生长相关蛋白43通过抑制T细胞核因子1入核保护足细胞的机制

生长相关蛋白43通过抑制T细胞核因子1入核保护足细胞的机制

论文摘要

目的:探讨生长相关蛋白43(growth associated protein-43,GAP-43)通过抑制T细胞核因子1(nuclear factor of activated T-cells cytoplasmic 1,NFATc1)入核,从而保护足细胞的机制。方法:(1)通过免疫荧光染色及激光共聚焦显微镜,观察GAP-43在不同肾小球疾病患者足细胞中的表达情况。(2)体外培养小鼠永生化足细胞,用脂多糖(LPS)100μg/ml分别刺激足细胞0h、24h、48h、72h后,采用免疫荧光染色、实时荧光定量PCR(RT-PCR)和Western印迹检测GAP-43 mRNA和蛋白的表达。(3)通过Western印迹检测足细胞过表达GAP-43后对足细胞标志蛋白nephrin、钙调磷酸酶(calcineurin,CaN)及核内NFATc1蛋白表达的影响。(4)通过划痕实验观察足细胞的活动性。结果:(1)与正常肾组织相比,肾小球疾病患者肾组织足细胞GAP-43表达降低;(2)用LPS刺激足细胞,72h后GAP-43的表达降低最明显;(3)足细胞过表达GAP-43蛋白并用LPS刺激后,升高的CaN表达下降,NFATc1入核降低(P<0.05),降低的足细胞标志蛋白nephrin表达显著恢复(P<0.05)。(4)过表达GAP-43蛋白并用LPS刺激后,足细胞的活动性降低。结论:GAP-43在足细胞中表达,是足细胞的一个保护因子,可能通过参与CaN-NFAT信号通路,抑制NFATc1的入核来保护足细胞损伤。

论文目录

  • 材料与方法
  •   仪器和试剂
  •   足细胞的培养和实验分组条件
  •   免疫荧光
  •   Western印迹
  •   实时荧光定量PCR(RT-PCR)
  •   病毒感染
  •   划痕实验
  •   统计学方法
  • 结 果
  •   GAP-43在肾小球疾病患者肾组织的足细胞中表达降低
  •   LPS刺激下足细胞GAP-43表达减少
  •   过表达足细胞中GAP-43效率的验证
  •   过表达GAP-43后,LPS刺激所致的足细胞裂孔膜蛋白nephrin低表达有所恢复
  •   过表达GAP-43后,LPS刺激增加的CaN表达和核NFATc1表达降低
  •   过表达GAP-43足细胞的活动性降低
  • 讨 论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 连智雯,张丽,窦曹帅,张鸿,柯贵宝,陈雪芹,李卓,马建超,廖如意,何朝生,梁馨苓,刘双信

    关键词: 生长相关蛋白,足细胞,凋亡,细胞核因子

    来源: 肾脏病与透析肾移植杂志 2019年06期

    年度: 2019

    分类: 医药卫生科技

    专业: 泌尿科学

    单位: 南方医科大学第二临床医学院,广东省人民医院肾内科广东省医学科学院,华南理工大学医学院

    基金: 广州市科技计划项目(201707010009),国家自然科学基金面上项目(81670656,81870508),广东省博士后基金((2017M612624),广东省医学科学基金(A2017564),广东省自然科学基金项目(2018A030313260),广东省科技计划项目(2014A020209001,2015A020210069)

    分类号: R692

    页码: 526-531

    总页数: 6

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