导读:本文包含了生物素化论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:生物,纳米,抗体,心肌梗死,果胶,微细,载体。
生物素化论文文献综述
刘亚文[1]（2019）在《纳米抗体的定向生物素化及其在癌胚抗原检测中的应用》一文中研究指出癌胚抗原(Carcinoembryonic antigen,CEA)作为癌症生物标志物,在癌症病人的术前诊断和疗后监测都具有重要的意义。癌胚抗原检测的一般方法是使用传统单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb),由于其制备、运输和保存成本高昂,导致临床检测费用居高不下,其次传统抗体标记效率不稳定,操作繁琐。纳米抗体(Nanobody,Nb)作为一种小型抗体,因其分子量小,免疫原性低、可溶性高、易于改造等特点被逐渐应用于疾病的诊断和治疗。本文主要是将纳米抗体应用于双抗夹心体系中检测CEA,以期降低成本,简化检测步骤,提高检测灵敏度。实验室前期通过噬菌体展示技术已经成功筛选出两株亲和力达到pM级别的可针对CEA不同抗原表位,且热稳定性和特异性良好的纳米抗体(Nb1和Nb2)。利用基因工程技术在Nb1的C端加入生物素化标签(Avi),克隆到叁种不同表达载体pMES4、pET47b和pGEX-6p-1上分别进行表达纯化和鉴定,最终筛选出可溶性好、表达量高,亲和力参数值为1.706×10~(-10)的Nb1-AVI-pET47b菌株用于生物素化。同时通过PCR技术克隆出BirA酶基因,连入pGEX-6p-1载体进行表达纯化,用商品化的酶(AVIDITY公司)做对照检测切除GST标签前后的自制酶的活性,生物素化结果表明表达的BirA酶切除标签前后的酶活相当,且不低于商品化酶。在体内外利用BirA酶的特异性酶促反应来实现Nb1-AVI的定向生物素催化,HABA检测方法和基于生物素-链霉亲和素系统检测结果均证明Nb1-AVI可被定向生物素化。进一步使用新一代荧光量子点对Nb2进行偶联,建立一步法检测CEA的双抗夹心ELISA方法。本研究中开发的双纳米抗体夹心ELISA方法对免疫测定中标准品的线性检测范围约为1~80 ng/mL,最低检测限为0.805 ng/mL,线性曲线显示出可接受的相关系数R~2=0.9937,人血清样本中癌胚抗原的回收率在96.6%~103.7%。这些结果表明了定向生物素化的纳米抗体在基于生物素-链霉亲和素的双纳米抗体夹心ELISA反应中检测癌胚抗原的可行性,操作简便,灵敏性高,光学性质更稳定,为癌胚抗原的快速痕量检测奠定了基础。(本文来源于《长春理工大学》期刊2019-06-01）
张璐,李清雅,徐江浩[2]（2019）在《特异性位点生物素化蛋白的制备》一文中研究指出目的探讨特异性位点生物素化蛋白的制备技术。方法采用分子克隆法,将编码Avi标签(AviTag)的基因序列插入真核表达载体,构建表达AviTag的gp120重组质粒,使融合蛋白羧基段带AviTag。采用生物素蛋白连接酶将活化生物素连接到融合蛋白的AviTag多肽位点,采用酶切、Western blot和ELISA等方法分析制备是否成功。结果酶切和Western blot证实gp120-AviTag表达载体构建和表达成功。ELISA结果显示生物素成功标记于融合蛋白的AviTag多肽位点。结论将AviTag引入表达载体可成功制备特异性位点生物素化蛋白,为生发中心抗原特异性B细胞反应的研究提供技术支持。(本文来源于《江苏医药》期刊2019年05期）
叶向晖,陈淑娴,王叙,巩凯,金坚[3]（2019）在《长链生物素化小分子探针的合成及验证》一文中研究指出目的构建简单有效的小分子药物长链生物素化探针合成方法。方法采用一步法合成的生物素化氨基己酸作为中间体,以自发荧光的多柔比星∶(doxorubicin,DOX)作为实施例,经二环己基碳二亚胺(DCC)、4-二甲氨基吡啶(DMAP)催化,合成长链生物素化DOX;利用生物化DOX的双荧光系统,验证其亲和素结合能力、生物学活性。经验证后,应用于长链生物素化无荧光的紫杉醇(paclitaxel,PTX)的合成,并验证其理化活性、生物学活性及可视化效果。结果该方法合成得到的生物素化DOX与亲和素结合率达93. 7%;对细胞的抑制率及定位与DOX相同;生物素化PTX纯度为84. 42%,核磁结构正确;对细胞的抑制效果同于PTX;通过可视化修饰可以观察到细胞内PTX与微管微丝的结合。结论该合成方法可用于小分子药物生物素化探针的合成并具可视化用途,为药物机制研究提供了有效的工具。(本文来源于《中国药学杂志》期刊2019年03期）
胡云华,肖祖克[4]（2018）在《生物素化微细纤维肽修饰IGF-1对急性心肌梗死兔左心室重构的影响》一文中研究指出目的探讨生物素化微细纤维肽修饰胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对急性心肌梗死兔左心室重构的影响。方法将28只健康的、雄性新西兰白兔随机分为对照组和实验1组、实验2组、实验3组,每组7只。将实验1、2、3组的冠状动脉左前降支结扎来建立兔急性心肌梗死模型,对照组不结扎冠状动脉左前降支。模型建立后,实验1组注射生物素化微细纤维肽修饰的IGF-1,实验2组注射未修饰的IGF-1,实验3组和正常对照组注射0.9%氯化钠注射液。分别检查各组干预6～8h后和干预1、8周后的心电图(ECG),干预1、4、8周后左心室舒张末期内径(LVEDd)、左心室射血分数(LVEF)、心输出量(CO)的水平。结果实验3组干预8周后ECG示出现宽大的病理性Q波。实验1、2、3组干预1、4、8周后LVEDd水平均显着高于对照组,LVEF、CO水平均显着低于对照组(均P<0.05)。干预1、4、8周后,实验1、2组LVEDd水平均显着低于实验3组,且实验1组又均显着低于实验2组(均P<0.05);实验1、2组LVEF、CO水平均显着高于实验3组,且实验1组又均显着高于实验2组(均P<0.05)。结论生物素化微细纤维肽修饰IGF-1能显着改善兔急性心肌梗死后心脏的缺血及左心室重构,且有利于心肌功能的修复。(本文来源于《南昌大学学报(医学版)》期刊2018年05期）
陈宏洋,张航,李星星,李泉鑫,何琦[5]（2018）在《生物素化乙酰普鲁兰多糖耦联CD3纳米粒的制备及T细胞摄取效应》一文中研究指出目的细胞毒T淋巴细胞是抗肿瘤免疫的主要效应细胞,纳米粒表面经特异性抗体修饰可使其靶向并激活T细胞。文中探讨生物素化乙酰普鲁兰多糖纳米粒耦联CD3抗体(Bio-PA-CD3 NPs)对CD8+T细胞增殖及细胞因子分泌及摄取效应的影响。方法超声透析法制备了3种生物素取代度Bio1.6-PA-CD3 NPs、Bio5.4-PA-CD3 NPs和Bio6.3-PA-CD3 NPs,CD3抗体耦联于纳米粒表面。比较3种纳米粒的粒径,Zeta电位; CCK-8法检测对CD8+T细胞增殖的影响,ELISA试剂盒测定纳米粒对CD8+T细胞分泌的3种细胞因子含量。流式细胞仪定量分析细胞摄取Bio-PA-CD3 NPs。结果 Bio1.6-PA-CD3NPs、Bio5.4-PA-CD3 NPs和Bio6. 3-PA-CD3 NPs表面CD3抗体浓度分别为(36.1±4.4)、(21.4±4.3)和(10.3±4.7)μg/mg。耦联CD3抗体的纳米粒与CD8+T细胞共孵育48 h,NPs浓度为50、100、200μg/m L时,与同一生物素取代度Bio-PA NPs比较,BioPA-CD3 NPs明显促进细胞增殖(P<0.05);共孵育96 h,NPs浓度为1、10、50、100、200μg/m L时,与同一生物素取代度Bio-PA NPs比较,Bio-PA-CD3 NPs明显促进细胞增殖(P<0.05)。当NPs浓度为10μg/m L时,Bio1.6-PA-CD3 NPs、Bio5.4-PA-CD3 NPs较对应未耦联抗体纳米粒促进IL-2的分泌;当NPs浓度为50μg/m L时,Bio1.6-PA-CD3 NPs较对应未耦联抗体纳米粒促进IFN-γ的分泌; Bio1.6-PA-CD3 NPs、Bio5.4-PA-CD3 NPs较对应未耦联抗体纳米粒促进TNF-β、IL-2的分泌;当NPs浓度为100、200μg/m L时,Bio1.6-PA-CD3 NPs、Bio5.4-PA-CD3 NPs较对应未耦联抗体纳米粒促进IFN-γ、TNF-β、IL-2的分泌(P<0.05)。流式结果显示CD8+T细胞对Bio1.6-PA-CD3 NPs、Bio5.4-PA-CD3 NPs和Bio6.3-PA-CD3 NPs 3组纳米粒摄取率荧光强度峰值左移,即荧光强度逐渐降低。结论制备的耦联抗体的普鲁兰多糖纳米粒有望作为一种提高T细胞免疫效应的制剂。(本文来源于《医学研究生学报》期刊2018年10期）
胡云华,肖祖克[6]（2018）在《生物素化微细纤维肽修饰IGF-1对急性心肌梗死兔血清炎性因子的影响》一文中研究指出目的探讨生物素化微细纤维肽修饰胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对急性心肌梗死(AMI)兔血清炎性因子的影响。方法将28只新西兰白兔随机分为对照组和实验1组、实验2组、实验3组,每组7只。对照组行假手术,实验1、2、3组建立AMI模型。建模成功后,实验1组注射生物素化微细纤维肽修饰的IGF-1,实验2组注射未修饰的IGF-1,对照组和实验3组注射等剂量的生理盐水。干预1周后,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清白细胞介素-6(IL-6)、超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平。结果干预1周后,与对照组比较,实验1、2、3组血清IL-6、hs-CRP、TNF-α水平均显著升高(均P<0.05);与实验3组比较,实验1、2组血清IL-6、hs-CRP、TNF-α水平均显著降低(均P<0.05);与实验2组比较,实验1组血清IL-6、hs-CRP、TNF-α水平均显著降低(均P<0.05)。结论 IGF-1和生物素化微细纤维肽修饰的IGF-1均能够显着降低AMI兔炎性因子的水平,但生物素化微细纤维肽修饰的IGF-1效果更优。(本文来源于《南昌大学学报(医学版)》期刊2018年04期）
赵峰[7]（2018）在《生物素化果胶纳米粒作为药物载体的研究》一文中研究指出果胶多糖具有良好的生物相容性,且来源广泛、安全无毒,可作为抗肿瘤药物载体应用于癌症的治疗中。近年来,研究者们制备出了许多果胶多糖药物载体,但仍存在有不足的地方,如:对肿瘤细胞的靶向选择性不好,果胶多糖粒子的尺度范围不合理(很多为微米级)。为提高果胶多糖的靶向选择性、降低果胶多糖粒子的尺寸,使其作为药物载体发挥更大的作用。本文在果胶多糖分子上修饰了生物素靶头,设计合成主动靶向的药物载体材料;并通过钙离子交联,利用乳化超声法制备出了生物素化果胶多糖纳米粒。通过考察制备条件对纳米粒尺度的影响,探究了最优的制备方法;通过考察载药纳米粒的体外药物释放行为,研究了多糖纳米粒对包载药物的控释性能。本文主要内容如下:通过酯化反应在果胶多糖(PEC)分子链游离羟基上接枝生物素,获得了生物素化果胶多糖(Bio-PEC),通过傅里叶红外(FT-IR)和X射线粉末衍射(XRD)对合成产物进行了结构表征;经元素分析仪测定了生物素的取代度。结果表明,生物素通过酯键成功修饰到果胶分子表面,合成产物中生物素的取代度为37%。根据果胶多糖的性质选择了合适可行的方法进行了产物纳米粒的制备。即在钙离子的交联作用下,通过乳化超声法制备了Bio-PEC纳米粒。通过扫描电镜、Zeta电位与粒度分析仪对产物纳米粒进行了形貌、大小、表面电荷的表征。结果表明,Bio-PEC纳米粒近似球形,分布均匀,无明显团聚现象,粒径大小为200nm左右,表面电荷为-30m V左右。以阿霉素(DOX)为模型药物,采用静电吸附法制备Bio-PEC载药纳米粒。通过Zeta电位与粒度分析仪对载药纳米粒进行了表面电荷及粒径分布的表征。通过倒置荧光显微镜观测了载药纳米粒中阿霉素的包载情况。通过紫外分光光度法测定了载药纳米粒在不同pH下PBS溶液中的药物释放情况。结果表明,制备的生物素化果胶载阿霉素粒子(DOX/Bio-PEC),粒径大小为323nm左右,表面电荷为-17.45mV左右。通过载药纳米粒的药物释放曲线可以看出,pH在6.8左右时,药物的累积释放量较高,且载药粒子对DOX具有明显的缓释作用。(本文来源于《中北大学》期刊2018-06-05）
王柔[8]（2018）在《甲状旁腺激素定点生物素化及其纳米抗体的筛选》一文中研究指出甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)是检测肾脏疾病,包括其多种并发症(如继发性甲状旁腺功能亢进)过程的主要指标。纳米抗体体积小、亲和力高、稳定性好、易于融合表达,是PTH相关疾病诊断与治疗的重要材料。但前期研究发现,无论是基于传统疏水作用或是无连接臂的羧基端定点包被PTH筛选方法,均很难获得能够特异结合PTH的纳米抗体,造成该结果的原因可能是上述包被方法影响了PTH的天然构象或由于空间位阻影响了抗原抗体有效结合,因此需要建立一种新的抗原包被方法,既能使PTH定点固载又能使其充分伸展、保持天然构象。本论文将借助生物素连接酶(biotin ligase,BirA)的定点修饰作用以及生物素与链霉亲和素间的特异结合作用,建立以链霉亲和素为介导,将定点生物素修饰的PTH进行定向固载,然后筛选纳米抗体的方法;为了便于获得稳定足量的定点生物素化目标蛋白,本论文还建立了一种简单的BirA定向固定化方法。研究结果如下:(1)Co~(3+)介导的BirA固定化:在H_2O_2的作用下,NTA-Co~(2+)-His标签蛋白复合物中Co~(2+)被氧化成Co~(3+),同时实现His标签蛋白的固定化。本论文设计了氨基端与羧基端2种His6标签位置的BirA序列并获得目的蛋白,最终确定在pH 8.5,经终浓度10 mM H_2O_2氧化90 min、10 mM EDTA反应前处理及反应后50 mM咪唑洗脱实现了琼脂糖凝胶颗粒表面BirA酶的固定化,固载率为98.14%。(2)固定化BirA酶的特性表征及应用:分别在不同极端pH(3.0、4.0、5.0、10.0、11.0)以及高温下孵育后,固定化酶稳定性高于游离态酶,对碱性环境耐受更强。循环使用10次后,相对剩余活性为84.4%。4℃贮存20 d后,相对剩余活性87.2%。将其应用于带有BirA酶识别标签的底物PTH-Avi生物素化反应中,实现了酶与底物的一步催化与分离。(3)生物素-链霉亲和素体系筛选纳米抗体:将生物素化PTH固载到链霉亲和素板上,从噬菌体库中筛选抗PTH纳米抗体,噬菌体ELISA检测证明随机挑取的88个克隆均有PTH结合活性;对其中40个克隆进行序列比较后得到27条不同序列;克隆成功的13条基因中,在E.coli shuffle(T7)成功了表达6种,纯化后利用ELISA和Biacore对其进行活性分析,证明筛选的纳米抗体能够特异性地结合游离的PTH,其中2种平衡解离常数数量级为10~(-7)。且对人血液中成分HSA及IgG几乎不存在非特异性吸附。(本文来源于《大连理工大学》期刊2018-06-01）
赵峰,刘举慧,郭建峰[9]（2018）在《生物素化果胶纳米粒作为药物载体的研究》一文中研究指出合成了生物素化果胶衍生物并通过乳化超声法制备了纳米粒子;以目标药物阿霉素为研究对象,考察了不同条件下纳米粒子包封率和载药量的变化情况。通过红外光谱仪和元素分析仪对生物素化果胶粒子的化学组成及结构进行了表征;用粒度分析仪和扫描电子显微镜分析了生物素化果胶粒子的形貌和尺寸;通过紫外分光光度计确定了生物素化果胶粒子的包封率和载药量。结果表明,合成的生物素化果胶纳米粒呈现较规则的球形结构,粒度分布较均一,平均粒径为(190.2±37.0)nm,生物素取代度为37%,包封率为(84.58±0.78)%,载药量为(12.69±0.37)%。(本文来源于《现代化工》期刊2018年07期）
李敏英,李文,陶爱林[10]（2018）在《可生物素化HLADRB1~*07:01蛋白的原核表达和纯化》一文中研究指出目的诱导表达可生物素化的人类白细胞抗原HLA-DRB1~*07:01蛋白,以制备MHC四聚体,为后续研究肽段与MHCⅡ的结合力、检测抗原特异性T细胞提供必要工具。方法从Gen Bank中获得HLA-DRB1~*07:01的c DNA序列,人工合成基因片段时,α链、β链的跨膜区加入亮氨酸拉链,其中β链还在跨膜区加入Avi标签。α链和β链分别与表达载体p ET-44a和p ETduet-1-Bira连接后转入大肠杆菌Rosetta构建原核表达体系,通过氨苄青霉素(Amp)抗性基因筛选,利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,获得目的蛋白,并用免疫印迹法分析鉴定目的蛋白。结果成功构建了重组质粒p ET-44a-HLA-DRB1~*07:01α链和p ETduet-1-HLA-DRB1~*07:01β链-Bir A,0.25 mmol/L的IPTG可高效诱导目的蛋白表达,α链可被HLA-DRA抗体特异识别,目的蛋白可生物素化且可被链霉素特异识别。目的蛋白主要以包涵体形式表达,经反复洗涤可获得高纯度的蛋白。结论成功构建了HLA-DRB1~*07:01蛋白的原核表达系统,并得到纯化的可生物素化重组表达蛋白,为进一步制备HLA-肽四聚体奠定了实验基础。(本文来源于《实用医学杂志》期刊2018年07期）
生物素化论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的探讨特异性位点生物素化蛋白的制备技术。方法采用分子克隆法,将编码Avi标签(AviTag)的基因序列插入真核表达载体,构建表达AviTag的gp120重组质粒,使融合蛋白羧基段带AviTag。采用生物素蛋白连接酶将活化生物素连接到融合蛋白的AviTag多肽位点,采用酶切、Western blot和ELISA等方法分析制备是否成功。结果酶切和Western blot证实gp120-AviTag表达载体构建和表达成功。ELISA结果显示生物素成功标记于融合蛋白的AviTag多肽位点。结论将AviTag引入表达载体可成功制备特异性位点生物素化蛋白,为生发中心抗原特异性B细胞反应的研究提供技术支持。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
生物素化论文参考文献
[1].刘亚文.纳米抗体的定向生物素化及其在癌胚抗原检测中的应用[D].长春理工大学.2019
[2].张璐,李清雅,徐江浩.特异性位点生物素化蛋白的制备[J].江苏医药.2019
[3].叶向晖,陈淑娴,王叙,巩凯,金坚.长链生物素化小分子探针的合成及验证[J].中国药学杂志.2019
[4].胡云华,肖祖克.生物素化微细纤维肽修饰IGF-1对急性心肌梗死兔左心室重构的影响[J].南昌大学学报(医学版).2018
[5].陈宏洋,张航,李星星,李泉鑫,何琦.生物素化乙酰普鲁兰多糖耦联CD3纳米粒的制备及T细胞摄取效应[J].医学研究生学报.2018
[6].胡云华,肖祖克.生物素化微细纤维肽修饰IGF-1对急性心肌梗死兔血清炎性因子的影响[J].南昌大学学报(医学版).2018
[7].赵峰.生物素化果胶纳米粒作为药物载体的研究[D].中北大学.2018
[8].王柔.甲状旁腺激素定点生物素化及其纳米抗体的筛选[D].大连理工大学.2018
[9].赵峰,刘举慧,郭建峰.生物素化果胶纳米粒作为药物载体的研究[J].现代化工.2018
[10].李敏英,李文,陶爱林.可生物素化HLADRB1~*07:01蛋白的原核表达和纯化[J].实用医学杂志.2018
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