郭延松[1]2003年在《MMP-9/TIMP-1失衡与动脉粥样硬化的关系及氯沙坦作用的实验研究》文中认为目的：在动脉粥样硬化(AS)的研究中，斑块的胞外基质(ECM)成分的变化与疾病的进展有重要联系，而基质金属蛋白酶(MMPs)和金属蛋白酶组织抑制物(TIMPs)的平衡对维持ECM的动态平衡有着十分重要的作用。建立合适的AS动物模型是研究其发病机制及探讨治疗措施的重要前提条件。本实验从AS的主要的叁种发病机制出发，建立和比较了叁种建立大鼠AS模型的方法；同时以该模型为基础，探讨了MMP-9/TIMP-1的动态平衡与AS的关系；也研究了血管组织及血浆血管紧张素H(AngⅡ)水平与AS的关系；探讨了AngⅡ 1型受体拮抗剂氯沙坦是否具有抗AS作用，以及机制如何。 实验方法：1、将实验大鼠分为5组：正常对照组、高脂组(高脂饲料喂养)、高脂+维生素D负荷组、高脂+维生素D负荷+球囊损伤组、氯沙坦组(在高脂+维生素D负荷+球囊损伤组基础上加氯沙坦干预)，喂养3个月后，测血清TG、TC、LDL-C、HDL-C、CA水平，并通过对比各组胸主动脉的内中膜厚度变化、HE染色、CD68及α平滑肌肌动蛋白(α-actin)的免疫组化，比较了叁种大鼠AS模型。2、应用免疫组化、Western-blot、Zymography、RT—PCR的方法，在已建立的大鼠AS病变的整体模型中观察了MMP-9和TIMP-1的基因、蛋白及酶活性的表达模式的变化，也观察了氯沙坦有无抗AS作用及MMP-9和TIMP-1的变化。3、运用放射免疫分析法测定了各实验组的AngⅡ水平(血管组织及血浆)，以胸主动脉内膜厚度作为AS严重程度指标，探讨了两者之间的关系。4、在体外，分离培养大鼠血管平滑肌细胞，运用Western blot、Zymography以及RT-PCR的方法，观察了不同浓度的AngⅡ、氯沙坦及两者共同作用对大鼠VSMC产生MMP-9第二军医大学博士毕业论文中文摘要和’TIMP．1基因、蛋白及酶活性的影响。 主要结果：1、高脂组、高脂+维生素D负荷组、高脂+维生素D负荷+球囊损伤组TC、tG和L．DI。一C均较正常对照组明显升高(P<0．01)；高脂+维生素D负荷组、高脂+维生素D负荷+球囊损伤组血钙浓度均较对照组和高脂组明显升高(P<0．01)；病理学观察发现高脂组和正常对照组基本无差别，高脂+维生素D负荷组主动脉壁内膜增厚、平滑肌细胞增生明显、中膜萎缩，形成较典型的纤维增生性动脉硬化斑块，高脂+维生素D负荷+球囊损伤组内膜进一步增厚，中膜明显受压萎缩，突出的斑块内含有大量的泡沫细胞，平滑肌细胞减少，见钙化灶，深部为坏死物质，内含胞外脂质，主动脉壁形成典型的较成熟动脉粥样硬化斑块。胸主动脉cDj8免疫组织化学检测阳性程度随As进展逐渐增强，Q．actin的免疫组化示高脂+维生素D负荷组和高脂+维生素D负荷+球囊损伤组中层受压萎缩，前者内膜SMC增生，后者内膜SMC减少。2、免疫组化、Westernblot、Zymo~hyr以及RT-PCR．法显示，随着AS进展，MMP．9及T'IMP．1基因、蛋白及酶活性水平均逐渐增强，MMP．9／’FIMP．1值也逐渐增强(除高脂+维生素D负荷组较其它组低)。氯沙坦组与阳性对照组(高脂+维生素D负荷+球囊损伤组)比较，内膜增厚程度、中膜萎缩程度明显减轻，MMP．9明显减低，’FIMP．1增加，MMP．9／TIMP．1值明显减低。3、随着AS进展，胸主动脉的AnglI水平逐渐升高，血浆AnglI水平无变化，胸主动脉的AnglI与内膜厚度具有正相关性(P<0．01)。4、Westem blot、Zymogr~hv以及RT-PCR．法显示，AnglI呈浓度依赖性促进大鼠vSMC产生MMP．9蛋白、基因和酶活性的增加，对TIMP．1无影响，使MMP．9／’FIMP．1值增高；氯沙坦呈浓度依赖性抑制大鼠VSMC的MMP．9蛋白、基因和活性的产生，促进TIMP．1的增加，使MMP．9H’IMP．1值减低；氯沙坦和AnglI共同作用，大鼠VSMC产生MMP．9、’FIMP．1的基因、蛋白、酶活性的变化与单独应用氯沙坦一致，且与氯沙坦呈浓度依赖性。 结论：1、大鼠可作为研究AS的良好动物模型，通过合适的干预，模拟出AS斑块。单纯给予大鼠高脂饲料(含胆固醇、胆酸钠、硫氧嘧啶、猪油)不易形成．AS病变：给予大鼠高脂饲料加维生素D负荷仅仅导致以VSMC增生为第二军医大学博士毕业论文 中文摘要 l主的纤维增生性动脉硬化；给予大鼠含高脂饲料十维生素D负荷十内膜球囊损伤术可形成较成熟 AS病变斑块。2、随着 AS进展，斑块 MMP司及 TIMP八蛋白、基因和酶活性水平逐渐增强，反映＊S的＊＊M降解及合成代谢均明显增强：＊S各期的MMP一厅IMP上值变化，说明纤维增生性动脉硬化斑块ECM合成强于降解，AS早期及较成熟动脉硬化期斑块ECM降解强于合成，且后者强于前者；氯沙坦可通过减低MMP习，升高TIMPl起抗动脉粥样硬化作用。3、随着AS进展，胸主动脉的Angll水平逐渐升高，胸主动脉的Angll与内膜厚度具有正相关性，说明Angll可能是AS的致病因素之一。4、比较Angll、氯沙坦及两者共同作用 VSMC产生规P令及 TmPl的变化，说明氯沙坦通过抑制 Angll的作用而使MMP司厅IMP上下降可能是氯沙坦的抗动脉粥样硬化作用机制之一。
张晓梅[2]2006年在《肺纤方治疗肺间质纤维化的临床与实验研究》文中指出本研究探讨了肺纤方治疗肺间质纤维化的理论依据、临床疗效及其对博来霉素肺间质纤维化大鼠的影响。在文献回顾和导师经验总结的基础上进行了理论研究,认为反复外感、环境毒邪、肺肾亏虚是肺间质纤维化的发病原因。瘀血痰浊为肺间质纤维化基本病理产物,痰瘀深伏凝滞、肺络痹阻为肺纤维化致病关键;反复外感加重肺纤维化进展,瘀浊痹阻肺络加重气虚、易致阴虚。肺间质纤维化分为慢性进展期和急性加重期。肺间质纤维化治则治法为:慢性进展期治以补肺益肾化痰活血通络,急性加重期兼以清热养阴。姜良铎教授在长期临床实践中针对病机总结出肺纤方治疗肺间质纤维化取得较好疗效。临床研究开展了肺纤方治疗肺间质纤维化的系统临床观察。根据西医诊断标准筛选病例,共收集病例40例发病一年内的中期早期患者,分为肺纤方组和强的松组对照,中药组给予肺纤方治疗,激素组给予强的松0.5-0.25mg/kg体重,观察治疗效果,并监测不良反应。同时检测病人血清中基质金属蛋白酶1、2组织金属蛋白酶抑制剂TIMP1、2的水平,以评价中药对于肺间质纤维化患者基质的影响。结果显示:中药肺纤方在临床疗效、在改善症状、提高生理指标(肺功能、动脉血氧分压)方面明显优于强的松。肺纤方在治疗期间的肺再感染次数明显低于激素组。肺纤方能明显降低血清中基质金属蛋白酶2、13、基质金属蛋白酶抑制剂TIMP1、2的水平。肺纤方治疗特发性肺间质纤维化患者的疗效,可能与肺纤方对肺间质纤维化基质重建的调节,而发挥其抑制肺纤维化的作用。试验研究开展了肺纤方与强的松组、模型组和空白对照组的试验研究。Wister大鼠87只,随机分为空白对照组15只,经气管插管注入生理盐水1ml/kg;模型组、肺纤方组与强的松组各24只,经气管插管注入博来霉素1mg/kg造模;造模后第二天开始灌胃。分别于造模后第14天、28天、45天处理动物,空白组每个时间点各5只,模型组、肺纤方组与强的松组每个时间点各8只。右肺进行肺病理检测,行HE染色比较肺泡炎程度,Masson染色比较肺纤维化程度。左肺制成肺匀浆液检测层粘连蛋白、Ⅰ型、Ⅲ型胶原、基质金属蛋白酶9、13,左肺制成肺匀浆液检测氧化损伤产物谷胱甘肽和丙二醛。大鼠血清检测基质金属蛋白酶1、2及组织金属蛋白酶抑制剂1、2。研究结果显示肺纤方组和强的松组较模型组对肺间质纤维化大鼠模型均有明显的抑制作用。肺纤方组较强的松组更能有效改善大鼠纤维化的程度,抑制层粘连蛋白、氧化物丙二醛、谷胱甘肽、Ⅰ型、Ⅲ型胶原、基质金属蛋白酶9、13、大鼠血清检测基质金属蛋白酶1、2及组织金属蛋白酶抑制剂1、2的产生,在肺间质纤维化大鼠45天时尤其明显,说明肺纤方有显着抑制肺间质纤维化大鼠基质重建的作用和较强的抗氧化损伤作用。既往中医药治疗肺间质纤维化的临床与实验研究着重探讨了中药对肺间
杨敬华[3]2006年在《PKC-MMPs/TIMPs信号转导在糖尿病肾病发病机制中的作用》文中提出研究背景：随着人们生活水平的提高、生活方式和环境因素的改变，世界各国糖尿病的发生率迅速增加，我国系人口大国，预计21世纪我国糖尿病发病总人数将占全球糖尿病发病人数之首。糖尿病是一种糖代谢异常所致的代谢性疾病，它可发生多种并发症：如糖尿病心肌病、糖尿病周围神经病变、糖尿病视网膜病变及糖尿病肾病。其中糖尿病肾病(DN)是最重要的并发症之一，DN逐步发展为肾纤维化，最终导致慢性肾功能衰竭，其致残率极高，严重威胁糖尿病患者的生命。因此，开展糖尿病肾病机制的深入研究，对有效防治糖尿病的发生有着十分重要的意义。 DN的发病机制错综复杂，至今为止DN确切的发病机制尚未明确。多数学者认为DN是由于体内糖代谢异常、肾小球出现“叁高”(高滤过、高灌注、高跨膜压)影响肾脏血流动力学改变、多种细胞因子参与以及遗传因素等综合因素的结果。而其中糖代谢异常始终是DN的最基本生化特征，细胞外基质(ECM)积聚即是DN发展为慢性肾衰的核心所在。 已有研究表明，高糖可刺激PKC活化，可刺激系膜细胞过度表达Ⅳ型胶原及纤维连接蛋白。PKC抑制剂则降低PKC诱导的Ⅳ型胶原及纤维连接蛋白的表达。表明PKC活化可直接或间接引起ECM合成增加。也有一些研究表明，高糖下正常人类肾小球系膜细胞(NHMC)和DN肾组织中，MMP及TIMP表达异常，活性改变，使ECM降解减少而出现ECM积聚。在其它研究领域，如动脉粥样硬化以及神经胶质细胞的浸润等方面的研究发现，PKC与MMPs表达关系密切。是否高糖刺激肾小球系膜细胞导致PKC信号传导通路异常激活，从而也影响MMPs／TIMPs的表达，使ECM降解减少，造成肾小球系膜区基质积聚，进而导致肾小球纤维化?目前未见相关文献报道。我们拟采用NHMC及糖尿病肾病动物模型(STZ)为研究对象，观察体外NHMC培养及STZ大鼠肾组织PKC激活或抑制后MMP2、9／TIMP1、2的表达，
参考文献：
[1]. MMP-9/TIMP-1失衡与动脉粥样硬化的关系及氯沙坦作用的实验研究[D]. 郭延松. 第二军医大学. 2003
[2]. 肺纤方治疗肺间质纤维化的临床与实验研究[D]. 张晓梅. 北京中医药大学. 2006
[3]. PKC-MMPs/TIMPs信号转导在糖尿病肾病发病机制中的作用[D]. 杨敬华. 中南大学. 2006
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