导读:本文包含了抗原模拟表位论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:噬菌体,抗原,受体,表皮,肺癌,文库,曲霉。
抗原模拟表位论文文献综述
殷启风[1]（2017）在《人CD55抗原模拟表位的筛选及其对乳腺癌细胞的抑瘤作用研究》一文中研究指出目的:利用噬菌体肽库展示技术从Ph.D.12噬菌体肽库中筛选能够和人CD55单克隆抗体(CD55 Mc Ab)特异性结合的短肽,从中找到CD55的抗原模拟表位,设计出与人肿瘤免疫逃逸蛋白CD55同源的的短肽,为肿瘤治疗奠定理论基础。方法:以人CD55单克隆抗体为靶标,Ph.D.12肽库通过4轮噬菌体筛选淘选出与CD55单克隆抗体特异性结合的短肽,计算每轮回收率。4轮筛选后,随机挑选11个噬菌体单克隆和野生型噬菌体进行竞争结合,计算其结合力。利用ELISA、竞争结合实验鉴定筛选出结合力强的噬菌体单克隆,E.coli ER2378宿主菌表达和纯化噬菌体。将阳性噬菌体克隆交由公司测序,测序结果里找出出现频率高的短肽序列,设计与人CD55单克隆抗体具有高亲和性及特异性的短肽,并对其体外抗乳腺癌作用效果进行研究。CCK8实验检测CD55抗原模拟表位对乳腺癌细胞(MDA-MB-231和MCF-7细胞)增殖的影响。荧光显微镜验证短肽在细胞中的摄入和分布。透射电镜(Transmission electron microscopy,TEM)和流式细胞术检测该短肽在乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞凋亡中的影响。结果:4轮筛选后,每轮噬菌体回收率都达到了较高数量级。竞争结合实验结果显示11个噬菌体单克隆和第3、4轮筛选后的噬菌体都与CD55单克隆抗体亲和力都非常显着。ELISA结果显示有8个噬菌体单克隆和CD55单克隆抗体亲和力显着。根据测序结果得到两条高表达短肽序列HAHTPTRGVMHA(简称H肽)和QVNGLGERSQQM(简称Q肽)。CCK8实验证明Q短肽序列对乳腺癌MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞的毒性作用显着且具有剂量依赖性,而H短肽较Q肽药效较差,达到相同抑瘤率所需作用浓度较高。荧光显微镜观察到Q短肽分布在细胞膜表面。透射电镜和流式细胞术显示Q短肽具有诱导MDA-MB-231和MCF-7细胞凋亡的作用。结论:利用噬菌体随机12肽库成功得到两条CD55单克隆抗体特异性结合的CD55抗原模拟表位短肽序列HAHTPTRGVMHA和QVNGLGERSQQM,其中Q肽比H肽作用更显着,能够抑制乳腺癌细胞增殖并诱导其凋亡,为乳腺癌靶向治疗提供新思路和新靶标。(本文来源于《青岛大学》期刊2017-05-18）
邱宇[2]（2016）在《肺癌T7噬菌体文库中MUC1黏蛋白抗原模拟表位的筛选》一文中研究指出背景:作为最常见的癌症之一,肺癌的发病率和致死率在全世界范围内均居于各类型癌症疾病之首,受临床诊断条件的局限性限制,肺癌患者中,有大约80%的人在确诊时就已处于中、晚期,很容易错过手术治疗和多学科治疗的最佳机会,甚至经过了手术治疗的,术后5年生存率仍然非常低(15%)。肺部肿瘤临床上的治疗方面,传统疗法多使用放疗、化疗、手术治疗等,患者要承受巨大的痛苦。肿瘤特异性疫苗治疗癌症,作为传统疗法的一种辅助治疗手段,是近年来研究的热点生物治疗方法。其中,以多肽为基础制备的肿瘤疫苗,成分简单、易获得、制备工艺简洁。模拟表位肽作为天然抗原的低分子模拟物,构象上与天然抗原高度相似,能够在一定程度上诱导天然抗原的特异性体液免疫、特异性细胞免疫,为肿瘤多肽疫苗的开发和应用提供了理论根柢。噬菌体表面展示系统优势是库容大、体积小、可多次扩增,因此能够广泛应用于模拟表位的筛选研究。以单克隆抗体(monoclonal antibody)为筛选配体,对噬菌体展示文库(Phage Display Library)做淘洗筛选,理论上,可以得到目标抗原相对应的模拟表位。在我们的这项研究中,使用抗MUC1蛋白的单克隆抗体,作为对肺癌T7噬菌体表面展示文库(T7 phage library of lung cancer)进行生物淘洗的筛选配基,以筛选结构、功能相似的、肺癌特异性的MUC1模拟表位,并探索该表位肽的肺癌特异性及其在临床诊断和后期疫苗研制中的价值。方法:1.使用的筛选靶分子是抗MUC1单克隆抗体,淘洗扩增后的肺癌T7噬菌体cDNA文库,进行叁轮生物淘洗;2.淘洗后得到的噬菌体克隆铺LB平板测定滴度,并挑取噬菌斑进行扩增;3.测序并推导阳性噬菌体克隆的氨基酸序列;4.对阳性噬菌体克隆的剂量依赖性以及肺癌特异性进行试验检测,以确定模拟表位在临床应用的价值。结果:1.成功地扩增了原始的噬菌体文库,并检测其滴度,结果显示扩大培养后的滴度为7×1010pfu/mL,库容为1.85×106pfu/mL,符合试验中质量要求。2.以MUC1单抗为靶分子,淘洗获得20个阳性克隆,测序获得AAPDFRP、SAPDDRP两种氨基酸序列,对MUC1单抗的抑制率均高于50%,与肺癌患者血清结合特异性显着高于与健康人血清结合特异性(P<0.05),认为得到的这两种多肽序列能在一定程度上模拟MUC1抗原的功能。3.模拟出上述两种多肽序列的叁级结构。结论:成功扩增肺癌T7噬菌体cDNA文库,经生物淘洗和分析判定,筛选获得两种MUC1抗原的模拟表位多肽序列,能够在一定程度上模拟MUC1抗原的生物功能。MUC1抗原的模拟表位序列丰富了肺癌早期诊断及疫苗研制的抗原种类,提供了一种新型的诊断方法,并为肺癌的临床早期诊断、治疗奠定了一定基础。(本文来源于《河北大学》期刊2016-05-01）
刘锦龙,胡祖权,李和平,廖玉才[3]（2016）在《镰刀菌细胞壁蛋白抗原模拟表位的筛选和鉴定》一文中研究指出镰刀菌不仅能侵染小麦、大麦、玉米等粮食作物,造成作物产量严重降低,谷物中存留的镰刀菌毒素还能引发人、畜中毒,严重威胁人、畜健康。本研究以镰刀菌细胞壁蛋白特异单链抗体CWP2为靶标,淘选噬菌体随机12肽库,筛选获得两种与抗体CWP2特异结合的短肽,多肽1(YLNPPCDLYACA)和多肽2(YQSVFFTDPHEF)。竞争性酶联免疫吸附实验证实,多肽1更好的模拟了镰刀菌细胞壁蛋白的抗原表位。这是首次对镰刀菌细胞壁蛋白模拟肽的报道,为探寻CWP2所结合抗原表位的编码基因,进一步阐明CWP2介导的抗镰刀菌分子机理提供了信息和材料。同时,获得的模拟肽可直接用于家畜疫苗以及作为粮食安全检测标准品。(本文来源于《基因组学与应用生物学》期刊2016年02期）
邱宇,曹丽,郝晓宁,王建飞,董旭[4]（2016）在《肺癌T7噬菌体文库中MUC1蛋白抗原模拟表位的筛选》一文中研究指出目的利用噬菌体表面展示技术,从肺癌T7噬菌体展示文库中筛选MUC1蛋白抗原的模拟表位。方法以MUC1单克隆抗体为靶分子,对肺癌T7噬菌体文库进行淘洗筛选,得到的阳性克隆进行测序并推导其氨基酸序列,对得到的阳性噬菌体克隆进行鉴定。结果经3轮淘选,得到20个阳性克隆。测序获得AAPDFRP、SAPDDRP 2种氨基酸序列,对MUC1单抗的抑制率均在50%以上,与肺癌血清结合特异性较高,此2种蛋白序列可模拟MUC1蛋白抗原表位。结论通过噬菌体展示技术成功筛选到MUC1蛋白的模拟表位序列XAPDXRP(X为任意氨基酸),对肺癌的早期诊断有一定的参考价值。(本文来源于《免疫学杂志》期刊2016年02期）
贺雪姣[5]（2015）在《噬菌体展示技术筛选表皮生长因子受体抗原模拟表位》一文中研究指出结直肠癌已成为我国继肺癌、胃癌、肝癌后的第四大最常见癌症。既往研究发现,表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)在结直肠癌中常出现过表达,并进一步通过其信号转导引起肿瘤细胞增殖、血管生成、肿瘤侵袭和转移能力增强,细胞凋亡抑制,因此,EGFR已成为抗肿瘤药物的一个理想靶点。经FDA批准上市,针对EGFR抗原表位研制的单克隆抗体药物有尼妥珠单抗和西妥昔单抗。这两株单抗在治疗EGFR高表达的结直肠癌及其他肿瘤中,能专一的针对肿瘤细胞,减少对正常组织的损害,显着提高患者的生存状态。但其存在一定的不足,首先,分子量相对较大,降低了单抗药物的治疗效果,导致临床使用效果不理想。其次,价格昂贵,且在治疗过程中需长期使用,给病人及家属带来了较大的经济负担。如果能将单抗药物与其靶点结合的位点模拟出来,制成多肽疫苗,就可以避免单克隆抗体药物的不足,大大提高治疗效果,减轻患者的经济负担。模拟抗原表位的方法有两种,通过将噬菌体展示技术与传统的抗原表位分析方法相比,我认为噬菌体展示技术具有独特的优势。噬菌体展示技术是将外源蛋白基因序列插入至噬菌体外壳蛋白,随着噬菌体的重新组装将外源蛋白融合在噬菌体的表面,其在抗原表位筛选中的优点是既可识别并结合肿瘤抗原,又能感染宿主菌进行扩增。噬菌体随机肽库包含大量不同序列结构的多肽,其可以作为任何靶抗原表位的模拟肽,通过肽库对靶抗原进行筛选时,不需要空间构象,只需靶抗原就可获得具有抗原性和免疫原性的蛋白多肽,且反映了抗原结合位点的空间构像。目前该技术在肿瘤的基础研究以及治疗新技术的开发中得到广泛应用。本实验拟用尼妥珠单抗及西妥昔单抗分别作为抗EGFR的靶标蛋白,应用噬菌体随机十二肽库对其抗原表位进行探讨分析。用两株单克隆抗体药物对同一靶点抗原表位进行筛选分析,目前尚未有文献报道。拟经过叁轮噬菌体的“吸附-洗脱-扩增”的亲和筛选实验,获得与单抗特异性结合的单克隆噬菌体,进而对噬菌体提取单链DNA并测序,获得抗EGFR抗体对应抗原表位的氨基酸序列,对两株单抗获得的氨基酸序列进行分析比较。采用竞争ELISA检测方法,将筛选出高频的单克隆噬菌体与EGFR高表达的caco2细胞膜蛋白提取液竞争结合西妥昔单抗及尼妥珠单抗,进一步检测所获得的短肽与西妥昔单抗及尼妥珠单抗的亲和活性,并对两株单抗获得短肽的亲和性进行分析比较,以寻找最具亲和活性的短肽。目的1.利用噬菌体十二肽库进行生物淘洗,筛选表皮生长因子受体抗原模拟表位。2.筛选出的模拟短肽的生物活性检测。方法以尼妥珠单抗及西妥昔单抗作为抗EGFR抗原的靶分子,在噬菌体十二肽库中淘选表皮生长因子受体的抗原模拟表位,经过3轮生物淘洗后,挑选单克隆噬菌斑进行扩增,用ELISA方法检测,选择与西妥昔单抗或尼妥珠单抗亲和性较高的阳性单克隆噬菌体,对其进行扩增及测序。采用竞争ELISA的方法,对筛选出的高频噬菌体单克隆与EGFR高表达的caco2细胞膜蛋白提取液竞争结合西妥昔单抗及尼妥珠单抗。结果1.以抗EGFR的单克隆抗体药物西妥昔单抗作为靶标蛋白,利用噬菌体随机十二肽库对靶蛋白进行叁轮生物淘洗,对每轮淘洗出来的噬菌体均进行噬菌体滴度测定,测定结果可以看出,西妥昔单抗淘筛出来的噬菌体总体回收率从第一轮的(6.67×10-6)%增加到了第叁轮的(2.80×10-3)%,可见通过叁轮“吸附-洗脱-扩增”的生物淘洗,噬菌体回收率得到了富集,富集率达到了420倍。用同样的方法对尼妥珠单抗进行淘洗,对淘洗结果进行滴度测定,测定结果可以看出,尼妥珠单抗淘选出来的噬菌体总体回收率从第一轮的(8.67×10-6)%增加到了第叁轮的(1.80×10-3)%,可见尼妥珠单抗通过叁轮“吸附-洗脱-扩增”的生物淘洗,噬菌体的回收率也得到富集,富集度为208倍。2.在第叁轮测噬菌体滴度的平板中,分别随机挑选30个分隔良好的单克隆蓝斑进行扩增,扩增后行滴度测定,以扩增的单克隆噬菌体作为检测组,以噬菌体原库扩增液作阴性对照组,进行ELISA检测。在阳性结果的评价中,以单克隆噬菌体扩增液(检测组)的OD值为噬菌体原库扩增液(阴性对照)的OD值的2倍以上视为阳性。以此标准对ELISA结果进行分析,确定西妥昔单抗的阳性结果有17个,而尼妥珠单抗的阳性结果有21个,阳性率分别为56.67%和70%。这表明西妥昔单抗及尼妥珠单抗均淘筛出来了特异性结合的噬菌体。随机挑选阳性噬菌体克隆进行依赖性分析,可见随着阳性噬菌体投入量的增加,其OD值也增大,说明其存在剂量依赖性。3.对检测出来的阳性噬菌体克隆提取单链DNA,并进行DNA序列测定,找出插入噬菌体的36个碱基,并将其翻译成氨基酸,此即为噬菌体递呈的12肽序列。对17个阳性的西妥昔单抗噬菌体进行测序,有叁段短肽频率出现较高,分别为HSFKWLDSPRLR出现6次,HTSSLWHLFRST出现4次,HLFNHNKNLPKR出现3次。对21个阳性的尼妥珠单抗噬菌体进行测序,出现两段频率较高的短肽,分别为HSFKWLDSPRLR出现8次,HWKSSYVKWHNV出现5次。其中西妥昔单抗和尼妥珠单抗有一共有序列HSFKWLDSPRLR。4.在竞争ELISA实验中,EGFR高表达的caco2细胞膜蛋白提取液可以与噬菌体单克隆HSFKWLDSPRLR,HTSSLWHLFRST,HLFNHNKNLPKR竞争性结合西妥昔单抗,叁条短肽均出现不同程度的抑制。EGFR高表达的caco2细胞膜蛋白提取液与噬菌体单克隆HSFKWLDSPRLR,HWKSSYVKWHNV竞争性结合尼妥珠单抗,两条短肽均出现不同程度的抑制,且共有序列HSFKWLDSPRLR的抑制率最高。结论初步利用西妥昔单抗及尼妥珠单抗可从噬菌体随机肽库中筛选到表皮生长因子受体相关抗原表位。EGFR高表达的caco2细胞膜蛋白提取液与筛选出的抗原模拟短肽可以竞争性结合西妥昔单抗及尼妥珠单抗。短肽HSFKWLDSPRLR可作为表皮生长因子受体的抗原模拟表位,为进一步研制肿瘤疫苗奠定了基础。(本文来源于《第四军医大学》期刊2015-05-01）
贺雪姣,师建国,陈果,李晓霞[6]（2014）在《噬菌体展示技术筛选表皮生长因子受体抗原模拟表位》一文中研究指出目的利用噬菌体12肽库进行生物淘洗,筛选表皮生长因子受体(EGFR)抗原模拟表位。方法以抗EGFR的单克隆抗体药物西妥昔单抗及尼妥珠单抗为靶分子,在噬菌体12肽库中淘选表皮生长因子受体抗原模拟表位,经过3轮淘选后,选择可与西妥昔单抗及尼妥珠单抗有不同程度结合的噬菌体,对阳性产物进行克隆及测序。结果发现17个和21个阳性噬菌体分别与西妥昔单抗及尼妥珠单抗不同程度地结合;阳性克隆测序结果分别获得了3种不同的氨基酸序列。结论初步利用西妥昔单抗及尼妥珠单抗可从噬菌体展示的随机肽库中筛选到表皮生长因子受体相关抗原表位。(本文来源于《山西医科大学学报》期刊2014年11期）
李燕博,杨自腾,马岚[7]（2014）在《HPV-58型E7蛋白抗原模拟表位的筛选及分析》一文中研究指出利用该实验室成熟的噬菌体随机十二肽库筛选平台,对HPV-58型E7蛋白单克隆抗体株4C4a、6C7a进行3轮亲和筛选,得到2组、各8个阳性噬菌体克隆.阳性噬菌体氨基酸序列用以模拟单抗(靶蛋白)特异性识别的HPV-58型E7蛋白的抗原表位.将测得的阳性噬菌体多肽序列及HPV-58型E7蛋白氨基酸序列进行生物信息学分析后,进行线性序列比对及构象性表位预测及分析.构象性表位的预测借力于Epi Search Server和Pepitope Server,对构象性表位匹配及簇的寻找提供有力支持,也为早期诊断及研制多肽疫苗提供参考.(本文来源于《云南大学学报(自然科学版)》期刊2014年06期）
贺贞云[8]（2014）在《赭曲霉毒素A模拟表位二级库的构建及其全抗原的生物合成》一文中研究指出赭曲霉毒素A（ochratoxinA, OTA）是一种由真菌代谢产生的有毒化合物。OTA通过受污染的食物和饲料进入人和动物体内，导致急性或慢性中毒。为了降低OTA对人类和动物的危害风险，国内外研究人员已经发展出众多类型的检测方法。其中以简单、快速、高特异性的免疫分析法应用最为广泛。然而，在免疫学检测过程中使用的真菌毒素可能危害检测人员的身体健康。而且，价格昂贵的真菌毒素标准品也在一定程度上限制了免疫学检测的应用。此外，真菌毒素全抗原的人工合成方法存在批间差异大的缺陷。因此，人们试图开发一些能够代替人工抗原的检测材料，而模拟表位正是其中一种。模拟表位能够模拟抗原表位与抗体之间的相互作用，主要来源于噬菌体展示随机肽库。但是从随机肽库中淘选获得的模拟表位受到原始肽库多样性的限制，不一定能达到建立高灵敏度检测方法的要求。因此本研究通过构建噬菌体展示二级肽库，对原始的OTA模拟表位进行体外进化，再以此建立OTA的免疫检测方法，达到提高灵敏度之目的。最后，再利用基因工程技术以及蛋白质工程技术，实现OTA全抗原的生物合成，并以其建立免疫学检测方法。主要研究内容和结果概括如下：1、OTA噬菌体展示模拟表位的淘选为获得OTA的模拟表位，首先以抗OTA单克隆抗体为靶分子，在商业噬菌体展示十二肽库和环七肽库中进行淘选。经过叁轮亲和淘选以及ELISA鉴定，获得7个展示OTA模拟表位的噬菌体。通过比对这些模拟表位的多肽序列，发现其中4个模拟表位含有FQLH序列，因此推断FQLH可能为OTA模拟表位的保守序列，并且以此应用于噬菌体展示二级肽库的构建。2、噬菌体展示二级肽库的构建与筛选将保守序列FQLH固定于模拟表位的中间位置，在其两端分别引入3个随机的氨基酸残基，构建噬菌体展示二级肽库。该噬菌体展示肽库的库容量为1.2×108pfu，理论上包含了所有可能存在的氨基酸序列（6.4×107）。通过严格控制淘选条件，能够改善噬菌体展示模拟表位与抗OTA单克隆抗体的结合性能。经ELISA鉴定，噬菌体展示OTA模拟表位的半抑制浓度（half inhibitionconcentration, IC50）值从原来的0.50-1.03ng/mL降低至0.052-0.336ng/mL。3、基于OTA噬菌体模拟表位免疫分析方法的建立以噬菌体展示的OTA模拟表位取代人工抗原，建立化学发光ELISA和膜基质免疫分析法。化学发光ELISA的IC50为0.04ng/mL，线性范围为0.006-0.245ng/mL；膜基质免疫分析法的阈值设定为1ng/mL。分别采用这两种方法检测40份食品及饲料样品，并将测定数据与商业ELISA试剂盒进行比较，结果显示叁者的相关性良好。4、OTA全抗原的生物合成及其在免疫分析中的应用将OTA模拟表位的编码基因克隆至pMAL-pIII表达载体并转入大肠杆菌进行表达，获得OTA模拟表位与MBP蛋白融合表达的产物，即生物合成抗原，并将其应用于化学发光ELISA和膜基质免疫分析法。化学发光ELISA的检测限为0.22ng/mL，IC50为0.82ng/mL，工作范围为0.31-2.17ng/mL；膜基质免疫分析法的阈值设定为5ng/mL。分别采用这两种方法检测玉米、大米、小麦叁种加标样品，并将测定数据与基于化学合成抗原的化学发光ELISA进行比较，结果显示叁者之间无显着性差异。(本文来源于《南昌大学》期刊2014-05-30）
熊争平,许杨,何庆华[9]（2013）在《NFLX抗原模拟表位的淘选及鉴定》一文中研究指出从噬菌体随机肽库中淘选模拟NFLX(Norfloxacin)表位的噬菌体粒子并进行性质鉴定。以抗NFLX单克隆抗体为靶分子,对噬菌体环七肽库和十二肽库进行生物亲和淘选,以ELISA鉴定阳性克隆,进行DNA测序,采用生物信息学方法对淘选得到的模拟表位进行分析。分别得到了9个(环七肽)和8个(十二肽)能与靶分子特异性结合且能被NFLX标准品阻断的阳性克隆,其特有序列为(环七肽):X-X-X-X-X-脯氨酸-苯丙氨酸(X为任意氨基酸),以阻断效果最好的抗原模拟表位H3建立了竞争ELISA标准曲线,IC 50为:(48.07±6)ng·mL-1,检测线性范围为10~200ng·mL-1。噬菌体展示技术可淘选得到NFLX模拟表位,淘选到的噬菌体粒子可作为NFLX的替代品建立免疫学检测方法。(本文来源于《南昌大学学报(理科版)》期刊2013年04期）
刘淑均,沈继龙,卞茂红,张循善,闻慧琴[10]（2013）在《利用噬菌体随机肽库筛选Rh(D)血型抗原的模拟表位》一文中研究指出目的从纯化的人抗Rh(D)抗体阳性血清中筛选Rh(D)血型抗原模拟表位。方法用纯化的多克隆抗Rh(D)抗体血清对噬菌体随机十二肽库进行3轮"吸附-洗脱-扩增"过程筛选,随机挑取噬菌体克隆;用ELISA法检测其特异性及其与抗体的结合能力。提取阳性克隆DNA并进行测序,推导外源多肽的氨基酸序列。凝集抑制试验检测噬菌体展示的多肽对Rh(D)血型抗原结合的模拟作用。结果经过3轮筛选和相应鉴定后得到6个抗Rh(D)抗体的特异性噬菌体克隆,其中4个克隆展示相同的氨基酸序列为PSQGYVILLDEK,命名为C2,另外2个克隆展示相同的氨基酸序列为TMLNRAHDFSEC,命名为C21。凝集抑制试验结果表明这两个多肽的噬菌体可以抑制Rh(D)抗原阳性红细胞的凝集作用。结论多肽PSQGYVILLDEK和TMLNRAH-DFSEC可以模拟Rh(D)血型抗原表位。(本文来源于《安徽医科大学学报》期刊2013年07期）
抗原模拟表位论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
背景:作为最常见的癌症之一,肺癌的发病率和致死率在全世界范围内均居于各类型癌症疾病之首,受临床诊断条件的局限性限制,肺癌患者中,有大约80%的人在确诊时就已处于中、晚期,很容易错过手术治疗和多学科治疗的最佳机会,甚至经过了手术治疗的,术后5年生存率仍然非常低(15%)。肺部肿瘤临床上的治疗方面,传统疗法多使用放疗、化疗、手术治疗等,患者要承受巨大的痛苦。肿瘤特异性疫苗治疗癌症,作为传统疗法的一种辅助治疗手段,是近年来研究的热点生物治疗方法。其中,以多肽为基础制备的肿瘤疫苗,成分简单、易获得、制备工艺简洁。模拟表位肽作为天然抗原的低分子模拟物,构象上与天然抗原高度相似,能够在一定程度上诱导天然抗原的特异性体液免疫、特异性细胞免疫,为肿瘤多肽疫苗的开发和应用提供了理论根柢。噬菌体表面展示系统优势是库容大、体积小、可多次扩增,因此能够广泛应用于模拟表位的筛选研究。以单克隆抗体(monoclonal antibody)为筛选配体,对噬菌体展示文库(Phage Display Library)做淘洗筛选,理论上,可以得到目标抗原相对应的模拟表位。在我们的这项研究中,使用抗MUC1蛋白的单克隆抗体,作为对肺癌T7噬菌体表面展示文库(T7 phage library of lung cancer)进行生物淘洗的筛选配基,以筛选结构、功能相似的、肺癌特异性的MUC1模拟表位,并探索该表位肽的肺癌特异性及其在临床诊断和后期疫苗研制中的价值。方法:1.使用的筛选靶分子是抗MUC1单克隆抗体,淘洗扩增后的肺癌T7噬菌体cDNA文库,进行叁轮生物淘洗;2.淘洗后得到的噬菌体克隆铺LB平板测定滴度,并挑取噬菌斑进行扩增;3.测序并推导阳性噬菌体克隆的氨基酸序列;4.对阳性噬菌体克隆的剂量依赖性以及肺癌特异性进行试验检测,以确定模拟表位在临床应用的价值。结果:1.成功地扩增了原始的噬菌体文库,并检测其滴度,结果显示扩大培养后的滴度为7×1010pfu/mL,库容为1.85×106pfu/mL,符合试验中质量要求。2.以MUC1单抗为靶分子,淘洗获得20个阳性克隆,测序获得AAPDFRP、SAPDDRP两种氨基酸序列,对MUC1单抗的抑制率均高于50%,与肺癌患者血清结合特异性显着高于与健康人血清结合特异性(P<0.05),认为得到的这两种多肽序列能在一定程度上模拟MUC1抗原的功能。3.模拟出上述两种多肽序列的叁级结构。结论:成功扩增肺癌T7噬菌体cDNA文库,经生物淘洗和分析判定,筛选获得两种MUC1抗原的模拟表位多肽序列,能够在一定程度上模拟MUC1抗原的生物功能。MUC1抗原的模拟表位序列丰富了肺癌早期诊断及疫苗研制的抗原种类,提供了一种新型的诊断方法,并为肺癌的临床早期诊断、治疗奠定了一定基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
抗原模拟表位论文参考文献
[1].殷启风.人CD55抗原模拟表位的筛选及其对乳腺癌细胞的抑瘤作用研究[D].青岛大学.2017
[2].邱宇.肺癌T7噬菌体文库中MUC1黏蛋白抗原模拟表位的筛选[D].河北大学.2016
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[5].贺雪姣.噬菌体展示技术筛选表皮生长因子受体抗原模拟表位[D].第四军医大学.2015
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[8].贺贞云.赭曲霉毒素A模拟表位二级库的构建及其全抗原的生物合成[D].南昌大学.2014
[9].熊争平,许杨,何庆华.NFLX抗原模拟表位的淘选及鉴定[J].南昌大学学报(理科版).2013
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