资助

    分类号: Q943.2

    DOI: 10.13304/j.nykjdb.2019.0027

    页码: 26-32

    总页数: 7

    文件大小: 570K

    下载量: 305

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