羊口疮病毒安徽株023基因的原核表达与生物信息学分析

羊口疮病毒安徽株023基因的原核表达与生物信息学分析

论文摘要

试验旨在克隆表达羊口疮病毒安徽株023基因,对该基因进行PCR扩增、亚克隆及表达,通过蛋白表达纯化后进行SDS-PAGE和Western blot鉴定,并利用生物信息学软件预测该基因编码的蛋白的理化性质、二级结构、信号肽、跨膜结构域等。结果显示,023基因全长819 bp,编码272个氨基酸,蛋白大小约为42 ku,主要以包涵体的形式表达且有良好的反应原性。生物信息学分析表明,该蛋白是亲水稳定蛋白,其中α-螺旋(h)占27. 57%,延伸链(e)占17. 28%,β-转角(t)占12. 13%,无规则卷曲(c)占43. 01%,无信号肽区域和跨膜结构域,可能存在30个磷酸化位点,4个B细胞抗原表位,3个CTL表位和3个Th表位。研究结果不仅有助于了解羊口疮病毒023基因的结构与功能,还能为建立快速诊断的检测方法提供参考。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 试验材料
  •   1.2 主要试剂
  •   1.3 试验方法
  •     1.3.1 引物设计与基因扩增
  •     1.3.2 重组质粒pET-32a (+) -023构建
  •     1.3.3 重组蛋白的诱导表达
  •     1.3.4 重组蛋白的纯化
  •     1.3.5 Western-blot检测
  •     1.3.6 鼠源多抗血清的制备
  •     1.3.7 ORFV 023蛋白的生物信息学分析
  • 2 结果与分析
  •   2.1 023基因的扩增
  •   2.2 重组质粒p ET-32a (+) -023的双酶切鉴定
  •   2.3 重组蛋白的SDS-PAGE分析
  •   2.3 Western-blot鉴定
  •   2.4 鼠源多抗Western-blot鉴定
  •   2.5 理化性质分析
  •   2.6 二级结构分析
  •   2.7 信号肽、跨膜结构域及磷酸化位点的预测分析
  •   2.8 B细胞抗原表位的预测分析
  •   2.9 T细胞表位的预测分析
  •     2.9.1 CTL表位预测
  •     2.9.2 Th表位预测分析
  • 3 讨论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 张高峰,杨侃侃,张谦,王元红,俞赵荣,张学琪,鲁智敏,刘自敏,李永东,王勇

    关键词: 口疮病毒,基因,克隆表达,生物信息学

    来源: 浙江农业学报 2019年01期

    年度: 2019

    分类: 农业科技,基础科学

    专业: 生物学,畜牧与动物医学

    单位: 安徽农业大学动物科技学院,宁波市疾病预防控制中心

    基金: 国家自然科学基金(31602063),安徽省自然科学基金(1508085QC60),安徽农业大学大学生科技创新基金项目

    分类号: S852.65

    页码: 30-38

    总页数: 9

    文件大小: 1355K

    下载量: 209

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