导读:本文包含了乙酰氨基葡萄糖基转移酶论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:甜瓜,N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶,基因克隆,载体构建
乙酰氨基葡萄糖基转移酶论文文献综述
张瑞腾[1]（2017）在《甜瓜N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶基因CmGnT的克隆及表达分析》一文中研究指出甜瓜(CucumismeloL.)为葫芦科甜瓜属植物,是世界十大水果之一,也是一种高效经济的瓜果作物。在甜瓜设施栽培中,逆境胁迫严重影响了甜瓜的生长发育、产量和品质,阻碍了甜瓜产业的可持续发展。关于N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶基因(CmGnT)在植物上的研究较少,目前该基因对甜瓜盐胁迫的调节机制还不清楚。为了研究该基因的功能以及开发它的育种价值,本研究通过细胞工程和基因工程操作技术,对甜瓜CmGnT基因进行了克隆和功能分析,并构建了过表达载体和RNAi干扰载体,以期为甜瓜栽培与分子育种等相关工作奠定良好的技术基础。本试验主要研究结果如下:1.根据甜瓜cDNA序列设计引物,利用RT-PCR技术克隆得到甜瓜N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶基因(CmGnT)。生物信息学分析表明,甜瓜CmGnT的cDNA全长2 193 bp,开放阅读框(ORF)为1 179 bp,编码392个氨基酸,CmGnT蛋白分子量约为46 kD,理论等电点(pI)为7.93。其蛋白质二级结构中,α-螺旋占32.14%,延伸链占26.53%,β-折迭占14.29%,无规则卷曲占27.04%。蛋白结构分析表明CmGnT含有β-1,4-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶结构域,属于糖基转移酶17家族。该基因编码的蛋白有1个强的跨膜螺旋结构。进化树分析表明,甜瓜CmGnT氨基酸序列与黄瓜CsGnT(登录号:XP_004135275.1)亲缘关系最近,同源性为99.74%。与西瓜的同源性为97.70%。2.实时荧光定量PCR分析结果显示,CmGnT在根中表达量最高,在NaCl、PEG、H202和ABA非生物胁迫下的甜瓜叶片中都有显着上调表达,表明CmGnT受非生物胁迫诱导,推测其在甜瓜响应非生物胁迫过程中起到重要作用。3.构建了 pCAMBIA1302-CmGnT-GFP表达载体,用基因枪转化洋葱内表皮细胞,亚细胞定位结果显示CmGnT初步定位于细胞核。4.利用Smal单酶切将甜瓜CmGnT基因亚克隆到质粒载体pBI121上,构建了过表达载体pBI121-GnT。选择甜瓜CmGnT基因的特异片段(238bp)构建了 RNAi干扰载体 pFGC1008-CmGnT。(本文来源于《山西农业大学》期刊2017-06-01）
刘珺[2]（2012）在《β1，3-N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶（β3Gn-T8）对人脑星形胶质瘤侵袭和增殖的影响》一文中研究指出本研究旨在探讨β1，3-N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶8（β3Gn-T8）对胶质瘤侵袭及增殖的影响。通过对胶质瘤细胞恶性表型相关因子、成瘤模型及临床标本的相关指标检测分析，来了解β3Gn-T8在胶质瘤的发生发展中扮演的重要作用，为治疗人恶性胶质瘤提供一个新的有效的辅助分子治疗方法。目的：（1）探讨糖基转移酶β3Gn-T8在人脑胶质瘤组织与正常脑组织中表达的差异。（2）在人胶质瘤U251细胞水平探讨糖基转移酶β3Gn-T8对胶质瘤侵袭及增殖能力的影响，以及β3Gn-T8与MMP-2的关系。（3）观察糖基转移酶β3Gn-T8对胶质瘤U251细胞裸鼠皮下种植瘤生长的影响。（4）探讨糖基转移酶β3Gn-T8对肿瘤细胞多聚乳糖胺链的影响。方法：（1）运用免疫组织化学方法，在人脑星形胶质瘤和正常脑组织的石蜡标本上，分别检测β3Gn-T8的表达情况并分析其差异。收集相关胶质瘤组织标本的临床病理参数，通过统计学方法分析胶质瘤β3Gn-T8表达与临床病理参数的关系。（2）将β3Gn-T8的真核表达正义载体pEGFP-C1-T8及空载体pEGFP-C1、RNA干扰载体pSilenCircle-T8Si及对照载体pSilenCircle-T8Scr，通过脂质体转入人星形胶质瘤U251细胞，经G418筛选出稳定细胞株，RT-PCR挑选出上调、下调β3Gn-T8最优的细胞株。将细胞分为五组：U251转染正义载体组（T8S）与空载体组（Mock）、U251转染干扰载体组（T8Si）与对照载体组（T8Scr）、U251未转染组（NC）。RT-PCR、Western blot及免疫荧光检测五组细胞β3Gn-T8的表达，并用流式细胞术分析β3Gn-T8高/低表达细胞株的多聚乳糖胺链的变化。（3）在体外实验中，通过MTT检测以上各组细胞生长状况，集落形成实验检测各组细胞单细胞形成集落的能力；Boyden小室和划痕修复实验检测各组细胞侵袭迁移能力差异；采用RT-PCR及Western blot方法检测以上五组细胞的MMP-2、TIMP-2mRNA及蛋白水平表达变化。（4）在体内实验中，将转染正义载体组（T8S）、干扰载体组（T8Si）及未转染组（NC）的U251细胞通过皮下接种BALB/c裸鼠的方法构建胶质瘤移植瘤模型。通过对移植瘤成瘤时间、生长曲线和最终体积指标的测量以及病理学观察，探讨β3Gn-T8对胶质瘤移植瘤增殖和侵袭能力的影响。结果：（1）临床人脑星形胶质瘤组织中β3Gn-T8蛋白表达阳性率为88.10﹪，显着高于正常脑组织12.5﹪（P﹤0.01），且β3Gn-T8蛋白的表达与胶质瘤的临床病理分级正相关（P﹤0.05）。（2）通过RT-PCR和Western blot的检测，以及激光共聚焦显微镜观察各组细胞，可见载体成功转入人星形胶质瘤U251细胞，得到稳定转染细胞株。同时，流式细胞术显示，上调β3Gn-T8的表达水平，多聚乳糖胺链产量增加，下调β3Gn-T8的表达水平，多聚乳糖胺链产量减少。（3）对转染pEGFP-C1-T8的U251细胞进行侵袭和增殖能力的系列检测，和空载体组相比较，MTT检测显示细胞的增殖能力升高（P﹤0.05），集落形成实验显示细胞集落形成能力增强；Boyden小室实验和划痕修复实验发现细胞的侵袭迁移能力增强（P﹤0.05）；RT-PCR及Western blot检测发现MMP-2的表达在mRNA水平及蛋白水平相应升高（P﹤0.05），而TIMP-2的表达不存在统计学意义。对转染pSilenCircle-T8Si的U251细胞进行侵袭和增殖能力的系列检测，和对照载体组相比较，MTT检测显示细胞的增殖能力下降（P﹤0.05），集落形成实验显示细胞集落数明显降低；Boyden小室实验发现细胞穿膜率较低，侵袭能力弱（P﹤0.05），划痕修复实验显示细胞划痕修复较慢，迁移能力下降（P﹤0.05）；RT-PCR及Western blot检测发现MMP-2的表达在mRNA水平及蛋白水平相应降低（P﹤0.05），而TIMP-2的表达不存在统计学意义。（4）人星形胶质瘤U251细胞裸鼠移植瘤成瘤率100﹪。与NC组相比，T8S组移植瘤成瘤时间较短，生长速度较快，最终体积更大（P﹤0.05）；T8Si组移植瘤成瘤时间延长，其生长速度和最终体积均小于NC组（P﹤0.05）。移植瘤组织学呈现典型的恶性肿瘤细胞形态特点，且T8S组的移植瘤细胞向周围肌肉组织侵袭生长。结论：（1） β3Gn-T8在人星形胶质瘤组织的表达较正常脑组织显着增加，其表达与胶质瘤的临床病理分级正相关。（2）成功构建了稳定的β3Gn-T8上调及下调细胞株。（3） β3Gn-T8促进了多聚乳糖胺链的合成。（4） β3Gn-T8增强了人星形胶质瘤U251细胞的增殖和侵袭能力。（5）在细胞水平，随着β3Gn-T8表达的上调，MMP-2的表达也相应升高，而TIMP-2表达水平不存在统计学意义。β3Gn-T8可能通过促使多聚乳糖胺链的合成，影响MMP-2/TIMP-2比值，打乱了两者间的平衡，而促进了U251细胞的增殖和侵袭能力。（6） β3Gn-T8增强了胶质瘤裸鼠移植瘤的增殖和侵袭能力。综上所述，糖基转移酶β3Gn-T8在人胶质瘤组织的表达与胶质瘤的临床病理分级正相关；糖基转移酶β3Gn-T8对胶质瘤细胞的增殖和侵袭能力有增强作用；糖基转移酶β3Gn-T8对胶质瘤细胞中的MMP-2的表达具有调控作用，推测这可能是促进胶质瘤侵袭的机制之一。(本文来源于《苏州大学》期刊2012-03-01）
仇灏,徐正荣,邵雪君,周迎会,徐岚[3]（2012）在《转录因子Ets-1与β1,3-N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶基因启动子结合活性分析(英文)》一文中研究指出β1,3-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶-2,-8(β3GnT-2,β3GnT-8)共同参与多聚N-乙酰氨基乳糖([Galβ1→4GlcNAcβ1→3]n)的合成,从而使得细胞表面的相应糖链结构延长进而影响细胞的恶性转化.已有研究表明,在全反式维甲酸诱导人白血病细胞株HL-60分化过程中β3GnT-2,-8的表达上调,但其分子机制不明.本文旨在探讨ATRA诱导HL-60分化过程中,转录因子Ets-1对β3GnT-2,-8表达调控的分子机制.采用10-6mol/L ATRA诱导人白血病细胞株HL-60向粒系分化,RT-PCR检测到细胞中Ets-1的表达明显增加;进一步采用染色质免疫沉淀(ChIP)结合电泳迁移率变动实验(EMSA)检测证实,有活化的Ets-1结合至β3GnT-2/-8基因调控区.以上结果表明,转录因子Ets-1对人白血病细胞株HL-60分化过程中β3GnT-2,-8基因有表达调控作用.(本文来源于《中国生物化学与分子生物学报》期刊2012年01期）
齐晶晶,王丽影,查锡良[4]（2011）在《N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶V在肿瘤发生及转移中的作用机制》一文中研究指出N-糖链的β-1,6分支与肿瘤关系密切。N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V(N-acetylglucosaminyltransferase V,GnT-V)可催化β-1,6糖链分支的生成。GnT-V是一种双功能蛋白,可以定位在高尔基体中,也可以分泌形式存在。该酶通过一种金属离子依赖的丝氨酸蛋白酶来破坏细胞外基质或者直接催化促血管因子的生成来促进肿瘤的生长或转移,也可以通过分泌型的GnT-V催化糖链生成改变血管生成因子的功能,或者直接促进它们的转录从而起到促进肿瘤转移的作用。另外,GnT-V可以与癌基因产物及其受体相互作用来促进肿瘤的发生及侵袭。本综述主要就GnT-V的基本性质、促肿瘤生成及转移的机理进行展开,并展望了其在肿瘤治疗中的应用。(本文来源于《生命的化学》期刊2011年05期）
曲建华[5]（2011）在《以小鼠N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶为靶点miRNA的筛选和鉴定》一文中研究指出N-乙酰氨基糖基转移酶(GnT)催化GlcNAc的转移,参与天冬酰胺连接型聚糖(N-聚糖)或丝氨酸/苏氨酸连接型聚糖(O-聚糖)的合成,在生物体内发挥重要功能。GnT至少分为GnTⅠ到GnTⅥ六类,其中GnTⅢ能够将UDP-GlcNAc中的GlcNAc以β1,4连接的方式转移到N-聚糖核心的β甘露糖上,催化生成平分型的GlcNAc,而平分型结构不能成为GnTⅡ、GnTⅣ、GnTⅤ等其它糖基转移酶的底物。GnTⅣ能够将UDP-GlcNAc中的GlcNAc以β1, 4连接的方式催化到N-糖链寡糖核结构的GlcNAcβ1, 2-Manα1, 3臂上,从而参与复杂型糖链叁天线以及四天线分支的合成。肿瘤的发生常常伴随着糖蛋白糖链结构的改变,一些糖基转移酶的产物,如GnTⅤ的产物N-糖链β1,6分支结构与肿瘤转移潜能密切相关。microRNA是一类在转录后水平起调控作用的非编码的小RNA分子,其通过与靶基因mRNA的3'-非翻译区结合,在转录后水平上对基因的表达进行调节。miRNA可以影响mRNA的稳定性,也可以对mRNA进行降解。但是,目前有关以糖基转移酶为靶点miRNA筛选及其功能研究的报道很少。本研究以筛选N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶GnT为靶点的miRNA为目的,以高通量芯片miRNA表达谱分析和生物信息学分析结果为基础,构建含有小鼠Mgat3,Mgat4a,Mgat5的3'UTR片段的双荧光素酶报告基因重组质粒GnTⅢ/pGL3、GnTⅣ/pGL3、GnTⅤ/pGL3,将其与侯选miRNA共转染小鼠肝癌Hepa1-6细胞,通过检测荧光素酶活性的变化,筛选以GnTⅢ、GnTⅣ、GnTⅤ为靶点的miRNA,进一步通过定量PCR、流式细胞术分析等技术检证miRNA对GnT表达、N-聚糖分支结构的合成及细胞生物学行为的影响。结果表明:miR-23与双荧光素酶报告基因重组质粒GnTⅢ/pGL3共转染后,荧光素酶活性下降;miR-23转染使Hepa1-6细胞Mgat3基因表达水平下降,平分型的GlcNAc的表达水平降低。以上结果提示:miR-23可能是以N-乙酰氨基糖基转移酶Ⅲ为靶点的miRNA。(本文来源于《大连医科大学》期刊2011-04-01）
徐正荣[6]（2010）在《人β1，3-N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶基因（β3GnTs）和转录因子Ets-1表达相关性初步研究》一文中研究指出目的:β1,3-N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶8(β3GnT8)是本实验室通过电子克隆得到的一个新型的人类糖基转移酶,通过同源序列比对确定其属于β3糖基转移酶大家族。有学者报道,β3GnT2和β3GnT8能够在体外形成异二聚体,此复合物的催化活性比两者各自的酶活性显着增强,另外研究表明,转录因子Ets-1可以调节一些糖基转移酶的表达,本文旨在通过研究四种白血病细胞株β3GnT2、β3GnT4、β3GnT8以及转录因子Ets-1在ATRA、TPA诱导分化后的表达变化,进而探讨它们在白血病中功能相关性。方法:1.采用RT-PCR及实时定量PCR方法从mRNA水平上研究β3GnT2、β3GnT4、β3GnT8及转录因子Ets-1的表达变化;2.染色质免疫沉淀(ChIP)的方法检测转录因子Ets-1对β3GnT2、β3GnT4、β3GnT8基因的表达调控;3.免疫荧光检测β3GnT2、β3GnT8与转录因子Ets-1在白血病细胞株K562中的定位表达。结果:1.与对照组比较,四种细胞株在经过ATRA、TPA诱导分化后,β3GnT2、β3GnT4、β3GnT8和Ets-1的表达量均有提高,β3GnT2与β3GnT8基因的表达变化趋势一致,且Ets-1的表达变化规律和β3GnT2与β3GnT8基因的表达变化规律一致;2.从ChIP产物中进行目的基因的扩增,扩增后发现在K562细胞株的ChIP产物中均可扩增出β3GnT2和β3GnT8基因,而未扩增出β3GnT4基因;3.免疫荧光检测发现,β3GnT2和β3GnT8在核周和胞浆都有表达,转录因子Ets-1只在核上和核周有表达,CY3标记的红色荧光与FITC标记的绿色荧光有重迭,重迭部分呈黄色荧光。结论:与对照组相比,加药后β3GnT2与β3GnT8基因的表达变化趋势一致,且Ets-1的表达变化规律和β3GnT2与β3GnT8基因的表达变化规律一致。染色质免疫沉淀以及免疫荧光检测,证实转录因子Ets-1可与糖基转移酶β3GnT2、β3GnT8结合。因此,转录因子Ets-1可能参与介导β3GnT2与β3GnT8基因的表达调控,是上调β3GnT2与β3GnT8基因表达的转录因子。(本文来源于《苏州大学》期刊2010-05-01）
徐莺莺[7]（2010）在《全反式维甲酸诱导N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶V表达受阻的肝癌细胞通过内质网应激途径发生凋亡的研究》一文中研究指出N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶V (N-acetylglucosaminyltransferase V, GnT-V)是分布在高尔基体中的一种重要的N-糖链加工酶,它以UDP-GlcNAc为供体,催化七糖二天线阶段或八糖叁天线阶段的N-糖链形成叁天线及四天线N-糖链。GnT-V与肿瘤的发生和转移相关,其产物GlcNAcβ1,6Manα1,6结构与多种癌细胞的转移潜力有关。本室研究发现,GnT-V表达受阻增加了人肝癌SMMC7721细胞对全反式维甲酸(all-trans-retinoic acid，ATRA)诱导的凋亡的敏感性,但机制尚不明确。此外,我们还发现内质网应激发生于GnT-V表达受阻的SMMC7721细胞。在本论文中,我们进一步探讨了ATRA诱导GnT-V表达受阻的SMMC7721细胞发生凋亡的机制,并将其与内质网应激联系起来。在前期的研究中我们发现GnT-V反义cDNA稳定转染的SMMC7721细胞(GnT-V-AS/7721)中存在持续的慢性的内质网应激。从本论文的第一部结果我们得出结论：ATRA通过加剧GnT-V-AS/7721细胞中的内质网应激诱导细胞凋亡。在80μM ATRA处理24小时的GnT-V-AS/7721细胞中,我们发现内质网应激标志性分子GRP78/Bip (glucose regulated protein 78/immunoglobulin chain binding protein )、CHOP(C/EBP homologus protein)及剪接后XBP1 (X box binding protein1)的表达上调,这些结果都说明ATRA加剧了本来存在于GnT-V-AS/7721细胞中的内质网应激。此外,ATRA处理的GnT-V-AS/7721细胞中还发现了caspase-12、-9和-3的剪切激活以及凋亡形态学变化,说明ATRA诱导了细胞凋亡。以上的所有结果表明,ATRA通过加剧GnT-V-AS/7721细胞中的内质网应激诱导细胞凋亡。这为我们提供了一个ATRA诱导肝癌细胞发生凋亡的新机制。进一步的研究结果发现,80μM ATRA显着抑制GnT-V-AS/7721细胞中GnT-V的表达,这可能是ATRA加剧GnT-V-AS/7721细胞中内质网应激的机制之一在论文的第二部分,我们在80μM ATRA处理的GnT-V-AS/7721细胞中检测到GRP78/Bip、CHOP、剪切后ATF6 (activating transcription factor 6)蛋白及XBP1 mRNA剪接产物的上调,caspase-3、PARP [Poly(ADP-ribose) polymerase]也发生了剪切,这再次证明ATRA加剧了GnT-V-AS/7721细胞中的内质网应激并诱导细胞凋亡的结论。更重要的是,我们发现ATRA抑制了GnT-V-AS/7721细胞中同型半胱氨酸(homocysteine, Hey)代谢酶CBS (cystathionine-β-synthase)和BHMT (betaine-homocysteine methyltransferase)的表达,增加了细胞内Hcy浓度,并降低了细胞内GSH (glutathione)水平。为了观察ATRA对细胞Hcy代谢的作用,我们用不同浓度的外源性Hcy处理细胞。结果发现,ATRA处理使GnT-V-AS/7721细胞中的Hcy浓度快速提升到一个很高的水平,这说明ATRA干扰了GnT-V-AS/7721细胞的Hcy代谢,造成了细胞内Hcy堆积,因而增加了GnT-V-AS/7721细胞对外源性Hcy诱导的内质网应激的敏感性。同时,我们也观察到了GRP78/Bip的显着上调和XBP1 mRNA的完全剪接。进一步的研究发现,在GnT-V-AS/7721细胞中,ATRA降低细胞内GSH浓度,并阻碍了外源性Hcy诱导的GSH水平的提高。所有的结果表明,ATRA通过抑制Hcy代谢关键酶CBS和BHMT的表达提高细胞内Hcy水平、降低细胞内GSH浓度,从而加剧了GnT-V-AS/7721细胞中的内质网应激并诱导细胞凋亡。值得一提的是,来源于正常肝组织的L02细胞对ATRA诱导的凋亡不敏感,ATRA对其Hcy代谢的作用也不明显。也就是说,ATRA仅特异性地诱导GnT-V表达抑制的GnT-V-AS/7721细胞发生凋亡。这为ATRA成为一个潜在的抗癌药物提供了有利的依据。综上所述,ATRA干扰了GnT-V-AS/7721细胞的Hcy代谢,引起细胞中Hcy堆积和GSH耗竭,最终加剧了GnT-V-AS/7721细胞中的内质网应激并诱导细胞凋亡。(本文来源于《复旦大学》期刊2010-04-06）
仇灏[8]（2010）在《β3-乙酰氨基葡萄糖基转移酶对白血病细胞分化的影响及其调控机制》一文中研究指出已有大量的文献报道:当细胞恶变或分化时,细胞糖复合物上的糖链结构常发生变化,而这种变化来源于某些合成该糖链的相应的糖基转移酶表达的改变。β1,3-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(β3GnTs)家族参于合成其产物中的β1,3-乙酰氨基葡萄糖连接键,其中β3GnT-2, -4, -8亚型合成糖蛋白上N-或O-连接型糖链中的多聚乙酰氨基乳糖结构。本研究探讨这叁种酶的表达和四株白血病细胞分化间的关系,以及转录因子Ets-1对β3GnT-2, -4, -8表达的调控。本论文分为叁个部分:一、β3GnT-2, -4, -8和人急性早幼粒白血病细胞株HL60及NB4分化的关系目的:研究糖基转移酶β3GnT-2, -4, -8表达变化和人急性早幼粒白血病细胞株HL60及NB4分化的关系。方法:RT-PCR检测β3GnT-2, -4, -8在六种不同白血病细胞株中的表达情况。其次,使用ATRA处理HL60和NB4两种人急性早幼粒白血病细胞株,使其向粒细胞方向分化;或用TPA(PMA)处理两种细胞株,使其向单核细胞方向分化。用实时定量PCR(Real-time PCR)检测β3GnT-2, -4, -8的mRNA诱导分化前后在两个细胞株中的表达变化,并结合细胞形态学观察鉴定ATRA、TPA处理前后两个细胞株的形态变化。结果:β3GnT-2在白血病细胞株SHI-1,THP-1,K562,HL60,U937,NB4中都有不同程度的表达。β3GnT-4仅在NB4细胞中表达;而β3GnT-8则相反,在NB4细胞中不表达,而在其它5株细胞中有不同程度的表达。在10-7mol/L ATRA或10ng/ml TPA作用2h或3d后,不管HL60和NB4细胞株向何方向分化,其β3GnT-2, -4, -8的mRNA表达与不加分化诱导剂的对照组相比均见不同程度的升高。其中以β3GnT-4的改变最为显着,且有时间依赖性变化。β3GnT-8和β3GnT-2的上升幅度大致相近。ATRA使HL60和NB4细胞向粒细胞分化时,βGnTs的上调较TPA使两种细胞向单核细胞分化时明显;而HL60细胞的β3GnTs对两个分化诱导剂的上调作用较NB4细胞更为敏感。结论:早幼粒白血病细胞HL60和NB4在ATRA或TPA诱导向不同方向分化时,可见β3GnT-2, -4, -8的表达有不同程度的增加。ATRA的作用强于TPA;而HL60细胞对分化诱导剂的敏感性强于NB4细胞。二、β3GnT-2, -4, -8和人单核白血病细胞株SHI-1及THP-1分化的关系目的:研究糖基转移酶β3GnT-2, -4, -8表达变化和人单核白血病细胞株SHI-1及THP-1分化的关系。方法:在第一部分研究的基础上,改用人单核白血病细胞株SHI-1及THP-1为研究对象,用实时定量PCR(Real-time PCR)继续检测β3GnT-2, -4, -8的mRNA在ATRA、TPA处理前后两个细胞株中的表达变化,并结合细胞形态学观察鉴定。结果:SHI-1细胞在10-7mol/L ATRA作用2h后,β3GnT-2的mRNA表达即被下调,但3天后回复;而10ng/ml TPA作用2h或3d后,β3GnT-2均上调,第叁天更甚。β3GnT-4在TPA处理SHI-1细胞3d后,才见上调,其升高程度与β3GnT-2相仿。β3GnT-8在ATRA或TPA处理3d后才见轻度上调。THP-1细胞对ATRA、TPA均不敏感,其β3GnT-2, -4, -8的表达未见明显改变。与细胞形态学变化一致。结论:人单核白血病细胞株对ATRA及TPA的反应均不如人急性早幼粒白血病细胞株敏感,其β3GnT-2, -4, -8的mRNA表达变化不明显。尤其是THP-1细胞对本文所用浓度的ATRA及TPA都没有反应,与细胞形态学不改变相一致。叁、转录因子Ets-1对β3GnT-2, -4, -8表达的调控研究目的:探讨白血病细胞诱导分化过程中Ets-1的表达及其对糖基转移酶对β3GnT-2, -4, -8的转录调控。方法:采用Real-time PCR检测HL60、NB4、SHI和THP-1四种白血病细胞中转录因子Ets-1的mRNA在ATRA或TPA处理后的表达变化,并进一步采用染色质免疫沉淀(ChIP)结合凝胶迁移实验(EMSA)检测分析研究前叁种细胞中Ets-1和β3GnT基因DNA的结合以及Ets-1对β3GnT的转录调控。结果:在ATRA或TPA诱导分化下,HL60细胞中Ets-1 mRNA的表达均有不同程度的升高,且ATRA的作用似乎强于TPA。相反,NB4细胞和SHI-1细胞在ATRA或TPA作用后,总体上,Ets-1的表达都是下降的。THP-1细胞Ets-1的表达基本不变。ChIP检测发现:各个β3GnT的基因DNA检出谱基本上和第一部分用RT-PCR法检出的β3GnT mRNA的表达谱一致,结合EMSA证实有活化的Ets-1结合至β3GnT-2或/和β3GnT-8基因DNA片段,但未能检测到Ets-1对β3GnT-4的表达调控。结论:Ets-1很可能参与HL60和SHI-1细胞株中β3GnT-2和β3GnT-8在ATRA和TPA诱导分化时的表达调控,至少也是调控因素之一。但NB4细胞中的β3GnT不受Ets-1的调节。(本文来源于《苏州大学》期刊2010-03-01）
吴艳,徐岚,仇灏,姜智,吴士良[9]（2010）在《β3乙酰氨基葡萄糖基转移酶8(β3GnT8/β3GalT7)与转录因子Ets-1相关性的探索性研究》一文中研究指出目的初步探索β3GnT8的表达是否受到转录因子Ets-1的调控。方法通过反义核苷酸技术使Ets-1在7种不同细胞株内的表达沉默,分别用RT-PCR和Western bot检测转染Ets-1反义核苷酸前后β3GnT8在mRNA和蛋白水平的表达变化。结果转染Ets-1反义核苷酸后,发现Ets-1的mRNA表达明显受抑制,而β3-GnT8的表达也随之下降,结论初步认为β3GnT8的表达与转录因子Ets-1具有一定的相关性。(本文来源于《中国医疗前沿》期刊2010年03期）
周嘉梁,姜智,孙其昌,王修珍,仇灏[10]（2009）在《人类β3-N-乙酰氨基葡萄糖基(β3半乳糖)转移酶β3GnT8/GalT7的抗体制备、免疫组化分析及其亚细胞定位》一文中研究指出目的探讨β3GnT8(β3GalT7,AY277592,EC2.4.1.-)基因(人类β3-糖基转移酶家族中的一个新成员)的功能。方法原核表达该蛋白,以纯化的蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗血清;以Westernblot和免疫组化分析其在多种组织细胞的表达情况;并通过荧光免疫细胞化学进行亚细胞定位。结果获得了较纯的表达蛋白和高效价、高特异性的抗血清,并且发现该蛋白大部分位于核膜周围的胞浆中;免疫组化分析显示肿瘤细胞和组织中该酶有较高的表达,与正常组织比较具有一定的差异性。结论该实验获得了β3GnT8/β3GalT7基因的蛋白质和相应抗体,并且对该蛋白进行了亚细胞定位,为对其生物学功能的进一步研究奠定了基础。(本文来源于《苏州大学学报(医学版)》期刊2009年05期）
乙酰氨基葡萄糖基转移酶论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本研究旨在探讨β1，3-N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶8（β3Gn-T8）对胶质瘤侵袭及增殖的影响。通过对胶质瘤细胞恶性表型相关因子、成瘤模型及临床标本的相关指标检测分析，来了解β3Gn-T8在胶质瘤的发生发展中扮演的重要作用，为治疗人恶性胶质瘤提供一个新的有效的辅助分子治疗方法。目的：（1）探讨糖基转移酶β3Gn-T8在人脑胶质瘤组织与正常脑组织中表达的差异。（2）在人胶质瘤U251细胞水平探讨糖基转移酶β3Gn-T8对胶质瘤侵袭及增殖能力的影响，以及β3Gn-T8与MMP-2的关系。（3）观察糖基转移酶β3Gn-T8对胶质瘤U251细胞裸鼠皮下种植瘤生长的影响。（4）探讨糖基转移酶β3Gn-T8对肿瘤细胞多聚乳糖胺链的影响。方法：（1）运用免疫组织化学方法，在人脑星形胶质瘤和正常脑组织的石蜡标本上，分别检测β3Gn-T8的表达情况并分析其差异。收集相关胶质瘤组织标本的临床病理参数，通过统计学方法分析胶质瘤β3Gn-T8表达与临床病理参数的关系。（2）将β3Gn-T8的真核表达正义载体pEGFP-C1-T8及空载体pEGFP-C1、RNA干扰载体pSilenCircle-T8Si及对照载体pSilenCircle-T8Scr，通过脂质体转入人星形胶质瘤U251细胞，经G418筛选出稳定细胞株，RT-PCR挑选出上调、下调β3Gn-T8最优的细胞株。将细胞分为五组：U251转染正义载体组（T8S）与空载体组（Mock）、U251转染干扰载体组（T8Si）与对照载体组（T8Scr）、U251未转染组（NC）。RT-PCR、Western blot及免疫荧光检测五组细胞β3Gn-T8的表达，并用流式细胞术分析β3Gn-T8高/低表达细胞株的多聚乳糖胺链的变化。（3）在体外实验中，通过MTT检测以上各组细胞生长状况，集落形成实验检测各组细胞单细胞形成集落的能力；Boyden小室和划痕修复实验检测各组细胞侵袭迁移能力差异；采用RT-PCR及Western blot方法检测以上五组细胞的MMP-2、TIMP-2mRNA及蛋白水平表达变化。（4）在体内实验中，将转染正义载体组（T8S）、干扰载体组（T8Si）及未转染组（NC）的U251细胞通过皮下接种BALB/c裸鼠的方法构建胶质瘤移植瘤模型。通过对移植瘤成瘤时间、生长曲线和最终体积指标的测量以及病理学观察，探讨β3Gn-T8对胶质瘤移植瘤增殖和侵袭能力的影响。结果：（1）临床人脑星形胶质瘤组织中β3Gn-T8蛋白表达阳性率为88.10﹪，显着高于正常脑组织12.5﹪（P﹤0.01），且β3Gn-T8蛋白的表达与胶质瘤的临床病理分级正相关（P﹤0.05）。（2）通过RT-PCR和Western blot的检测，以及激光共聚焦显微镜观察各组细胞，可见载体成功转入人星形胶质瘤U251细胞，得到稳定转染细胞株。同时，流式细胞术显示，上调β3Gn-T8的表达水平，多聚乳糖胺链产量增加，下调β3Gn-T8的表达水平，多聚乳糖胺链产量减少。（3）对转染pEGFP-C1-T8的U251细胞进行侵袭和增殖能力的系列检测，和空载体组相比较，MTT检测显示细胞的增殖能力升高（P﹤0.05），集落形成实验显示细胞集落形成能力增强；Boyden小室实验和划痕修复实验发现细胞的侵袭迁移能力增强（P﹤0.05）；RT-PCR及Western blot检测发现MMP-2的表达在mRNA水平及蛋白水平相应升高（P﹤0.05），而TIMP-2的表达不存在统计学意义。对转染pSilenCircle-T8Si的U251细胞进行侵袭和增殖能力的系列检测，和对照载体组相比较，MTT检测显示细胞的增殖能力下降（P﹤0.05），集落形成实验显示细胞集落数明显降低；Boyden小室实验发现细胞穿膜率较低，侵袭能力弱（P﹤0.05），划痕修复实验显示细胞划痕修复较慢，迁移能力下降（P﹤0.05）；RT-PCR及Western blot检测发现MMP-2的表达在mRNA水平及蛋白水平相应降低（P﹤0.05），而TIMP-2的表达不存在统计学意义。（4）人星形胶质瘤U251细胞裸鼠移植瘤成瘤率100﹪。与NC组相比，T8S组移植瘤成瘤时间较短，生长速度较快，最终体积更大（P﹤0.05）；T8Si组移植瘤成瘤时间延长，其生长速度和最终体积均小于NC组（P﹤0.05）。移植瘤组织学呈现典型的恶性肿瘤细胞形态特点，且T8S组的移植瘤细胞向周围肌肉组织侵袭生长。结论：（1） β3Gn-T8在人星形胶质瘤组织的表达较正常脑组织显着增加，其表达与胶质瘤的临床病理分级正相关。（2）成功构建了稳定的β3Gn-T8上调及下调细胞株。（3） β3Gn-T8促进了多聚乳糖胺链的合成。（4） β3Gn-T8增强了人星形胶质瘤U251细胞的增殖和侵袭能力。（5）在细胞水平，随着β3Gn-T8表达的上调，MMP-2的表达也相应升高，而TIMP-2表达水平不存在统计学意义。β3Gn-T8可能通过促使多聚乳糖胺链的合成，影响MMP-2/TIMP-2比值，打乱了两者间的平衡，而促进了U251细胞的增殖和侵袭能力。（6） β3Gn-T8增强了胶质瘤裸鼠移植瘤的增殖和侵袭能力。综上所述，糖基转移酶β3Gn-T8在人胶质瘤组织的表达与胶质瘤的临床病理分级正相关；糖基转移酶β3Gn-T8对胶质瘤细胞的增殖和侵袭能力有增强作用；糖基转移酶β3Gn-T8对胶质瘤细胞中的MMP-2的表达具有调控作用，推测这可能是促进胶质瘤侵袭的机制之一。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
乙酰氨基葡萄糖基转移酶论文参考文献
[1].张瑞腾.甜瓜N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶基因CmGnT的克隆及表达分析[D].山西农业大学.2017
[2].刘珺.β1，3-N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶（β3Gn-T8）对人脑星形胶质瘤侵袭和增殖的影响[D].苏州大学.2012
[3].仇灏,徐正荣,邵雪君,周迎会,徐岚.转录因子Ets-1与β1,3-N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶基因启动子结合活性分析(英文)[J].中国生物化学与分子生物学报.2012
[4].齐晶晶,王丽影,查锡良.N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶V在肿瘤发生及转移中的作用机制[J].生命的化学.2011
[5].曲建华.以小鼠N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶为靶点miRNA的筛选和鉴定[D].大连医科大学.2011
[6].徐正荣.人β1，3-N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶基因（β3GnTs）和转录因子Ets-1表达相关性初步研究[D].苏州大学.2010
[7].徐莺莺.全反式维甲酸诱导N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶V表达受阻的肝癌细胞通过内质网应激途径发生凋亡的研究[D].复旦大学.2010
[8].仇灏.β3-乙酰氨基葡萄糖基转移酶对白血病细胞分化的影响及其调控机制[D].苏州大学.2010
[9].吴艳,徐岚,仇灏,姜智,吴士良.β3乙酰氨基葡萄糖基转移酶8(β3GnT8/β3GalT7)与转录因子Ets-1相关性的探索性研究[J].中国医疗前沿.2010
[10].周嘉梁,姜智,孙其昌,王修珍,仇灏.人类β3-N-乙酰氨基葡萄糖基(β3半乳糖)转移酶β3GnT8/GalT7的抗体制备、免疫组化分析及其亚细胞定位[J].苏州大学学报(医学版).2009
标签：甜瓜; N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶; 基因克隆; 载体构建;