利用杆状病毒表达系统表达奶牛触珠蛋白及其单克隆抗体的制备

论文摘要

为了建立奶牛早期妊娠诊断检测方法,试验用GenBank公布的奶牛触珠蛋白（haptoglobin）Hp基因序列设计引物,扩增出Hp基因全长片段,将Hp基因亚克隆至Bac-to-Bac昆虫/杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBacHTb的多克隆位点中,转入含昆虫杆状病毒骨架质粒的E.coli DH10Bac感受态细胞中,通过蓝白斑筛选获得穿梭质粒rBacmid-Hp阳性克隆,在脂质体介导下转染昆虫细胞sf9,获得含Hp基因的重组杆状病毒质粒rBacmid-Hp;用纯化的rBacmid-Hp蛋白免疫Balb/c小鼠,将免疫小鼠的脾细胞和鼠SP2/0骨髓瘤细胞融合,采用间接ELISA法和有限稀释法筛选杂交瘤细胞;分别用ELISA法、Western-blot检测单克隆抗体腹水效价及特异性。结果表明:在sf9细胞中成功表达Hp蛋白,该蛋白具有良好的生物学活性;制备了8株单克隆抗体,分别命名为3B12、4F4、4F11、5D7、5G8、7E5、10C3和12F9,腹水效价均在1∶5.12×104以上;亚类鉴定显示,除3B12、4F11、10C3为IgG2a外,其余单克隆抗体均属于IgG1;筛选出1对配对单克隆抗体,分别为12F9和4F11。说明Hp蛋白可在Bac-to-Bac昆虫/杆状病毒表达系统中高效表达,并成功筛选出一对配对的高效单克隆抗体。

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文章来源

类型: 期刊论文

作者: 向敏,程蕾,胡修忠,余婕,夏瑜,陶弼菲,熊海谦,周源,刘晓华,王定发

关键词: 奶牛,触珠蛋白,昆虫杆状病毒表达系统,单克隆抗体,细胞,表达

来源: 黑龙江畜牧兽医 2019年15期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 武汉市农业科学技术研究院畜牧兽医科学研究所,黄冈梅家墩牧业有限责任公司

基金: 国际科技合作计划项目(2017030209010261),武汉市农业科学院创新项目(cx201719-6,cx201806)

分类号: S852.4

DOI: 10.13881/j.cnki.hljxmsy.2018.10.0154

页码: 18-22+176-177

总页数: 7

文件大小: 595K

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