陈玉婷1曹永芬2马武开2钟琴2唐芳2黄颖2徐晖2
1.贵阳中医学院研究生院贵州贵阳550001；2贵阳中医学院第二附属医院贵州贵阳550003
摘要：三氧化二砷在类风湿关节炎（RA）模型大鼠关节滑膜细胞NF-kB信号调控的研究很多，通常为分组对照研究，发病大鼠腹腔连续注射三氧化二砷后处死取材、制片、染色、免疫组化检测，三氧化二砷注射治疗的大鼠关节滑膜NF-kB阳性染色强度低于未治疗RA组。三氧化二砷有一直分化和促使滑膜细胞凋亡的作用，可通过对NF-kB表达的干扰和活性的抑制达到抗炎目的，发挥治疗作用。
关键词：三氧化二砷；类风湿关节炎；滑膜细胞NF-kB信号通路；靶向干预
类风湿关节炎（RA）为常见慢性自身免疫性病变，临床表现主要为关节组织慢性炎症、持续性反复滑膜炎。临床上尚没有效果十分满意的RA治疗方案，但新型疗法层出不穷，备受关注[1]。关节滑膜部位的病变控制是治疗RA和改善预后的关键，临床上关于三氧化二砷治疗类风湿关节炎以及改善滑膜组织功能的研究很多，现综述如下。
1RA与滑膜细胞NF-kB信号通路关联
RA是集骨纤维化、骨质破坏、软骨吸收、慢性炎性反应于一体的慢性自身免疫性疾病，临床治疗以非特异性免疫制剂较为常见，效果较为满意。RA发生后，免疫系统多存在异常，关节骨组织、软骨组织因增生活化的滑膜细胞的影响而受到损伤，细胞凋亡的过程也是引发RA和促使RA进展的过程，两者密不可分，滑膜细胞在病理因素刺激下不断增生的现象也是因为滑膜细胞凋亡相对不足引起的。
滑膜组织不正常的增生现象是RA的主要表现，而这种增生的作用是在TNF-α等细胞因子的诱导下发生的。其可借由TRADD信号途径诱导滑膜组织等细胞发生凋亡，同时可通过刺激NF-kB信号的活化而对细胞凋亡的过程产生抑制和干扰作用。这种作用是受到TNF-α可结合不同的受体所决定的。滑膜细胞的凋亡信号也可能在NF-kB活化影响下发生阻断。NF-kB会在滑膜细胞发生凋亡之时发生解离，进入细胞核内，结合细胞核DNA上的kB序列，促使发生更强的细胞因子与炎性介质基因转录，NF-kB相关激活剂、诱导剂也是RA滑膜组织细胞表达中产生决定性影响的因素。
2三氧化二砷对RA滑膜细胞NF-kB信号通路靶向干预
2.1三氧化二砷干预方式
选取健康SD大鼠适应性喂养一周，随机分为对照组与治疗组，BCG灭活，加入10mg/ml的弗氏不完全佐剂，乳化、混合均匀，制成弗氏完全佐剂，将0.1ml福氏完全佐剂注入大鼠右后足足垫皮内，筛选关节炎评价合格的病鼠，治疗组予三氧化二砷治疗，将4mg/kg三氧化二砷液自腹腔注入，每日1次，连续1周；对照组将4mg/kg生理盐水自腹腔注入，每日1次，连续1周[2]。
3d后取材，腹腔注入水合氯醛麻醉处理，大剂量的水合氯醛致死后，将指间关节、足踝关节组织分离后，取出关节，先后以标本固定液、石蜡包埋处理3组右侧踝关节，制作滑膜组织切片并脱蜡、冲洗、PBS浸泡，去离子水孵育，山羊血清工作液滴加处理，孵育，辣根酶标记、DAB显色剂处理，蒸馏水冲洗、复染、水洗、脱水，透明处理后封片。以普通光镜放大200倍观察，NF-kBp65阳性表达即可见呈褐色，阳性越明显、染色越深。视野由计算机摄像系统采样、BioMias对图像中信号特点处理分析，计算阳性染色面积、吸光度数据。
2.2三氧化二砷对滑膜细胞NF-kB信号通路干预特点[3]
三氧化二砷干预后RA大鼠关节滑膜免疫组化检查可见，滑膜组织中相比无干预组有较弱的NF-kB染色强度，即阳性度降低，但依然较正常大鼠关节滑膜NF-kB阳性度高。仔细观察可见三氧化二砷干预后的RA滑膜下层淋巴细胞、衬里层淋巴细胞以及成纤维细胞、巨噬细胞中都集中分布着阳性细胞，且细胞核、细胞质都可见染色现象，前者着色更明显。RA大鼠连续予三氧化二砷干预7d后，滑膜NF-kB活性降低、表达强度减弱，处于无干预RA组与正常大鼠之间[4]。
滑膜炎作为RA发生和进展过程中最典型的病理特征，该处组织侵袭性、增生性的生长现象有着与肿瘤增殖相似的病理学特点。三氧化二砷早前在肿瘤的治疗中，作为凋亡诱导剂被研究和成功运用，疗效较为满意。根据肿瘤与RA相似的进展特点，临床上也开始了三氧化二砷在RA临床的治疗研究工作。三氧化二砷注入RA大鼠体内后，滑膜细胞以及巨噬细胞会在其作用下发生凋亡。砷与氨基酸、蛋白质的某些成分有很强亲和力，因而可以靶向结合蛋白质、氨基酸中的部分结构，从而强烈干扰不良细胞增生和代谢，降低跨膜电位，同时对Caspase产生激活作用，促进凋亡的发生。
三氧化二砷所诱导发生的细胞凋亡也受细胞周期本身的影响，若细胞正处于增生期，在三氧化二砷的作用下更易凋亡，反之则不容易在诱导下轻易凋亡。国内临床尝试三氧化二砷对RA滑膜NF-kB信号通道干预作用后，以显微镜高倍观察大鼠关节滑膜组织，没有发现典型形态的凋亡细胞，但在三氧化二砷的干预下，确实有炎症减轻的反应，有更低的细胞浸润现象与更少的滑膜层数，这都体现了三氧化二砷可直接调控NF-kB信号通道、影响滑膜细胞增殖[5]。
3小结
三氧化二砷干预RA大鼠滑膜NF-kB信号通道效果较强，使用三氧化二砷治疗RA模型鼠后，通过免疫组化染色分析方式测定NF-kB功能亚基的表达特点，可发现NF-kB活性大大削弱，滑膜细胞在三氧化二砷的干预下大量凋亡，反应了三氧化二砷在RA临床治疗中有理想的应用价值。
参考文献：
[1]刘红，高锦团.类风湿关节炎关节腔内治疗的新进展[J].医学综述，2010，16（7）：1064-1068.
[2]崔宁，杨娉婷，赵丽娟等.三氧化二砷在类风湿关节炎治疗中作用机制的探讨[J].中华风湿病学杂志，2006，10（7）：393-397，插2.
[3]韩锋，任洁，张鸽等.三氧化二砷对类风湿关节炎滑膜细胞凋亡的影响——附18例报告[J].新医学，2009，40（2）：80-82，113.
[4]王金帆，何成松.三氧化二砷对类风湿关节炎治疗作用机制的研究进展[J].西南军医，2013，（3）：274-277.
[5]吕昊哲，乔石钰，陈秀丽等.三氧化二砷诱导类风湿关节炎滑膜细胞凋亡作用的研究[J].中国康复理论与实践，2009，15（2）：141-142.