导读:本文包含了细胞提纯论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:细胞,干细胞,流式,层析,骨髓,蛋白,胰岛。
细胞提纯论文文献综述
谢炬平,蒋小峰,黄镇辉,张大伟,梁浩[1]（2019）在《人胰岛细胞消化与提纯改良方法研究》一文中研究指出目的探讨改良人胰岛细胞消化与提纯方法。方法胰腺供体来源于20例成人公民逝世后器官捐献(DCD)供者捐献,由广州医科大学附属第二医院器官移植中心提供,且通过医院伦理委员会审查。供者男13例,女7例;平均年龄(45±7)岁。4℃的UW液腹主动脉灌注后迅速将胰腺切除,胰腺组织4℃UW液保存,胰管修剪后灌注胶原酶V,放入新型自制改良胰腺消化罐,38℃的胶原酶消化液恒温消化30 min,通过不连续密度梯度法分离提纯胰岛细胞,通过双硫腙(DTZ)染色显示胰岛细胞,计算胰岛当量。吖啶橙(AO)染色法测定存活率。结果共消化20例成人胰腺,胰腺组织消化率为92.7%。单次消化的胶原酶使用量为400 ml。胰岛细胞经过DTZ染色后呈猩红色的类圆形胰岛细胞团。每条胰腺消化后的胰岛细胞当量为(69±28)×10~3 IEQ/g,提纯后为(53±29)×10~3 IEQ/g,纯度为79%。胰岛存活率为(94.1±2.3)%。结论采用我院新型自制改良胰腺消化罐可获得良好的人胰岛素细胞消化和提纯效果,且可明显减少胶原酶的使用量。(本文来源于《中华肝脏外科手术学电子杂志》期刊2019年06期）
周小丹,罗金,漆倩荣,谢青贞,钟方圆[2]（2019）在《黄素化颗粒细胞分离提纯方法的比较研究》一文中研究指出目的比较不同人卵巢颗粒细胞分离提纯方法的效果。方法收集体外受精-胚胎移植(IVF-ET)患者取卵后的卵泡液,分别采用密度梯度离心法、红细胞裂解法、密度梯度离心法+红细胞裂解法分离、提取黄素化颗粒细胞,比较3种方法获取的细胞数量、存活率、纯度以及生长、贴壁情况。结果密度梯度离心法获取的颗粒细胞数量最低,但体外培养生长状态良好且细胞贴壁状态最佳;红细胞裂解法获取的颗粒细胞数量均多于其他两种方法(P<0.05),但细胞存活率低,体外培养生长状态欠佳、细胞贴壁差;卵泡刺激素受体(FSHR)细胞免疫组化及荧光鉴定显示3种方法获取的颗粒细胞纯度均>90%。结论密度梯度离心法获取的细胞数目少,但生长状态及贴壁情况最佳,是分离提纯颗粒细胞较为理想的选择方法。(本文来源于《生殖医学杂志》期刊2019年06期）
王超[3]（2017）在《人脑胶质瘤细胞源性外泌体的分离与提纯研究》一文中研究指出目的:体外培养U251细胞,分别利用差速离心法和试剂盒两种方法分离、提纯exosome,证明分离提纯的物质为exosome,并对两种方法进行优缺点比较。方法:体外培养U251细胞,观察细胞贴壁生长良好后,将培养基更换为不添加小牛血清的培养基,1周后将细胞培养上清液分两组进行收集,分别以差速离心法、试剂盒提纯exosome。然后在电子显微镜下通过液相载网法观察形态,并照相,确认exosome存在,对比两组的形态结构,记录直径大小,并对两种方法进行比较。结果:U251细胞可以分泌exosome,exosome小囊泡均能够在差速离心法和试剂盒两种方法下提取到。通过差速离心机进行差速离心提取的exosome与试剂盒提取的exosome结构相同,电镜结构为小囊泡状,表现为球体、椭球体,中央为低密度区,周围深染。两组测量直径均在35~160nm之间,差速离心法组测量直径均值为99.33±4.21nm,试剂盒组测量直径均值为98.08±4.13nm,经统计学分析两组方法提取的exosome直径随机抽样结果无显着性差异。结论:胶质瘤细胞可以分泌exosome。差速离心法、试剂盒均可以分离和提纯到形态结构相同的exosome。试剂盒具有操作相对简单,耗时短,样本需求量少等优点,但提取纯度低,科研成本高,临床难以普遍应用。差速离心法操作步骤繁多,耗时长,样本需求量大,但技术易掌握,科研成本低,提取纯度高,有助于exosome进一步研究以及向临床应用转化。(本文来源于《宁夏医科大学》期刊2017-03-01）
唐勇,阳普山,吴剑宏,贾治伟,伍耀宏[4]（2015）在《人髓核间充质干细胞的分离提纯方式及生物学活性鉴定》一文中研究指出目的 :探索人髓核间充质干细胞(nucleus pulposus mesenchymal stem cells,NPMSCs)的提纯方法并鉴定其生物学活性。方法:收集3例腰椎间盘突出症患者的退变髓核组织(Pfirrmann分级均为Ⅳ级),利用酶消化法分离细胞。采用两种方法分离提纯NPMSCs,一组细胞采用贴壁法培养(贴壁组),另一组通过流式细胞分选技术利用NPMSCs表面阳性标志物CD73、CD90、CD105获得NPMSCs(流式组)。将两种方法获得的NPMSCs进行体外培养扩增,分别进行形态学观察,细胞计数试剂盒(Cell Counting Kit,CCK-8)检测增殖能力。贴壁组NPMSCs采用流式细胞分选仪在进行分选之前检测免疫表型,流式组NPMSCs在生长达80%~90%融合时进行免疫表型的检测。向成骨、成脂、成软骨诱导分化,诱导28d后分别进行茜素红染色观察其成骨能力、油红O染色观察其成脂能力、甲苯胺蓝染色观察其成软骨能力,利用Imag J软件计算染色区域所占的面积百分比。比较两组NPMSCs在形态学、免疫表型及增殖和分化能力的差异。结果:形态学观察发现,两组NPMSCs均呈漩涡状生长,贴壁组NPMSCs可见散在的单个细胞生长;流式组NPMSCs长梭形形态更长,排列更加紧密,少见散在的单个贴壁生长细胞。流式细胞分选后所得的NPMSCs占细胞总数的(89.67±2.52)%,可以进行体外培养扩增,细胞为典型的长梭形特征,漩涡状生长,在接种后12~15d达80%~90%融合,增殖能力在接种后5~13d明显高于贴壁组NPMSCs(P<0.05)。流式组NPMSCs的CD73、CD90、CD105的表达率明显高于贴壁组NPMSCs(P<0.05),并且低表达CD34、CD45及HLA-DR。两种方法获得的NPMSCs均能完成叁系诱导分化,流式组成骨、成脂、成软骨染色区域百分比均明显高于贴壁组(P<0.05)。结论:利用流式细胞分选技术从人退变髓核组织中可获得较高纯度的NPMSCs,并能进行后续培养扩增。与贴壁法获得的NPMSCs相比,流式细胞分选的NPMSCs具有更强的增殖与分化能力。(本文来源于《中国脊柱脊髓杂志》期刊2015年06期）
唐勇[5]（2015）在《人髓核间充质干细胞的分离提纯及生物学活性鉴定的实验研究》一文中研究指出目的:(1)运用贴壁法与流式细胞分选方法分离提纯人髓核间充质干细胞(nucleus pulposus mesenchymal stem cells,NPMSCs)。(2)从细胞形态、增殖特点、免疫免疫表型、叁系分化等方面比较两种方法获得的髓核间充质干细胞的生物学活性。方法:收集腰椎间盘突出症患者的退变髓核组织(Pfirrmann分级均为Ⅳ级),利用酶消化法分离细胞。分别采用两种方法分离提纯NPMSCs,一组细胞采用贴壁法培养,另一组通过流式细胞分选技术利用NPMSCs表面阳性标志物CD73、CD90、CD105获得NPMSCs。将两种方法获得的NPMSCs进行体外培养扩增,分别进行形态学观察,CCK-8检测增殖能力。向成骨、成脂、成软骨诱导分化,诱导28天后分别进行茜素红染色观察其成骨能力、油红O染色观察其成脂能力、甲苯胺蓝染色观察其成软骨能力,利用Imag J软件计算染色区域所占的面积百分比。比较两组NPMSCs在形态学,免疫表型以及增殖和分化能力的差异。结果:(1)流式细胞分选仪以PE-CD73、APC-CD90、V450-CD105作为表面阳性标志,分选出CD73+、CD90+、CD105+叁阳性的髓核间充质干细胞,平均获得数为(3.53±0.78)×106个,其比例约(89.67±2.52)%。贴壁法获得的髓核间充质干细胞CD73、CD90、CD105的阳性表达率,分别为(89.79±2.40)%,(94.07±2.31)%,(90.49±1.63)%。(2)经酶消化后的原代细胞在接种后5-7h贴壁,原代细胞呈长短不一的短梭形,待细胞生长达80-90%融合时,可见旋涡状生长或者以组织块为中心的漩涡形成,排列整齐。流式细胞分选方法获得的髓核间充质干细胞在接种后4-6h观察到贴壁生长,主要以旋涡状生长为主,少见散在的单个贴壁生长细胞,12-15天细胞可达到80-90%融合。(3)在培养4h-1d,流式组NPMSCs的增殖活力明显低于贴壁组NPMSCs(P<0.05),第3天两组OD值无明显统计学差异(P>0.05)。在第5d-13d,流式组NPMSCs增殖能力明显高于贴壁组NPMSCs(P<0.05)。(4)流式组NPMSCs流式细胞仪免疫表型的检测结果显示,CD73的表达率为(98.55±0.35)%,CD90的表达率为(98.47±0.57)%,CD105的表达率为(98.20±1.24)%,表达率明显高于贴壁组NPMSCs。流式组NPMSCs造血干细胞标志物CD45、CD34及HLA-DR等的表达率均低于4%。(5)成骨诱导分化:两组NPMSCs经诱导28天后,显微镜下可见细胞内有黑色不透光区域,经茜素红染色后可见细胞表面存在大量红染的钙盐沉积,肉眼观可见流式组NPMSCs红染面积多于贴壁组NPMSCs,应用Imag J软件进行图像分析,测得流式组NPMSCs红染面积的比例明显高于贴壁组NPMSCs(P<0.05)。成脂诱导分化:两组NPMSCs经成脂诱导28天后,显微镜下观察可见细胞内有大小不等的光亮圆形脂滴形成,经油红“O”染色均可见片状或点状的红染脂滴空泡,应用Imag J软件进行图像分析,测得流式组NPMSCs红染面积的比例明显高于贴壁组NPMSCs(P<0.05)。成软骨诱导分化:两组NPMSCs经诱导28天后,均可见乳白色的软骨微球形成,甲苯胺蓝染色后两种细胞均可见明显蓝染的软骨细胞,Imag J软件分析发现流式组NPMSCs蓝染软骨细胞面积明显高于贴壁组NPMSCs(P<0.05)。结论:本实验利用流式细胞分选技术从人退变髓核组织中获得较高纯度的NPMSCs,并能进行后续培养扩增。与贴壁法获得的NPMSCs相比,流式分选的NPMSCs具有更强的增殖与分化能力。流式细胞分选方法为研究NPMSCs的生物学特性提供了可靠的细胞分离与纯化方法。流式组获得的NPMSCs能够贴壁生长、完成叁系分化诱导,提供了人髓核组织中存在间充质干细胞的依据。(本文来源于《安徽医科大学》期刊2015-05-01）
王伟恒,邓国英,徐立璋,程自申,杨向群[6]（2015）在《水平振摇在骨髓间充质干细胞提纯中的作用》一文中研究指出目的研究水平振摇对全骨髓贴壁分离大鼠骨髓间充质干细胞在细胞数量、纯度、凋亡及远期增殖及分化能力的影响,探索更为简单、高效的间充质干细胞提纯方法。方法在全骨髓贴壁法的基础上,使用水平摇床,以180 r/min、4 h为干预条件,水平振摇后计算贴壁细胞总数量;使用流式细胞仪测定贴壁细胞纯度及凋亡情况;使用MTT法测定振摇后贴壁细胞24 h的增殖情况;对分离纯化后细胞使用定向诱导培养基进行诱导分化。结果经振摇处理后,获得的细胞总量有所下降,细胞纯度显着提升,凋亡略有增加,增殖情况变化不大,具有向成骨细胞和脂肪细胞分化的能力。结论水平振摇法可显着提高全骨髓贴壁法的提纯效率,具有推广价值。(本文来源于《脊柱外科杂志》期刊2015年01期）
胡春华,罗洁,李济金[7]（2014）在《大孔吸附树脂提纯绞股蓝黄酮类化合物对体外乳腺肿瘤细胞抑制及其MTA1 mRNA表达的影响》一文中研究指出目的探讨大孔吸附树脂提纯绞股蓝黄酮类化合物对体外培养的乳腺肿瘤MCF-7细胞株抑制作用及其作用机制。方法将浓度为25、50、100、200和400mg/ml大孔吸附树脂提纯绞股蓝黄酮类化合物培养液分为五组:A、B、C、D和E组。A、B、C、D和E组均作用于体外传代培养对数生长期乳腺肿瘤细胞株MCF-7细胞24h;使用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测五组各对乳腺肿瘤细胞株MCF-7的生长抑制率;用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测五组各对乳腺肿瘤MCF-7细胞株肿瘤转移相关基因1(MTA1)mRNA的相对表达量。结果 A、B、C、D和E组对乳腺肿瘤MCF-7细胞株抑制率A组<B组<C组<D组<E组,差异均有统计学意义(P<0.05);C组、D组和E组MTA1 mRNA的相对表达量均人低于空白对照组,且这叁组的MTA1 mRNA的相对表达量依次降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论大孔吸附树脂提纯绞股蓝黄酮类化合物能抑制乳腺肿瘤MCF-7细胞株增殖,且有剂量依赖性,其主要作用机制是通过下调MTA1 mRNA的表达,从而发挥抑制乳腺肿瘤MCF-7细胞株转移与抗乳腺肿瘤作用。(本文来源于《社区医学杂志》期刊2014年24期）
张萍,徐敏,严孝岭,高德玉,高文博[8]（2014）在《类风湿关节炎患者血清免疫复合物的提纯及对人脐静脉内皮细胞增殖能力的影响》一文中研究指出目的提纯并鉴定类风湿关节炎(RA)患者血清中免疫复合物(s-IC),并研究其对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖功能的影响。方法用G蛋白亲和层析法分别从抗瓜氨酸化蛋白抗体(ACPA)阳性(ACPA+)RA患者、SLE患者及健康人对照血清中提取IC,用SDS-PAGE对提取的s-IC进行纯度鉴定,用化学发光免疫分析法测定s-IC中ACPA含量,用western blot法鉴定纯化IC中的瓜氨酸化蛋白质。体外培养HUVEC,分别用RA患者血清IC(RA-IC)、SLE患者血清IC(SLE-IC)、健康人血清IC(C-IC)刺激HUVEC,培养24 h后,用CCK-8细胞增殖法检测细胞的增殖水平。结果用G蛋白亲和层析法可自血清中提取出纯度较高的IC,ACPA+RA患者血清经G蛋白柱纯化后,IC中ACPA的回收率可达56.85%。western blot结果显示,RA患者s-IC中在相对分子质量(Mr)25 000~55 000间出现较多SLE-IC和C-IC中未有的条带。用s-IC刺激体外培养的HUVEC,当s-IC浓度为50μg/mL时,RA-IC与SLE-IC组HUVEC的增殖水平均显着高于C-IC组(P均<0.01);当IC浓度为100μg/mL时,RA-IC组的HUVEC增殖水平显着高于SLE-IC与C-IC组(P均<0.01)。结论成功提取ACPA+RA患者s-IC,RA-IC能显着促进HUVEC增殖。(本文来源于《临床检验杂志》期刊2014年04期）
任瑞芳,黄良国,黄名璐,蒋国红,白洁[9]（2014）在《骨髓间质干细胞贴壁筛选法的提纯》一文中研究指出目的体外分离贴壁筛选大鼠骨髓间质干细胞(mesenchymaI stem cells,MSCs),并对MSCs的表面标志进行测定。方法分离4周龄的大鼠股骨、胫骨骨髓进行体外贴壁培养、筛选,取第1~10代的MSCs观察形态,并用流式细胞仪检测其表面标志。结果大鼠MSCs细胞形态呈长梭形,培养筛选至第3~6代时流式细胞术检测:CD29、CD90阳性率均在90%以上,CD45阳性率在10%以下。结论本方法分离纯化出的是MSCs,第3~6代时纯度最高。(本文来源于《中风与神经疾病杂志》期刊2014年03期）
任洪发[10]（2013）在《细胞催化法制备5’-肌苷酸二钠提纯工艺研究》一文中研究指出5’-肌苷酸二钠属于核苷类化合物，5’-肌苷酸二钠（简称5’-肌苷酸、IMP）和5’-鸟苷酸二钠（简称5’-鸟苷酸、GMP）组成的呈味核苷酸二钠（简称呈味核苷酸、I+G）是核苷酸类食品增鲜剂，具有呈味作用，与味精混合时会产生协同作用，其鲜度可以提高数十倍。采用酸性磷酸酶催化肌苷转化为5’-肌苷酸二钠的细胞催化合成法与化学合成法相比，具有反应条件温和、酶专一性强、安全环保等优点，受到国内外科研工作者的广泛关注。本文利用现代生化分离技术，对细胞催化法制备的5’-肌苷酸二钠反应液的提纯工艺进行了系统的研究。研究结果可为细胞催化法制备的5’-肌苷酸二钠反应液的提纯工艺提供有益的参考。研究了pH和温度对5’-肌苷酸二钠反应液稳定性的影响。结果表明，反应液在pH偏酸性情况下容易分解，在pH偏碱性情况下比较稳定；在弱碱性条件下，5℃至65℃的温度范围内，反应液中的5’-肌苷酸二钠含量保持稳定。研究了反应液的预处理与固液分离的方法，考察了凝聚、絮凝、加热、调节pH和添加助剂对反应液预处理的效果，考察了采用离心机、陶瓷膜、管式离心机和板框压滤机除去反应液中菌体等固形物的效果。结果表明，采用加热、调节pH和添加助剂的方法预处理反应液，然后进行板框压滤，可以有效进行反应液的固液分离。采用重量法测定了磷酸盐混合物、5’-肌苷酸二钠和肌苷的溶解度，考察了pH、温度对溶解度的影响。采用浊度法测定了磷酸盐混合物和5’-肌苷酸二钠的超溶解度，考察了温度对超溶解度的影响。综合分析了不同pH和温度条件下，溶解度和超溶解度以及介稳区的变化情况。分别对过滤清液中磷酸盐混合物、5’-肌苷酸二钠和肌苷进行了结晶工艺研究，确定了优选结晶工艺条件，按照优选条件进行了中试验证。对5’-肌苷酸二钠结晶产品进行了结构鉴定，按照食品添加剂5’-肌苷酸二钠行业标准QB/T4261-2011，对5’-肌苷酸二钠结晶产品进行了全项检测，结果表明产品完全符合行业标准。(本文来源于《华南理工大学》期刊2013-10-20）
细胞提纯论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的比较不同人卵巢颗粒细胞分离提纯方法的效果。方法收集体外受精-胚胎移植(IVF-ET)患者取卵后的卵泡液,分别采用密度梯度离心法、红细胞裂解法、密度梯度离心法+红细胞裂解法分离、提取黄素化颗粒细胞,比较3种方法获取的细胞数量、存活率、纯度以及生长、贴壁情况。结果密度梯度离心法获取的颗粒细胞数量最低,但体外培养生长状态良好且细胞贴壁状态最佳;红细胞裂解法获取的颗粒细胞数量均多于其他两种方法(P<0.05),但细胞存活率低,体外培养生长状态欠佳、细胞贴壁差;卵泡刺激素受体(FSHR)细胞免疫组化及荧光鉴定显示3种方法获取的颗粒细胞纯度均>90%。结论密度梯度离心法获取的细胞数目少,但生长状态及贴壁情况最佳,是分离提纯颗粒细胞较为理想的选择方法。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
细胞提纯论文参考文献
[1].谢炬平,蒋小峰,黄镇辉,张大伟,梁浩.人胰岛细胞消化与提纯改良方法研究[J].中华肝脏外科手术学电子杂志.2019
[2].周小丹,罗金,漆倩荣,谢青贞,钟方圆.黄素化颗粒细胞分离提纯方法的比较研究[J].生殖医学杂志.2019
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[4].唐勇,阳普山,吴剑宏,贾治伟,伍耀宏.人髓核间充质干细胞的分离提纯方式及生物学活性鉴定[J].中国脊柱脊髓杂志.2015
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论文知识图
