真核重组质粒pCDNA3.1-Flag-PTEN 和原核重组质粒pGEX-6P-1-GST-PTEN构建

论文摘要

目的:构建人第10号染色体缺失的磷酸酶（PTEN）真核重组质粒pCDNA3.1-Flag-PTEN和原核重组质粒pGEX-6P-1-GST-PTEN,研究PTEN融合质粒生物学效应。方法:根据基因库中PTEN序列,设计并合成相关引物。用基因重组技术将目的片段插入pCDNA3.1-Flag和pGEX-6P-1-GST空载质粒中,通过PCR和DNA测序,鉴定插入基因序列。将pCDNA3.1-Flag-PTEN转染到HEK 293细胞,将pGEX-6P-1-GST-PTEN转到E.coli BL-21中,通过Western blotting和考马斯亮蓝染色法分别检测PTEN蛋白的表达。结果:PCR显示目的基因插入成功;DNA测序显示插入序列与目的基因序列完全一致,无位点突变;Western blotting和考马斯亮蓝染色法证实融合质粒可以在生物体内正确表达。结论:成功构建PTEN相关真核和原核融合质粒并正确表达,为PTEN在帕金森疾病中的机制研究奠定了基础。

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类型: 期刊论文

作者: 柴云,于明,朱颖

关键词: 抑癌蛋白,人第号染色体缺失的磷酸酶,真核,原核,克隆构建,重组表达

来源: 蚌埠医学院学报 2019年11期

年度: 2019

分类: 医药卫生科技

专业: 神经病学

单位: 江苏大学附属医院神经内科

基金: 国家自然科学基金资助项目(81601043),镇江市重点研发计划项目(SH2018037)

分类号: R742.5

DOI: 10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2019.11.001

页码: 1437-1440

总页数: 4

文件大小: 722K

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标签：抑癌蛋白论文;  人第号染色体缺失的磷酸酶论文;  真核论文;  原核论文;  克隆构建论文;  重组表达论文;