碱性蛋白酶交联聚集体的制备及其催化性能研究

碱性蛋白酶交联聚集体的制备及其催化性能研究

论文摘要

碱性蛋白酶在食品、医药、酿造、丝绸、皮革等行业中发挥着重要作用。制备了碱性蛋白酶交联体,并对其催化性能进行研究。在最佳制备条件下(90%叔丁醇作为沉淀剂,沉淀时间为15min,交联剂浓度为33 mmol/L,交联时间为6 h),交联酶的酶活回收率为22. 6%。与游离酶相比,交联酶的最适pH值向碱性方向变化,由7. 5变为8. 0,最适温度由60℃变成65℃。酶动力学研究表明,交联酶对酪蛋白的催化水解能力(4. 3 min-1)比游离酶(3. 7 min-1)更高。尽管交联酶最大反应速度Vmax(9. 8 mg/(m L·min))低于游离酶(13. 3 mg/(m L·min)),但交联酶对底物的亲和力Km(2. 3 mg/m L)比游离酶(3. 6 mg/m L)有所增加,而且其热稳定性和酸碱稳定性都得到一定程度的提高。另外,在磷酸盐缓冲液中重复使用5和8批次后,交联酶还能保持82. 5%和56. 5%的酶活性。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 实验材料
  •   1.2 实验方法
  •     1.2.1 碱性蛋白酶CLEAs的制备
  •     1.2.2 酶活性和蛋白质浓度的测定
  •     1.2.3 游离酶及其CLEAs的特性分析实验
  •       1.2.3. 1 最适温度和pH值的确定
  •       1.2.3. 2 酶的动力学参数测定
  •       1.2.3. 3 酶的稳定性测定
  •       1.2.3. 4 酶的重复使用稳定性测定
  • 2 结果与讨论
  •   2.1 碱性蛋白酶CLEAs的制备及电镜分析结果
  •     2.1.1影响碱性蛋白酶CLEAs制备的因素分析
  •       2.1.1.1沉淀剂种类对碱性蛋白酶CLEAs制备的影响
  •       2.1.1.2糖作为沉淀辅助物对碱性蛋白酶CLEAs制备的影响
  •       2.1.1.3沉淀时间、交联剂浓度和交联时间对碱性蛋白酶CLEAs制备的影响
  •     2.1.2 电镜分析结果
  •   2.2 游离酶及其CLEAs的特性分析结果
  •     2.2.1 酶的最适反应温度和p H值
  •     2.2.2 酶动力学研究结果
  •     2.2.3 酶的热稳定性和酸碱稳定性分析
  •     2.2.4 固定化酶CLEAs的重复使用稳定性分析
  • 3 结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 区晓阳,曾英杰,彭飞,倪子富,熊隽,宗敏华,娄文勇

    关键词: 碱性蛋白酶,无载体固定化,交联酶聚集体,酶学性质,重复使用稳定性

    来源: 食品科学技术学报 2019年03期

    年度: 2019

    分类: 工程科技Ⅰ辑,基础科学

    专业: 生物学

    单位: 华南理工大学食品科学与工程学院,华南协同创新研究院生物活性分子开发与应用创新中心

    基金: 国家自然科学基金资助项目(21878105,21676104),国家重点研发计划项目(2018YFC1603400,2018YCF1602100)

    分类号: Q814

    页码: 33-40

    总页数: 8

    文件大小: 385K

    下载量: 146

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