导读:本文包含了初级传入论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:突触,受体,脊髓,胶状,神经,因子,神经病。
初级传入论文文献综述
邱欣彤,史英武,张明明[1]（2019）在《小鼠盆神经初级传入在脊髓的局部调控及与上级神经元的纤维联系》一文中研究指出目的:利用重组伪狂犬病毒介导的逆行跨多突触追踪技术,观察小鼠盆神经初级传入在脊髓突触前神经元的形态特征及其与上级神经元的纤维联系。方法:在成年雄性C57小鼠一侧盆神经注射伪狂犬病毒,动物存活一周后灌注取材,在激光共聚焦显微镜下观察全脑的突触前神经元的分布;利用免疫荧光组织化学技术特异性标记脊髓神经元,观察盆神经初级传入的突触前神经元与痛相关神经元的共存情况。结果:将伪狂犬病毒介导的逆行跨多突触病毒注入盆神经后,脊髓和脑内大量核团,如下丘脑、运动皮质、中脑导水管周围灰质、臂旁核和腰骶髓后连合核(DCN)都可观察到密集分布的突触前神经元。利用免疫荧光组织化学染色技术,观察到DCN内存在大量SP受体(SPR)阳性神经元,且SPR阳性神经元与盆神经跨突触标记的突触前神经元不共存,这些突触前神经元主要呈GABA阳性。结论:DCN是盆神经初级传入在脊髓的关键中继部位,内脏伤害性信息可能在DCN处进行初级调控后向上逐级传导。(本文来源于《神经解剖学杂志》期刊2019年03期）
方烨红[2]（2018）在《体表刺激性传入对炎症引起的肌肉初级痛觉神经元异常电活动的抑制》一文中研究指出背景与目的疼痛是一种机体在感受到外在伤害性刺激后产生的不愉快感觉,根据其持续时间的长短,可分为急性痛和慢性痛两大类。其中,在慢性痛中又以慢性肌肉炎症痛(主要表现为职业性肌肉疼痛以及下腰痛)最为普遍,是一直困扰人们的一类慢性疾病。现有的研究表明:肌肉中存在着感受各类外界刺激的感受器,对伤害性压力刺激,伤害性冷、热刺激都有反应,特别是对于一些酸性物质、各类化合物,如ATP、5-TH、IL、NGF、capsaicin等都有反应。这些研究都基于对支配肌肉的神经纤维的电生理记录,对神经元细胞,特别是支配肌肉的外周神经元细胞的特性研究较少。另外,对于肌肉炎症痛,虽然有类似诸如中医膏药一样的治疗药物,但对于肌肉疼痛内在机制以及治疗手段的研究还是很少的。现在的观点认为膏药缓解肌肉炎症痛的机制是由于膏药自身透过皮肤,渗透到肌肉从而发挥的镇痛作用。这种说法存在着较大的争议,我们认为其机制很可能是膏药直接刺激皮肤,引起皮肤来源的伤害性传入,正是由于这种非肌肉来源的伤害性传入在脊髓的作用从而发挥的镇痛效果。因此,本研究旨在探究支配胫骨前肌的DRG伤害性痛觉神经元的基本类型和电生理特性以及探究激活皮肤来源的伤害性C纤维的传入能否抑制大鼠深部肌肉的炎症痛及其镇痛作用发生的部位。材料与方法成年Sprague-Dawley(SD)雌性大鼠,体重在180-220g之间,预先用荧光染料 1,1 '-dioctadecyl-3,3,3',3'-tetrame-thylindocarbocyanine perchlorate(Dil,200ug/mL)肌肉注射标定背根神经节(Dorsal root ganglion,DRG)中支配大鼠胫骨前肌的神经元,7-12天后取材进行免疫组织化学染色确定支配胫骨前肌的神经元类型,或是进行在体可视DRG电生理记录探究肌肉初级神经元的电生理性质。胫骨前肌注射完全弗氏佐剂(Complete Freund's adjuvant,CFA),建立大鼠肌肉炎症痛模型,大鼠后肢承重仪测定其炎症痛相关行为,伊文氏蓝渗出实验测定大鼠肌肉炎症情况。应用在体可视化DRG电生理记录的方法记录在L4、L5 DRG中特异支配胫骨前肌神经元的电生理活动(诱发放电、自发放电),并记录在皮肤(胫骨前肌前)涂抹了辣椒素(CAP),芥末油(MO)以及薄荷油(PO)以后(涂抹酒精作为对照),诱发放电和自发放电的变化。在此基础上,我们还在去皮肤神经支配的炎症痛模型上重复了上述实验。并观察了在涂抹上述叁种刺激性物质于非胫骨前肌前皮肤(脚掌皮肤、大腿内侧皮肤)的神经元放电情况。另外,在肌肉炎症痛模型上,我们还探讨了在切断被记录的DRG背根神经纤维后,在胫骨前肌前皮肤涂抹上述叁种刺激性物质后神经元放电情况。结果1、被荧光染料Dil着色的细胞主要出现在L3-L5DRG上,表明支配胫骨前肌的初级神经元主要集中在L3-L5 DRG中(不存在于L2与L6 DRG中)。其中,在L4上的数量最多,达26.47±7.94个。L3和L5次之,分别为19.82±7.12和14.21±4.98个。2、对L3-L5DRG上的神经元进行免疫组化染色表明:在支配胫骨前肌的所有神经元(DiI+)中,肽能神经元(CGRP+)在DRG上分别占31%、25.78%和21.53%;非肽能神经元(IB4+)分别占支配胫骨前肌神经元总数45.66%、45.44%以及39.83%。TRPV1+细胞分别占支配胫骨前肌神经元数量26.94%、27.32%、32.09%。3、在正常大鼠中,记录到的肌肉C伤害性痛觉神经元中(传导速度在1.5m/s以下),其机械疼痛阈值较支配皮肤的疼痛神经元明显增高(达到80mN以上),其感受野都位于胫骨前肌上,感受野面积较位于皮肤上的感受野相比明显更广,且外周感受野部位易发生变化。4、在大鼠胫骨前肌注射CFA2d后,大鼠胫骨前肌就出现明显的肿胀。大鼠后肢承重实验表明,在注射CFA 1d后大鼠实验侧后肢承重能力较对侧明显下降。伊文氏蓝渗出实验表明大鼠患肢胫骨前肌出现了明显的肌肉炎症。5、在体电生理实验表明,在炎症痛大鼠中,L4及L5DRG上特异支配胫骨前肌的初级神经元,其外周感受野对机械刺激的的敏感性明显升高,并出现自发放电的情况。并且这种机械阈值的下降和自发放电可以被在胫骨前肌的皮肤上涂抹CAP、MO、PO叁种刺激性物质所逆转。行为学的后肢承重实验也证实了这一点。6、在去皮肤神经支配的炎症痛大鼠模型中,皮肤涂抹上述叁种物质,其镇痛效果消失。并且将上述叁种物质涂抹于非胫骨前肌前的皮肤(脚掌、大腿内侧皮肤),也无镇痛效果。行为学实验同样证明了这一点。在剪断记录神经节背根的肌肉炎症痛大鼠中,皮肤涂抹上述3种物质也无任何镇痛效果。结论1、DRG中特异支配胫骨前肌的初级神经元只分布于L3-L5 DRG中,这些神经元中,肽能神经元(CGRP+)、非肽能神经元(IB4+)以及TRPV1+神经元都有。2、支配肌肉的初级感觉神经元,其对于外界机械刺激反应的阈值较支配皮肤的神经元高,外周感受野的范围也更广,且易发生移动。3、往肌肉表面的皮肤涂抹激活皮肤伤害性C纤维传入的物质,能够缓解CFA引起的肌肉炎症痛,其镇痛作用发生的机制主要是化合物直接刺激皮肤后产生的伤害性传入对肌肉疼痛的抑制作用。4、激活与肌肉传入纤维在脊髓当中位于同一节段或是相邻节段的皮肤支配神经伤害性传入才能镇痛。5、激活肌肉表面皮肤伤害性传入纤维,缓解CFA引起的肌肉疼痛的机制可能存在于脊髓或大脑中枢神经系统中。(本文来源于《北京协和医学院》期刊2018-05-01）
柳栋[3]（2017）在《BDNF对不同初级传入神经元VGLUT3和VMAT2的调控机制研究》一文中研究指出谷氨酸转运体(vesicular glutamate transporters,VGLUTs)存在于囊泡膜上,能够将神经递质转运至突触囊泡内,并由此将神经递质谷氨酸释放到突触间隙而产生突触后效应。VGLUTs通过依赖氢离子浓度梯度来进行神经递质的摄取与释放。到目前为止,共有VGLUT1-3叁种主要类型的转运体被发现,而第叁种转运体VGLUT3分布相对局限,而且对其功能知之甚少。表达于神经元的VGLUT3经典的转运机制是与其他神经递质,如5-轻色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)一同进行协同转运,而VGLUT3在5-羟色胺能神经元所促成的谷氨酸信号可促进5-HT的信息传递。单胺神经递质5-HT向突触囊泡内的转运和由突触前膜的释放,有赖于囊泡单胺能转运体2(vesicular monoamine transporter 2,VMAT2)的正常表达和运转。VGLUT3和VMAT2在同一个神经元内的共存现象进一步揭示了不同神经递质协同转运的机制。作为将周围的躯体感觉和内脏感觉信息向中枢神经系统(central nervous system,CNS)传递的背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)初级传入神经元和将听觉信息向CNS传递的螺旋神经节神经元(spiral ganglion neuron,SGN),在处理不同的信息传递过程中均有赖于神经递质的转运、储存和释放,而这一系列的过程又有赖于转运体的正常表达和运转,而VGLUT3和VMAT2在DRG和SGN初级传入神经元的表达以及调节机制仍不完全明确。作为神经营养素(neurotrophin,NT)家族的重要成员之一,脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)在周围神经系统(peripheral nervous system,PNS)发育过程中发挥重要的作用。BDNF发挥生物学作用的过程是通过与其特异的高亲和力酪氨酸激酶受体B(tyrosine kinase receptor B,TrkB)结合,进而激活其下游的丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)、磷脂酿肌醇 3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)和磷脂酶 Cγ(phospholipase C gamma,PLCy)细胞信号转导通路。但是,BDNF是否对DRG和SGN初级传入神经元VGLUT3和VMAT2的表达具有影响作用,目前尚不明确,BDNF对于神经元的突起生长与转运体表达调控之间的关系尚需要进一步研究。基于以上研究背景,本课题分别应用原代培养DRG和SGN神经元,研究外源性BDNF对转运体VGLUT3和VMAT2的表达调控作用及其机制,探讨BDNF对VGLUT3和VMAT2的表达调控中细胞外信号调节蛋白激酶1/2(extracellular signal-regulated protein kinase 1/2,ERK1/2)、PI3K/Akt 和 PLCγ 叁种信号通路所参与的作用,并进一步用用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)进行VGLUT3和VMAT2的干扰实验来探究VGLUT3和VMAT2在BDNF引起的神经突起生长过程中的作用机制;为进一步确定转录因子Etv4和Etv5在促进神经元生长中的确切机制,本课题通过siRNA干扰实验干扰Etv4和Etv5的表达或构建Etv4和Etv5过表达载体并转染DRG神经元使Etv4和Etv5过表达,来明确其在BDNF信号调节DRG神经元突起的生长过程中所发挥的作用。第一部分BDNF对DRG神经元VGLUT3和VMAT2表达的调控作用本课题利用原代培养的DRG初级传入神经元,研究了 BDNF及其相应的细胞信号传导通路参与VGLUT3和VMAT2表达的调控作用,以及这种调控机制与神经元的突起生长之间的关系。结果显示,BDNF促进DRG神经元的突起生长和生长相关蛋白43(growth-associated protein 43,GAP-43)的表达呈剂量依赖效应。而且,BDNF能够上调转运体VGLUT3的表达,很可能是通过激活下游PLCγ信号通路起作用的。虽然BDNF没有能够上调VMAT2的表达,但是在DRG神经元中,在外源性BDNF作用下通过抑制PI3K或PLCγ信号通路可以抑制VMAT2的表达,这一结果显示,BDNF对VMAT2表达的调控作用不如对VGLUT3表达的调控作用明显,但BDNF下游的相关细胞信号通路也可能介导了 VMAT2的表达。通过siRNA干扰VGLUT3和VMAT2的表达后,BDNF对突起生长的促进作用和GAP-43的表达上调并没有受到显着影响,BDNF对VGLUT3表达的独特作用阐释了在DRG初级传入神经元中外源性BDNF对谷氨酸信号传入的调控可能存在不同的机制。BDNF引起的VGLUT3表达上调可能是BDNF调节神经病理性疼痛的一个重要机制。BDNF信号在初级传入神经元中通过调节转运体所介导的生物学效应,对于解释BDNF介导神经病理性疼痛的作用机制增添了新的研究内容。第二部分BDNF通过激活转录因子Etv4和Etv5促进转运体VGLUT3的表达和DRG神经元的生长本课题设计了以检测和影响转录因子Etv4和Etv5表达为主线的实验,探讨了 BDNF及其相关的细胞信号转导通路对Etv4和Etv5表达的影响作用,通过特异性的siRNA干扰Etv4和Etv5的表达、通过转染Etv4和Etv5过表达载体使Etv4和Etv5的表达水平上调的实验条件下,BDNF及其相关的细胞信号转导通路对生长相关蛋白GAP-43以及神经元结构蛋白中分子量神经丝蛋白(medium neurofilament,NF-M)和轻分子量神经丝蛋白(light neurofilament,NF-L)表达变化的影响,进而分析在这种特有的实验条件下DRG神经元突起生长或再生的机制,并在siRNA干扰Etv4和Etv5表达的条件下,在BDNF存在时VGLUT3和VMAT2的表达变化,试图阐明转录因子Etv4和Etv5所介导的、在BDNF存在时,DRG神经元突起生长或再生的机制及其与VGLUT3和VMAT2表达之间的关系。结果显示,外源性BDNF孵育可显着上调Etv4和Etv5及其mRNA的表达水平,BDNF上调Etv4和Etv5表达的效应可能是通过激活其下游的ERK1/2信号通路而实现的;Etv4siRNA或Etv5 siRNA可使BDNF孵育状态下,生长相关蛋白GAP-43以及神经元结构蛋白NF-M、NF-L的表达水平下调,这与在同样实验条件下DRG神经元突起的缩短是一致的;过表达Etv4或Etv5可使BDNF孵育状态下,生长相关蛋白GAP-43以及神经元结构蛋白NF-M、NF-L的表达水平上调,这与在同样实验条件下DRG神经元突起的延长是一致的;Etv4 siRNA或Etv5 siRNA可阻止BDNF孵育状态下VGLUT3表达上调的趋势,而对VMAT2表达的影响作用不明显。以上结果表明,BDNF可通过上调转录因子Etv4和Etv5的表达而诱发生长相关蛋白GAP-43的表达,并启动神经元结构蛋白NF-M、NF-L的表达,在DRG神经元突起生长或再生过程中发挥重要的作用,这可能是DRG神经元突起生长并发育成熟的重要机制;BDNF还可通过上调转录因子Etv4和Etv5的表达而使VGLUT3表达上调,这可能是BDNF上调VGLUT3表达而增强兴奋性氨基酸谷氨酸信息传递效能的重要机制之一,这与BDNF所介导的机械性痛觉信息传递或机械性痛觉过敏的作用是一致的。Etv4和Etv5作为初级传入神经元BDNF及其受体信号系统调控神经元突起生长以及上调转运体VGLUT3表达的关键转录因子,在神经元突起生长或再生中所发挥的关键作用以及对转运体VGLUT3表达的调控所产生的重要作用,不仅对于揭示以BDNF及其受体信号系统为主导的促神经元突起生长的机制增添了新的实验依据,而且对于其在以调控转运体VGLUT3表达为关键步骤的增强谷氨酸信号传递的机制方面提供了新的理论基础。第叁部分BDNF对螺旋神经节神经元VGLUT3和VMAT2的调控作用本课题应用原代培养的螺旋神经节神经元(spiral ganglion neuron,SGN),研究外源性BDNF对于初级传入SGN转运体VGLUT3和VMAT2表达的可能调控作用及其可能的机制,并探究这种调控机制与SGN存活和突起生长的关系。结果显示,外源性BDNF不仅可以通过激活其下游的PI3K/Akt信号通路发挥对SGN中VGLUT3表达上调的作用,而且对SGN神经元突起的生长和SGN神经元存活具有促进作用;在本实验的特定条件下,外源性BDNF尚不能调控SGN中的单胺类转运体VMAT2的表达;BDNF促进SGN突起生长和增加神经元存活率与转运体VGLUT3和VMAT2表达模式之间的关系并不明显,说明BDNF对SGN的神经生长和存活的调控存在多种机制。外源性BDNF对SGN中VGLUT3表达的调控模式可能是SGN内BDNF调控谷氨酸能信号传递的机制之一,而且BDNF对SGN神经元突起的生长和SGN神经元存活的促进作用对于耳蜗正常功能的维持具有重要的意义。(本文来源于《山东大学》期刊2017-05-10）
林世德,张俊江,臧宇杰,赵廷宝[4]（2016）在《脊髓损伤相关中枢性疼痛与CGRP阳性的初级传入纤维再生的相关性研究》一文中研究指出[目的]观察脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后发生中枢性疼痛(central pain,CP)大鼠损伤远端脊髓背角中生长相关蛋白43(GAP-43)和降钙基因相关肽(CGRP)的共定位表达情况,探讨CP与CGRP阳性的初级传入神经纤维出芽再生之间的关系。[方法]SD大鼠16只,随机等分为SCI组和假术(SHAM)组。SCI组大鼠用NYU撞击器损伤L1节段脊髓,撞击力为10 g×12.5 mm。SHAM组大鼠仅切除椎板,不损伤脊髓。术后每天观察双后肢自噬现象,每周测量双后肢运动功能评分(BBB scores,developed by Basso,Beattie and Bresnahan at Ohio State University)。术后4~8周每周测量后肢触压痛痛阈及冷热过敏症状,了解CP的发生情况。术后8周每组取4只行损伤远端脊髓GAP-43与CGRP免疫荧光双标记并在共聚焦显微镜下观察二者的共定位表达情况。[结果]SCI组大鼠术后均出现双后肢瘫痪及明显的CP症状,其损伤远端脊髓背角中GAP-43与CGRP的共定位表达量明显升高,分布范围明显扩大,与SHAM组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。[结论]CP的发生与SCI后感受伤害性刺激的CGRP阳性感觉传入纤维的出芽再生有关。(本文来源于《中国矫形外科杂志》期刊2016年24期）
刘洁[5]（2015）在《卢非酰胺选择性抑制C纤维介导的伤害性初级传入发挥镇痛作用》一文中研究指出疼痛(pain)是由伤害性刺激引起的复杂生理心理活动,在正常情况下,是机体重要的警告信号,当伤害性刺激发生时,机体通过全身皮肤和有关组织中分布的的伤害性感受器将各种形式的刺激转换成神经冲动的电活动信号,沿着传入神经,背根神经节到达脊髓背角或叁叉神经脊束核中的相关神经元,再由对侧的腹外侧索传至丘脑、其他脑区以及大脑皮质,产生痛觉,从而对有害刺激做出回避反应。另一方面,过度的疼痛会产生负面影响,长期的剧烈疼痛会对机体产生难以忍受的精神和躯体的折磨,所以减轻异常疼痛,提高人类生活质量始终是医学研究的关注点。介导疼痛的传导通路及分子作用复杂,在疼痛机制的研究长河中各种学说层出不穷。其中,作为疼痛四大学说之一的闸门控制学说相对比较确切的阐述了病理性疼痛的发生机制,认为在整个痛觉的传导过程中,脊髓背角胶状质(Substantia gelatinosa,SG)中的某些神经细胞控制着痛觉信息的传递,作用机理类似闸门的开放,这些神经元本身就受粗、细纤维传入活动和高级中枢下行控制作用的影响,本学说的提出为揭示疼痛的发生机制开辟了新的方向,基于此理论,我们意识到,脊髓背角胶状质作为疼痛传导的中枢起着信息转换的重要作用,必然也是研究开发新型镇痛药物的重要靶点。癫痫是因脑部神经元异常放电引起的一组临床综合征,由已知或未知病因引起,临床特征表现为反复、短暂、刻板的神经系统功能失常。随着人类医学研究的不断进步,新时期提出的整合医学认为将相关各领域最先进的医学发现加以整合可以形成更加全面的医学知识体系。随着人们对癫痫和疼痛机制研究的不断深入,循着整合医学的方向,查阅资料后我们发现癫痫和疼痛的的发病机制部分类似。新型抗癫痫药物卢非酰胺属于叁唑类衍生物,目前临床作为辅助治疗药物应用于4岁以上儿童和成人Lennox-Gastant综合征(LGS)相关癫痫发作。研究发现它不仅在癫痫的治疗上作用显着,而且具有潜在的镇痛作用,与此同时,它具有稳定情绪的独特优势。近年来,卢非酰胺已经成功用于癫痫疾病的治疗,但是镇痛机制尚不明确,尤其是对疼痛重要调节位点的脊髓背角胶状质神经元及其突触传递的作用机制缺乏有力的研究报道。本课题主要利用动物行为学测试技术、膜片钳全细胞记录探讨卢非酰胺对脊髓背角SG神经元的兴奋性以及对伤害性刺激突触传递的影响,为阐明卢非酰胺的脊髓背角镇痛机制提供实验依据。实验一:卢非酰胺对腰5脊神经结扎(Spinal nerve ligation,SNL)神经病理性疼痛大鼠模型的镇痛作用目的:观察抗癫痫药物卢非酰胺对腰5脊神经结扎神经病理性疼痛大鼠模型(SNL)的机械、热痛觉超敏的影响。方法:选取180~220g雄性SD大鼠,于SNL模型制作前3d给予连续的相同时间同一环境适应,前1d测定大鼠疼痛基础阈值。选取疼痛阈值在正常范围内的大鼠制备腰5脊神经结扎(SNL)神经病理性疼痛动物模型。术后5d同一时间测试机械性缩足反射阈值、热痛缩足反射潜伏时间,若疼痛阈值未下降或出现后足偏瘫,行为异常视为造模失败,剔除出组。神经病理性疼痛动物模型被随机分为叁组:(1)大剂量实验组:将50 mg/kg卢非酰胺溶入1%DMSO中,生理盐水稀释至1ml,单次腹腔注射。(2)小剂量实验组:25 mg/kg卢非酰胺溶入1%DMSO中用生理盐水稀释至1ml单次腹腔注射。(3)对照组:与实验组等体积、等比例的1%DMSO单次腹腔注射。分别于注射后20 min、40 min、60 min、4 h、12 h、24 h进行行为学评估。观察卢非酰胺对大鼠L5神经损伤后形成的神经病理性疼痛的镇痛效果。结果:SNL术前对大鼠基础疼痛阈值进行测定,左、右后足机械性缩足反射阈值(PWMT)分别为(21.87±5.69)g和(18.33±4.18)g,热痛缩足反射潜伏时间(TWL)为(24.43±3.32)s和(22.31±4.28)s,无统计学差异。术后第5 d,形成稳定神经病理性疼痛,与术前相比,左后足的阈值显着降低至(6.00±2.13)g(P<0.001,one-way ANOVA,n=22),热痛缩足反射潜伏时间降为(13.45±2.17)s(P<0.001,one-way ANOVA,n=22),证实模型建立成功。当腹腔注射不同浓度的卢非酰胺后,测试机械、热痛阈值发现两种浓度的卢非酰胺均可以显着缓解已形成的慢性疼痛,并且镇痛作用具有明显的浓度依赖性,并在给药后1 h作用达到高峰,与溶剂组相比可显着提升大鼠术侧机械性缩足反射阈值至(19.99±7.17)g和(17.00±7.32)g(P<0.001,one-way ANOVA,n=8),增加热痛缩足反射潜伏时间至(16.23±3.14)s和(19.90±2.41)s(P<0.001,one-way ANOVA,n=8)这一作用可维持至注药后12 h。实验二:卢非酰胺对脊髓背角胶状质(SG)神经元兴奋性的影响目的:应用膜片钳全细胞记录技术,在脊髓矢状位切片上观察卢非酰胺对SG神经元动作电位(Action potential,AP)发放频率的影响。方法:取4~5周龄雄性SD大鼠,制备厚度为400-500μm带后根的脊髓腰骶膨大段矢状位切片。低倍镜下确定脊髓背角浅层,高倍镜下选择状态较好的SG神经元做全细胞记录,钳制电流为0 p A,待细胞状态稳定5 min后。观察卢非酰胺对SG神经元动作电位发放频率的影响。结果:抗癫痫药物卢非酰胺可显着减少脊髓背角SG神经元动作电位的发放频率(P<0.01,paired t-test),给予一段时间洗脱,卢非酰胺的抑制作用被成功逆转(P<0.01,paired t-test)。实验叁:卢非酰胺对伤害性感觉通路突触传递的选择性抑制作用目的:全细胞记录,电压钳模式下给予后根刺激,观察抗癫痫药物卢非酰胺对中等直径Aδ纤维和小直径C纤维介导的脊髓背角SG神经元的兴奋性突触后电流(e EPSCs)及自发性兴奋性突触后电流(s EPSCs)的影响。方法:同实验二,制备SD大鼠脊髓切片,选取SG神经元,钳制电压为-70 m V,给予从小到大的后根恒压电刺激,先记录给药前诱发的兴奋性突触后电流(e EPSCs)15条曲线,平均后作为对照,浴槽内不间断灌流200μM卢非酰胺1 min后相同方法再次记录,根据文献报道不同的纤维传导具有的电生理特异性,对记录的细胞进行分类统计。(1)观察卢非酰胺对Aδ纤维介导的e EPSCs的作用。(2)观察卢非酰胺对C纤维介导的e EPSCs的作用。(3)观察卢非酰胺对脊髓背角SG神经元s EPSCs的影响。结果:(1)单次灌流不同浓度的卢非酰胺对Aδ纤维介导的e EPSCs几乎不产生影响(P>0.05,paired t-test)。(2)卢非酰胺可显着抑制C纤维介导的e EPSCs的峰值(P<0.01,paired t-test)。(3)卢非酰胺灌流可以明显抑制SG神经元s EPSCs的发放频率(P<0.001,paired t-test),但对其幅度没有明显影响(P>0.05,paired t-test)。结论:1.单次腹腔注射不同浓度的卢非酰胺均可以有效缓解已形成的慢性疼痛,镇痛作用在给药后1h达到高峰且具有浓度依赖性。2.卢非酰胺可以显着抑制脊髓背角SG神经元动作电位的发放频率,这一抑制作用可以在给药后10 min内被有效洗脱。3.不同浓度的卢非酰胺几乎不影响Aδ纤维支配的单突触SG神经元所产生的e EPSCs峰值,与对照组e EPSCs相比,无统计学意义。卢非酰胺可以显着抑制C纤维介导e EPSCs的峰值,作用时间大于10 min。持续灌流卢非酰胺1 min还可以显着降低SG神经元s EPSCs的频率,但不影响s EPSCs的幅度。(本文来源于《第四军医大学》期刊2015-05-01）
刘洁,白晓光,刘暾,李建民,王群[6]（2015）在《卢非酰胺选择性抑制大鼠C纤维介导的伤害性初级传入发挥镇痛作用》一文中研究指出目的:探讨抗癫痫药物卢非酰胺(rufinamide,RUF)对脊髓背角II层胶状质(substantia gelatinosa,SG)神经元兴奋性和突触传递的影响及其在神经病理性疼痛动物模型上的镇痛作用。方法:利用膜片钳技术,对SG神经元进行全细胞记录,观察卢非酰胺对神经元动作电位(action potentials,AP)发放频率及后根刺激诱发的兴奋性突触后电流(evoked excitatory postsynaptic currents,e EPSC)幅度及自发性兴奋性突触后电流(spontaneous excitatory postsynaptic currents,s EPSC)的影响。制备大鼠腰5脊神经结扎模型(spinal nerve ligation,SNL),观察腹腔注射卢非酰胺对机械性缩足反射阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT)的影响。结果:电生理结果显示:灌注卢非酰胺可明显抑制由C纤维介导的单突触e EPSC幅值,这一作用经洗脱可恢复至加药前,但对Aδ纤维介导的e EPSC幅度的抑制作用无统计学意义。卢非酰胺还可减少II层胶状质神经元动作电位的发放频率,减弱神经元的兴奋性,同时降低s EPSC的频率,但对其幅度没有影响。在大鼠SNL模型上,卢非酰胺能有效缓解由神经结扎引起的病理性疼痛,且镇痛作用具有浓度依赖性。结论:卢非酰胺可以通过减少SG神经元动作电位的发放频率,选择性的抑制脊髓背角浅层C纤维介导的伤害性初级传入而发挥镇痛作用。(本文来源于《神经解剖学杂志》期刊2015年02期）
解柔刚[7]（2014）在《伤害性初级传入的突触前及突触后NMDA受体介导慢性痛敏化的分子机制研究》一文中研究指出近年来，慢性痛的机制研究取得了长足的进展，大量的受体、通道、激酶系统在慢性痛的发生、发展中的作用逐渐被揭示。炎症或损伤后感觉神经元第一级突触的谷氨酸能突触的功能性变化在慢性痛的发展和维持中起关键作用[1]。在慢性疼痛中枢敏化的过程中，NMDA受体同样发挥着重要的作用。免疫组织化学研究显示NMDA受体广泛表达于中枢神经系统突触后神经元上，同时大量的研究表明，NMDA受体也同时表达在突触前终末以及背根节（dorsal root ganglion, DRG）神经元上[2-5]。DRG位于外周神经系统，位于其内的中、小型神经元，包括其胞体及中枢突和外周突的A和C纤维，主要负责感受和传递痛觉信息，因此又被称为痛感受器或伤害性感受器（nociceptor）。由于这些受体可被痛感受器自身释放的谷氨酸所激活，所以又被称为痛感受器的自身受体或自受体(autoreceptor)。脊髓背角突触前终末释放谷氨酸可被多种因素影响，其中激活I类促代谢型谷氨酸受体[6]、P2X3受体会导致突触前末梢释放谷氨酸增加，而激活μ-阿片受体[7]、α2肾上腺素能受体[8]、CB1大麻素受体[9]、GABAB受体[10]以及II类和III类促代谢型谷氨酸受体[11]都可以导致突触前谷氨酸释放的降低。谷氨酸能突触的功能主要能被叁个因素影响：①突触前谷氨酸能神经元释放的谷氨酸量；②进入突触间隙中谷氨酸转运体摄取谷氨酸的比率；③突触后膜上功能性谷氨酸受体的数量[12]。在其他神经系统的研究表明，突触前NMDA受体可以调节海马、小脑等部位的突触递质释放[13-18]。Bardoniet等[3]在正常动物的脊髓薄片标本上的研究表明，激活外周传入末梢的突触前NMDA受体，可以抑制脊髓背角eEPSC的幅值，延长eEPSC的潜伏期；进一步表明突触前NMDA受体的激活可以抑制脊髓背角Lamina II神经元的突触传递[3],这一结果提示突触前的NMDA自身受体可能对痛觉信息的传入产生负反馈调节作用。因此，突触前末梢释放的谷氨酸可直接作用于突触前的NMDA受体，产生复杂多样的作用。传统观念认为其最主要功能是作为负反馈抑制突触前递质的释放，从而防止突触间隙的递质浓度过高。前期研究表明，激活吗啡耐受大鼠的突触前NMDA受体可以增强突触前末梢谷氨酸的释放[5]。在癫痫动物模型上，激活前脑突触前NMDA受体也可以导致突触前末梢谷氨酸的释放增加[19,20]。免疫组织化学和免疫印迹实验结果发现在损伤或炎症诱发的慢性痛状态下，痛感受器NMDA自身受体的表达水平明显升高[4,21-23]。功能学研究结果显示慢性痛状态下痛感受器NMDA自身受体的功能活动呈现明显增强，例如，实验性结肠炎诱发痛感受器NMDA自身受体的磷酸化水平显着升高、NMDA诱发的内向电流幅度和细胞内钙浓度明显上升[4]。这些研究结果均提示慢性痛状态下，痛感受器NMDA自身受体的功能状态显着增强。鞘内注射NMDA激活突触前NMDA受体可以导致外周终末释放P物质[24]。Yan等[25]发现，在外周损伤的情况下，突触前NMDA受体活动的增强则可以提高突触前谷氨酸的释放。在病理状态下，已有的行为学研究显示，局部注入NMDA受体拮抗剂对炎症或损伤诱致的痛过敏和神经元放电增强具有显着的抑制作用而非增强作用[26-28]。这些结果提示在炎症或损伤的情况下，突触前NMDA受体可能发生了活动依赖性改变，即在脊髓浅层由生理状态转为炎症病理状态时，突触前NMDA受体对突触传递的抑制效应转变成兴奋效应。尽管上述结果提示外周部位的NMDA受体可能在病理状态下具有致痛敏作用，但这些结果均来自于外周局部注入NMDA受体拮抗剂，而这些拮抗剂的特异性、作用时程以及确切的作用靶点都难以确定，因此上述结果还不能确切揭示痛感受器NMDA自身受体在病理状态下的具体作用及功能。综上所述，为了特异性地揭示痛感受器NMDA自身受体是否在慢性病理性痛中发挥着致痛敏作用，我们应用Cre-loxP技术在痛感受器上建立了条件性敲除NMDA自身受体的必需组分——功能亚单位NR1基因的转基因动物模型，即特异性地剔除痛感受器NMDA自身受体的正常结构和功能，而保留中枢神经系统以及非神经系统的NMDA受体结构和功能完整。本研究在痛感受器上建立了条件性敲除NMDA自身受体的转基因动物模型，进一步研究突触前NMDA受体在生理状态以及病理状态下对伤害性感受神经元第一级突触的作用，从而研究病理过程中的突触前NMDA受体的活动依赖性改变，为进一步认识NMDA受体的作用和功能奠定基础。有研究表明脊髓背角浅层的突触后神经元上的离子通道变化在慢性痛的中枢敏化过程中发挥重要作用。突触后神经元内Ca2+浓度的动态变化可以编码突触前后神经元的动作电位时序，进而启动引起突触传递效率改变的胞内过程[29-31]。一般认为，重复在EPSP之后刺激突触后神经元产生动作电位可以高度激活突触后NMDA受体，产生大幅度的Ca2+内流，激活钙离子/钙调蛋白依赖的蛋白激酶II(CaMKII)而导致LTP的产生。因此，突触后NMDA受体的功能性改变对中枢敏化的产生及发展起关键性作用。CCL2又称为单核细胞趋化因子-1(monocytes chemoattractant protein1,MCP-1)，其可以招募单核细胞到达炎症、感染、外伤、局部缺血等部位。大量实验表明CCL2与疼痛密切相关[32-35]。电生理实验发现在培养DRG神经元上充灌CCL2可以导致细胞内钙离子浓度增加[36]。同时表现出神经病理性痛行为的动物DRG神经元在给予CCL2后可发生显着的去极化[35,37]。CCL2导致的痛感受器敏化可能是由于其激活了TRP通道以及抑制了K+电导[37-39]。Yang等的研究表明，CCL2抑制了一种电压依赖的不失活的外向流，推测可能是外向整流钾电流[40]。CCL2通过轴浆运输从DRG输送到外周神经终末，从而在皮内注射CCL2也可以直接导致机械痛敏反应的增强[41]。同时大量的研究表明，外周神经损伤后，CCL2可能作为一种神经调制，从外周神经到脊髓背角具有活动依赖性释放的特征[34,42,43]，即不同的病理条件可以通过调节CCL2的释放，进而影响病理性过程。也有研究表明，CCR2也表达在脊髓背角神经元胞体[43,44]。但是神经元胞体上的CCR2结合了CCL2后如何发挥功能尚未见报道。我们的研究进一步发现，CCL2可以结合脊髓背角神经元上的CCR2，通过进一步激活细胞外信号相关蛋白激酶(extracellular signal regulated kinases，ERK)信号通路，从而导致脊髓背角突触后神经元NMDA受体通道功能的上调，进而对慢性痛发挥进行调节，而这种作用主要是通过NR2B亚单位介导的。炎症条件下，花生四烯酸可以通过Cox酶解产生前列腺素(prostglandin，PG)，其中前列腺素E2(PGE2)参与炎症反应，并可以刺激外周神经末梢引起痛觉敏化，而Cox-2的表达在炎症刺激下显着升高。而抑制Cox-2即可以抑制PGE2。研究表明，在海马PGE2可以作用于突触前EP2受体从而导致突触前谷氨酸释放的增加[45]。大量研究表明，PGE2可以诱导CCL2/MCP-1的释放[46,47]。本研究结果表明，CCL2诱导的脊髓背角突触后神经元NMDA电流增强的作用不能被Cox-2阻断剂完全阻断，因此CCL2可直接作用于神经元胞体，通过ERK调节NR2B从而导致中枢敏化。第一部分痛感受器NMDA自身受体的致痛敏作用及其机制在慢性疼痛的中枢敏化过程中，NMDA受体发挥着重要的作用。大量结果提示外周部位的NMDA受体可能在病理状态下具有致痛敏作用，但是应用拮抗剂进行研究具有一定的局限性。目前的研究结果还不能确切揭示痛感受器NMDA自身受体在病理状态下的具体作用及功能，因此我们拟用在痛感受器上条件性敲除NMDA自身受体的转基因动物模型，进一步研究突触前NMDA受体在生理状态以及病理状态下对伤害性感受神经元第一级突触的作用，旨在研究病理过程中的突触前NMDA受体的活动依赖性改变，为进一步认识NMDA受体的作用和功能奠定基础。结果如下：1.建立SNS-NR1-/-小鼠我们应用Cre-loxP技术在痛感受器上建立了条件性敲除NR1亚单位的转基因动物模型。电生理实验中，灌流给予NMDA可在NR1fl/fl小鼠中IB4-Fluor488阳性标记的伤害性DRG神经元上诱致一显着的内向电流，并且对NMDA受体拮抗剂AP5敏感；而NMDA诱发的内向电流在SNS-NR1-/-小鼠中几乎被完全阻断，说明在DRG神经元上，伤害感受性神经元的NMDA受体功能被完全敲除，而其他非伤害性感受神经元上的NMDA受体功能未受影响。2.行为学表型通过行为学研究发现，NR1fl/fl小鼠与SNS-NR1-/-小鼠的正常机械性痛域和热痛域没有显着性差异。在后肢足底皮下注射Capsaicin诱致的急性自发痛反应过程中，NR1fl/fl小鼠与SNS-NR1-/-小鼠在反应时间上也没有显着差异。Formalin诱致的第二相持续性自发痛反应程度在SNS-NR1-/-小鼠中显着低于野生型小鼠，而后肢足底注射CFA诱致的机械性痛域和热痛域则明显弱于野生型小鼠。3.机制探讨在DRG上应用全细胞膜片钳记录神经元，用串刺激使神经元释放谷氨酸，在串放电之后可以见到明显的内向电流，并且这个内向电流可以被NMDA受体阻断剂AP5所阻断。说明DRG释放的谷氨酸可以作用于周围神经元或者自身NMDA受体并发挥功能。NR1fl/fl小鼠与SNS-NR1-/-小鼠的IB4-Fluor488阳性标记的伤害性DRG神经元静息膜电位、基强度以及阈值都没有显着差异。在CFA足底注射24h后，NR1fl/fl动物神经元的静息膜电位、基强度以及阈值显着降低，而SNS-NR1-/-动物的IB4-Fluor488阳性标记的伤害性DRG神经元的静息膜电位、阈值显着降低，但是基强度无变化。而在对照组中，NR1fl/fl小鼠及SNS-NR1-/-小鼠中DRG神经元的静息膜电位、基强度以及阈值无显着变化。研究发现，在NR1fl/fl小鼠，IB4-Fluor488阳性标记的伤害性DRG神经元在采用不同斜率的斜波注入电流引起的神经元放电的个数在CFA注射24h后显着升高，而在SNS-NR1-/-小鼠IB4-Fluor488阳性标记的伤害性DRG神经元，CFA足底注射24h后并无显着变化。通过电生理实验给予背根2Hz低频条件刺激，在NR1fl/fl小鼠向PAG投射的脊髓背角I层神经元上可诱导长时程增强现象(LTP)。而在特异性敲除突触前NMDA受体的SNS-NR1-/-小鼠上，向PAG投射的脊髓背角I层神经元上的LTP被显着抑制。第二部分CCL2对脊髓背角Lamina II突触后神经元NMDA受体的直接作用本文拟对脊髓背角Lamina II神经元NMDA受体进行检测，观察单核细胞趋化因子-1(MCP-1)对脊髓背角Lamina II神经元NMDA受体的作用，进一步阐释炎性致痛敏过程中，激活小胶质细胞以及星形胶质细胞释放的细胞因子、趋化因子不仅仅可以通过作用于小胶质细胞本身增强突触后神经元的反应性，也可以通过趋化因子直接作用于突触后神经元胞体，从而通过直接调控突触后胞体上NMDA受体的表达来调控神经元的反应特性，突触后NMDA受体的活动依赖性改变可以进一步引起中枢敏化，造成炎性损伤。结果如下：1. CCL2诱致动物痛行为反应增强对11只8w C57BL/6动物进行行为学检测发现CCL2可以诱导痛行为增强。给予C57BL/6小鼠单次鞘内注射100μl的CCL2可以诱发炎症痛敏反应，导致缩足反射的潜伏期缩短。应用CCL2的天然受体CCR2的拮抗剂RS504393，可以抑制CCL2诱发的炎性痛敏反应。CFA注射1d后，C57BL/6表现出持续的机械痛敏及热痛敏行为学表型。而腹腔注射RS504393后，CFA导致的机械痛敏及热痛敏被显着地抑制。CFA注射1d后，C57BL/6表现出的持续机械痛敏及热痛敏可以被NR2B的抑制剂Ifenprodil所阻断。2.炎症损伤后CCL2和CCR2表达上调实时定量PCR(Real-time PCR)显示脊髓的CCR2mRNA的表达在CFA导致的炎性痛中明显上调。通过Western blot研究发现CCL2可以显着增强NR2B的蛋白水平,而腹腔注射RS504393可以减弱这种表达增强。3. CCL2致痛敏作用的细胞分子机制通过在神经元上进行全细胞膜片钳实验以及单细胞PCR发现，5例Lamina II神经元上中的4例神经元可以诱导出NMDA电流，并且其中的两例CCL2可增强NMDA诱发电流，提示NMDA受体与CCR2可共表达；单细胞PCR实验发现可以诱发NMDA电流的神经元同时也表达囊泡谷氨酸转运体2；表达囊泡抑制性氨基酸转运体的抑制性神经元并不能诱发NMDA电流，提示NMDA受体可能不表达在抑制性神经元上。Westen blot实验发现，CCL2可以直接增强神经元pERK的水平，同时这种增强作用可以被细胞内加入pERK的阻断剂PD98059所阻断，同时也可被细胞外加入CCR2抑制剂RS504393所阻断。电生理学实验结果进一步显示，表面灌流CCL2(100ng/ml)可以导致NMDA电流的显着增加，而这种增加可以被CCR2的拮抗剂RS504393所阻断。同时发现CCL2可以增强CFA致炎性痛敏动物Lamina II神经元的NMDA电流。突触的电生理学实验表明，表面灌流CCL2/MCP-12min并不能增强AMPAR介导的诱发兴奋性突触后电流(evoked excitatory postsynaptic current, eEPSC)，但是显着增强了NMDAR介导的eEPSC。表明CCL2可以直接或者间接作用于突触后NMDA受体从而引发突触后作用。在CFA注射24h后炎性痛敏动物脊髓背角Lamina II神经元表面灌流CCR2拮抗剂RS504393可以在短时间内(＜2min)显着降低NMDA诱发电流。应用NR2B的特异性阻断剂Ifenprodil，可以部分阻断脊髓背角Lamina II神经元上的NMDA电流，同时也可以阻断CCL2对NMDA电流的增强作用。应用在体电生理实验技术，在麻醉动物脊髓背角记录场电位EPSP(fEPSP)给予强直条件刺激后，可以在脊髓背角诱发fEPSP的增强，这种增强可以持续数小时。研究发现，在体脊髓诱发的LTP可以被RS504393翻转。结论：1.在生理状态下，脊髓背角第一级突触的突触前NMDA受体，对伤害性信号的突触传递主要发挥抑制性调控作用。2.在慢性炎症病理状态下，脊髓背角第一级突触的突触前NMDA受体发生活动依赖性改变，对伤害性信号的突触传递发挥增强效应，加剧中枢痛敏的形成。3. CCL2/MCP-1直接作用于脊髓背角突触后神经元胞体CCR2受体。4. CCR2的激活可以导致ERK磷酸化增加，并进一步通过NR2B导致突触后NMDA受体活动性增强。(本文来源于《第四军医大学》期刊2014-05-01）
基鹏,姜涛,李羽,王儒蓉[8]（2014）在《大剂量辣椒素耗竭初级感觉传入神经对兔肺缺血再灌注损伤氧化应激的影响》一文中研究指出目的运用化学去神经法阻断辣椒素敏感的C类神经纤维(CapsCF),观察对肺缺血再灌注损伤(IR)的影响,并探讨氧化应激反应在其中的作用。方法新西兰大白兔32只随机分为4组:假手术组(S组)、肺缺血再灌注组(IR组)、辣椒素组(CS组)、辣椒素肺缺血再灌注组(CIR组)。分别予以辣椒素(100mg/kg)或其载液皮下注射,5d后建立肺IR模型。实验终末检测血气分析,氧化应激指标〔丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)〕、肺组织湿干比,HE染色观察肺组织病理学改变。结果与S组和CS组比,IR组和CIR组动脉血氧分压降低(P<0.05),肺泡动脉氧分压差升高(P<0.05),肺组织湿干比升高,氧化应激反应加重(P均<0.05),病理学损伤加重。CIR组指标改变均较IR组加重(血气学指标除外)。结论化学去神经法阻断CapsCF,加重肺IR损伤,其机制可能与加重氧化应激反应有关。(本文来源于《四川大学学报(医学版)》期刊2014年02期）
路岩,王双燕,王守彪[9]（2013）在《大鼠叁叉神经初级传入神经元的NADPH-d分布》一文中研究指出目的探讨尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH-d)在大鼠叁叉神经节(TG)和叁叉神经中脑核(MTN)中的表达。方法大鼠常规麻醉、固定后,参照Paxinos和Watson的大鼠脑立体定位图谱,用冷冻切片机于Bregma-9.8mm和Bregma-7.4mm之间作MTN冠状切片,TG作水平切片,片厚均为20μm。每隔4张取一张,采用NADPH-d组织化学染色及计算机图像分析系统对所取脑片进行观察。结果在生理条件下,TG的初级感觉神经元大部分呈现阳性反应,在TG的神经元之间可见NADPH-d阳性神经纤维,形成细胞周围的篮样结构;NADPH-d阳性神经元在整个MTN从尾端到头端都有表达,有许多NADPH-d阳性神经纤维组成了稠密的丛。结论 NADPH-d在TG和MTN中高度表达,表明大鼠TG和MTN的叁叉神经的传入信息是由硝基能神经纤维传入。推测NO可能在口腔颌面部的疼痛和本体感觉中起到一定的作用。(本文来源于《青岛大学医学院学报》期刊2013年05期）
路岩,王双燕,王守彪[10]（2013）在《大鼠叁叉神经初级传入神经元的NADPH-d分布研究》一文中研究指出目的:探讨尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH-d)在大鼠叁叉神经节(TG)和叁叉神经中脑核(MTN)中的表达。方法:10%水合氯醛腹膜腔内注射麻醉、4%的多聚甲醛固定后,参照Paxinos和Watson的大鼠脑立体定位图谱,冰冻切片机,于Bregma-9.8mm和(本文来源于《华东六省一市第22届解剖与组织胚胎学学术年会暨山东解剖学会成立60周年纪念大会论文汇编》期刊2013-07-25）
初级传入论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
背景与目的疼痛是一种机体在感受到外在伤害性刺激后产生的不愉快感觉,根据其持续时间的长短,可分为急性痛和慢性痛两大类。其中,在慢性痛中又以慢性肌肉炎症痛(主要表现为职业性肌肉疼痛以及下腰痛)最为普遍,是一直困扰人们的一类慢性疾病。现有的研究表明:肌肉中存在着感受各类外界刺激的感受器,对伤害性压力刺激,伤害性冷、热刺激都有反应,特别是对于一些酸性物质、各类化合物,如ATP、5-TH、IL、NGF、capsaicin等都有反应。这些研究都基于对支配肌肉的神经纤维的电生理记录,对神经元细胞,特别是支配肌肉的外周神经元细胞的特性研究较少。另外,对于肌肉炎症痛,虽然有类似诸如中医膏药一样的治疗药物,但对于肌肉疼痛内在机制以及治疗手段的研究还是很少的。现在的观点认为膏药缓解肌肉炎症痛的机制是由于膏药自身透过皮肤,渗透到肌肉从而发挥的镇痛作用。这种说法存在着较大的争议,我们认为其机制很可能是膏药直接刺激皮肤,引起皮肤来源的伤害性传入,正是由于这种非肌肉来源的伤害性传入在脊髓的作用从而发挥的镇痛效果。因此,本研究旨在探究支配胫骨前肌的DRG伤害性痛觉神经元的基本类型和电生理特性以及探究激活皮肤来源的伤害性C纤维的传入能否抑制大鼠深部肌肉的炎症痛及其镇痛作用发生的部位。材料与方法成年Sprague-Dawley(SD)雌性大鼠,体重在180-220g之间,预先用荧光染料 1,1 '-dioctadecyl-3,3,3',3'-tetrame-thylindocarbocyanine perchlorate(Dil,200ug/mL)肌肉注射标定背根神经节(Dorsal root ganglion,DRG)中支配大鼠胫骨前肌的神经元,7-12天后取材进行免疫组织化学染色确定支配胫骨前肌的神经元类型,或是进行在体可视DRG电生理记录探究肌肉初级神经元的电生理性质。胫骨前肌注射完全弗氏佐剂(Complete Freund's adjuvant,CFA),建立大鼠肌肉炎症痛模型,大鼠后肢承重仪测定其炎症痛相关行为,伊文氏蓝渗出实验测定大鼠肌肉炎症情况。应用在体可视化DRG电生理记录的方法记录在L4、L5 DRG中特异支配胫骨前肌神经元的电生理活动(诱发放电、自发放电),并记录在皮肤(胫骨前肌前)涂抹了辣椒素(CAP),芥末油(MO)以及薄荷油(PO)以后(涂抹酒精作为对照),诱发放电和自发放电的变化。在此基础上,我们还在去皮肤神经支配的炎症痛模型上重复了上述实验。并观察了在涂抹上述叁种刺激性物质于非胫骨前肌前皮肤(脚掌皮肤、大腿内侧皮肤)的神经元放电情况。另外,在肌肉炎症痛模型上,我们还探讨了在切断被记录的DRG背根神经纤维后,在胫骨前肌前皮肤涂抹上述叁种刺激性物质后神经元放电情况。结果1、被荧光染料Dil着色的细胞主要出现在L3-L5DRG上,表明支配胫骨前肌的初级神经元主要集中在L3-L5 DRG中(不存在于L2与L6 DRG中)。其中,在L4上的数量最多,达26.47±7.94个。L3和L5次之,分别为19.82±7.12和14.21±4.98个。2、对L3-L5DRG上的神经元进行免疫组化染色表明:在支配胫骨前肌的所有神经元(DiI+)中,肽能神经元(CGRP+)在DRG上分别占31%、25.78%和21.53%;非肽能神经元(IB4+)分别占支配胫骨前肌神经元总数45.66%、45.44%以及39.83%。TRPV1+细胞分别占支配胫骨前肌神经元数量26.94%、27.32%、32.09%。3、在正常大鼠中,记录到的肌肉C伤害性痛觉神经元中(传导速度在1.5m/s以下),其机械疼痛阈值较支配皮肤的疼痛神经元明显增高(达到80mN以上),其感受野都位于胫骨前肌上,感受野面积较位于皮肤上的感受野相比明显更广,且外周感受野部位易发生变化。4、在大鼠胫骨前肌注射CFA2d后,大鼠胫骨前肌就出现明显的肿胀。大鼠后肢承重实验表明,在注射CFA 1d后大鼠实验侧后肢承重能力较对侧明显下降。伊文氏蓝渗出实验表明大鼠患肢胫骨前肌出现了明显的肌肉炎症。5、在体电生理实验表明,在炎症痛大鼠中,L4及L5DRG上特异支配胫骨前肌的初级神经元,其外周感受野对机械刺激的的敏感性明显升高,并出现自发放电的情况。并且这种机械阈值的下降和自发放电可以被在胫骨前肌的皮肤上涂抹CAP、MO、PO叁种刺激性物质所逆转。行为学的后肢承重实验也证实了这一点。6、在去皮肤神经支配的炎症痛大鼠模型中,皮肤涂抹上述叁种物质,其镇痛效果消失。并且将上述叁种物质涂抹于非胫骨前肌前的皮肤(脚掌、大腿内侧皮肤),也无镇痛效果。行为学实验同样证明了这一点。在剪断记录神经节背根的肌肉炎症痛大鼠中,皮肤涂抹上述3种物质也无任何镇痛效果。结论1、DRG中特异支配胫骨前肌的初级神经元只分布于L3-L5 DRG中,这些神经元中,肽能神经元(CGRP+)、非肽能神经元(IB4+)以及TRPV1+神经元都有。2、支配肌肉的初级感觉神经元,其对于外界机械刺激反应的阈值较支配皮肤的神经元高,外周感受野的范围也更广,且易发生移动。3、往肌肉表面的皮肤涂抹激活皮肤伤害性C纤维传入的物质,能够缓解CFA引起的肌肉炎症痛,其镇痛作用发生的机制主要是化合物直接刺激皮肤后产生的伤害性传入对肌肉疼痛的抑制作用。4、激活与肌肉传入纤维在脊髓当中位于同一节段或是相邻节段的皮肤支配神经伤害性传入才能镇痛。5、激活肌肉表面皮肤伤害性传入纤维,缓解CFA引起的肌肉疼痛的机制可能存在于脊髓或大脑中枢神经系统中。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
初级传入论文参考文献
[1].邱欣彤,史英武,张明明.小鼠盆神经初级传入在脊髓的局部调控及与上级神经元的纤维联系[J].神经解剖学杂志.2019
[2].方烨红.体表刺激性传入对炎症引起的肌肉初级痛觉神经元异常电活动的抑制[D].北京协和医学院.2018
[3].柳栋.BDNF对不同初级传入神经元VGLUT3和VMAT2的调控机制研究[D].山东大学.2017
[4].林世德,张俊江,臧宇杰,赵廷宝.脊髓损伤相关中枢性疼痛与CGRP阳性的初级传入纤维再生的相关性研究[J].中国矫形外科杂志.2016
[5].刘洁.卢非酰胺选择性抑制C纤维介导的伤害性初级传入发挥镇痛作用[D].第四军医大学.2015
[6].刘洁,白晓光,刘暾,李建民,王群.卢非酰胺选择性抑制大鼠C纤维介导的伤害性初级传入发挥镇痛作用[J].神经解剖学杂志.2015
[7].解柔刚.伤害性初级传入的突触前及突触后NMDA受体介导慢性痛敏化的分子机制研究[D].第四军医大学.2014
[8].基鹏,姜涛,李羽,王儒蓉.大剂量辣椒素耗竭初级感觉传入神经对兔肺缺血再灌注损伤氧化应激的影响[J].四川大学学报(医学版).2014
[9].路岩,王双燕,王守彪.大鼠叁叉神经初级传入神经元的NADPH-d分布[J].青岛大学医学院学报.2013
[10].路岩,王双燕,王守彪.大鼠叁叉神经初级传入神经元的NADPH-d分布研究[C].华东六省一市第22届解剖与组织胚胎学学术年会暨山东解剖学会成立60周年纪念大会论文汇编.2013
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