导读:本文包含了牛乳铁蛋白论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:牛乳铁蛋白肽,肠粘膜,机械屏障,免疫屏障
牛乳铁蛋白论文文献综述
丁梦露,彭丽媛,韩菲菲,韩剑众[1]（2019）在《牛乳铁蛋白肽缓解肠粘膜屏障损伤功能研究》一文中研究指出基于葡聚糖硫酸钠(Dextran Sulfate Sodium,DSS)诱导的结肠炎大鼠模型,研究牛乳铁蛋白肽(LfcinB)对肠粘膜屏障损伤的改善作用及可能机制。实验设对照组(C)、结肠炎模型组(DSS)、LfcinB处理组(LBD,DSS+5 mg/kg LfcinB)和LfcinB对照组(LfcinB,5 mg/kg LfcinB);5%DSS自由饮水7天制成结肠炎大鼠模型,5 mg/kg LfcinB连续7 d灌胃后取样。实验在评估动物疾病活动指数(Disease Activity Index,DAI)的基础上,采用结肠组织切片HE染色和透射电镜观察肠组织形态,ELISA法分析肠机械屏障标志物二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)和免疫屏障相关指标IL-1β、IL-6、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)和sIgA浓度,免疫组化/荧光法检测巨噬细胞炎性浸润程度、紧密连接蛋白和mucin 2的表达水平,Real-time PCR法评估IL-1β、IL-6、TNF-α、mucin 2的mRNA表达水平。实验结果表明,与DSS组相比,LfcinB能显着降低肠炎大鼠DAI,通过促进mucin 2、紧密连接蛋白的表达,减少IL-6、IL-1β、TNF-α、MPO的产生来缓解肠道炎症,改善DSS对肠道的破坏。上述结果提示摄入LfcinB能够对DSS诱导的肠粘膜屏障损伤起到保护作用。(本文来源于《中国食品科学技术学会第十六届年会暨第十届中美食品业高层论坛论文摘要集》期刊2019-11-13）
赵慧娟[2]（2019）在《牛乳铁蛋白的铜锌增补对其免疫及抗炎活性影响作用研究》一文中研究指出乳铁蛋白(Lactoferrin,LF)作为一种铁结合糖蛋白,具有抗菌、抗癌、抗炎以及免疫活性,其生物学作用日益被关注。牛乳铁蛋白作为一种食物来源的蛋白质,可商业化生产并用作食品营养添加剂,有利于消费者机体健康。许多微量元素具有重要生物功能,在免疫系统中也发挥重要作用,提高机体的免疫功能。然而,尚未确定微量元素增补对乳铁蛋白的免疫和抗炎活性是否有影响作用。为此,本课题将牛乳铁蛋白分别增补铜/锌0.16、0.32和0.64mg/g蛋白质,然后评估乳铁蛋白及其铜锌增补乳铁蛋白的免疫和抗炎活性。采用小鼠脾细胞和小鼠巨噬细胞(RAW264.7)为体外模型,评估所选样品的免疫活性;另外,以脂多糖诱导的小鼠巨噬细胞(RAW264.7)为炎症模型,评估所选样品的其抗炎活性;最终,揭示铜锌增补对乳铁蛋白的免疫和抗炎活性的影响作用。通过利用CCK-8法,确定牛乳铁蛋白及铜锌增补乳铁蛋白在所选用的3个浓度下(10、20和40μg/mL)对脾细胞、ConA诱导的T淋巴细胞和LPS诱导的B淋巴细胞的增殖抑制作用大小,采用中性红法测定RAW264.7巨噬细胞吞噬作用,流式细胞仪测定T淋巴细胞亚群分型(CD4~+和CD8~+)的比例,ELISA法测定细胞因子含量(干扰素-γ、白细胞介素-2和白细胞介素-4,脾细胞;肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-1β,巨噬细胞),最终确定铜锌增补对乳铁蛋白体外免疫活性的影响。结果表明,乳铁蛋白和铜锌增补乳铁蛋白对脾细胞、ConA诱导的T淋巴细胞和LPS诱导的B淋巴细胞均有一定的增殖抑制作用。低水平铜/锌增补(0.16mg/g蛋白质)和低剂量(10μg/mL)确实能够显着地减缓乳铁蛋白对脾细胞的抑制作用(P<0.05)。与乳铁蛋白相比,低水平铜锌增补的乳铁蛋白在低剂量下对巨噬细胞的刺激作用略微增加,提高ConA刺激的脾细胞中T淋巴细胞亚群CD4~+/CD8~+比例,同时,显着地明显促进脾淋巴细胞分泌细胞因子(IL-2、IL-4和IFN-γ)和RAW264.7巨噬细胞分泌细胞因子(IL-1β和TNF-α)(P<0.05)。然而,与在低剂量下的结果相比,大多数情况下,高水平铜锌增补(0.64 mg/g蛋白质)的乳铁蛋白在高剂量下对这些细胞产生相反的作用。整体上,铜锌增补乳铁蛋白能够减缓或增加乳铁蛋白对两种免疫细胞的影响。利用CCK-8法,确定牛乳铁蛋白及铜增补乳铁蛋白在所选用的4个浓度下(10、20、40和80μg/mL)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞细胞活性的影响。测定乳酸脱氢酶(LDH)活力进行细胞毒性测定,采用Griess法测定巨噬细胞分泌的NO含量,DCFH-DA法测定RAW264.7巨噬细胞内的活性氧(ROS)水平,ELISA法测定RAW264.7巨噬细胞释放的PGE_2、TNF-α、IL-6和IL-1β含量,最终确定铜增补对乳铁蛋白抗炎活性的影响。结果表明,乳铁蛋白和铜增补乳铁蛋白对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞分泌NO、PGE_2、TNF-α、IL-6和IL-1β炎性介质和细胞中ROS水平均有一定抑制作用,表明其具有抗炎活性。与乳铁蛋白相比,低水平铜增补并在低剂量下的乳铁蛋白的抗炎效果更为明显(P<0.05)。综上所述,铜锌增补能够降低或增强乳铁蛋白的免疫作用或抗炎活性,并且低水平铜锌增补、低剂量下产生更强的免疫作用和抗炎活性。所以,Cu~(2+)/Zn~(2+)含量是影响乳铁蛋白免疫作用或抗炎活性的重要因素之一。(本文来源于《东北农业大学》期刊2019-06-01）
张恩鹏[3]（2019）在《牛乳铁蛋白肽衍生肽设计及其在毕赤酵母中的表达研究》一文中研究指出牛乳铁蛋白肽(LFcinB,Bovine Lactoferricin)是酸性环境下,经胃蛋白酶水解,从天然牛乳铁蛋白(BLf,Bovine Lactoferrin)N末端释放的一段含25个氨基酸残基的阳离子肽,其氨基酸序列为:Phe-Lys-Cys-Arg-Arg-Trp-Gln-Trp-Arg-Met-Lys-Lys-Leu-Gly-Ala-Pro-Ser-Ile-Thr-Cys-Val-Arg-Arg-Ala-Phe。目前已经证实LFcinB具有广谱抗菌、抗肿瘤、抗病毒、抗寄生虫和抗氧化等生物活性。此外,其良好的耐热性和无抗原性有利于在食品工业的应用,尤其是婴幼儿奶粉的生产。研究发现不同来源的乳铁蛋白肽中,LFcinB的抗菌活性最高,因此,LFcinB及其衍生肽的研究成为近年来的研究热点之一。巴斯德毕赤酵母表达系统是一种高效的异源蛋白表达系统,迄今为止,已有数百种异源蛋白在巴斯德毕赤酵母中成功表达。相对于其他表达系统,巴斯德毕赤酵母可以对表达的异源蛋白进行翻译后糖基化修饰和加工。其外泌型表达载体线性化后,整合入毕赤酵母基因组DNA中,可将目的蛋白分泌至发酵液中,简化了下游纯化工艺,降低生产成本。本文利用生物信息学工具,以LFcinB为模板,设计得到具有高抗菌活性的衍生肽序列。将衍生肽基因构建至表达载体,线性化后将衍生肽基因整合到巴斯德毕赤酵母基因组DNA中,通过基因工程菌外泌表达衍生肽。1、本文对LFcinB不同位点的氨基酸进行替换,设计得到5条衍生肽,利用生物信息学工具对衍生肽的理化参数、疏水残基比例、电荷数、两亲性分布、二级结构及空间结构进行预测和对比分析,然后利用抗菌肽数据库预测工具对衍生肽抗菌活性进行评价。得到一条最优化衍生肽序列L3,其疏水性为52%,电荷数为+7,两亲性分布及空间结构模拟与LFcinB相似,综合分析结果表明,衍生肽L3理论上具有比LFcinB更高的抗菌活性。2、将优化设计的衍生肽基因克隆至扩增质粒pUC-SP上,将pUC-SP-L3转化至感受态大肠杆菌DH5α中,经扩增后提取质粒,用EcoR I和Not I进行双酶切获取L3目的基因;使用T4 DNA连接酶将目的基因连接至同样经EcoR I和Not I双酶切的外泌型穿梭表达载体pPIC9K中,构建重组表达载体pPIC9K-L3;将重组表达载体pPIC9K-L3转化至感受态大肠杆菌DH5α进行扩增,提取扩增后的重组表达载体,经双酶切、PCR扩增及基因测序验证,证明衍生肽基因插入到经酶切后的pPIC9K多克隆位点,且构建的重组表达载体pPIC9K-L3基因序列准确。3、使用限制性内切酶Sac I将重组表达载体pPIC9K-L3线性化,电转化至感受态毕赤酵母GS115细胞中,涂布至最小葡萄糖培养基(MD,Minimal Dextrose Medium)平板,于30℃恒温静置培养72 h;利用选择性培养基最小甲醇培养基(MM,Minimal Methanol Medium)和MD平板筛选得到41个表型为His~+Mut~+,4个表型为His~+Mut~s的阳性转化子;PCR扩增鉴定表明,目的基因已正确整合入GS115基因组DNA中。4、使用BMGY/BMMY培养基对得到的45个阳性转化子进行筛选,设置甲醇浓度梯度为0.5%、1.0%、1.5%、2.0%、2.5%和3.0%,筛选得到5个具有抑菌活性的阳性转化子,其中一个抑菌活性最强,甲醇诱导浓度为2.5%。5、使用500 mL锥形瓶对筛选得到最优阳性转化子进行摇瓶发酵,验证并优化其表达条件,抑菌实验结果进一步确定,最佳甲醇诱导浓度为2.5%,最佳发酵时间为96 h;经平行试验对比分析,与天然LFcinB抑菌活性相比,衍生肽抗菌活性优于LFcinB,证明了衍生肽分子设计的合理性;Tricine-SDS-PAGE检测表明,衍生肽基因已得到了有效表达;将发酵上清液进行冷冻干燥,制备含有衍生肽成分的发酵上清液冻干粉。复水后抑菌实验表明,10×浓缩液的抑菌圈直径为同体积氨苄青霉素溶液(50 mg/mL)的2.5倍,证明浓缩液抑菌活性为氨苄青霉素的2.5倍。本研究基于抗菌肽结构-功能的关系,利用生物信息学工具设计LFcinB衍生肽,并对其抗菌活性进行了分析预测,实验结果证明了衍生肽设计的合理性,衍生肽基因得到了有效的表达,研究结果为进一步扩大生产衍生肽奠定了理论基础。(本文来源于《江苏大学》期刊2019-06-01）
吕自力,张恩鹏,郭爱珍,罗斌,梁鑫[4]（2019）在《重组牛乳铁蛋白肽衍生肽设计及其在毕赤酵母中的表达》一文中研究指出利用抗菌肽数据库和生物信息学分析工具,基于抗菌肽结构和功能的关系,设计了LFcin B衍生肽LFcin B-W4,10。为了验证衍生肽设计的合理性及表达产物功能正确性,将优化设计的基因序列经限制性内切酶酶切后,用T4 DNA连接酶连接到分泌型表达载体p PIC9K中,获得的重组表达载体p PIC9K-LFcinB-W 4,10经线性化后电转入毕赤酵母GS115中,经过G418浓度梯度筛选得到高拷贝转化子。经PCR鉴定,目的基因与酵母基因组稳定整合。阳性转化子经体积分数为2. 5%的甲醇诱导表达,表达产物用Tricine-SDS-PAGE检测到相对分子质量约为3. 2 k Da的衍生肽LFcin B-W4,10。每24 h取样检测发酵上清液抑菌活性,结果表明,抗菌肽LFcin BW4,10对金黄色葡萄球菌具有良好的抑菌活性,诱导表达96 h时其抑菌圈直径最大。实验为探究牛乳铁蛋白肽功能-结构关系奠定了基础。(本文来源于《食品与发酵工业》期刊2019年15期）
周恬[5]（2019）在《正畸力下牛乳铁蛋白对牙周病骨吸收及牙移动骨改建的影响》一文中研究指出目的:通过建立大鼠牙周病及正畸牙移动动物实验模型,研究各组大鼠实验牙压力侧牙周组织和骨密度变化;观察牙周组织中RANKL、OPG、TNF-α、COX-2的表达及破骨细胞数目变化规律;以期探讨牛乳铁蛋白对正畸力下牙周病骨吸收及牙移动骨改建的影响。方法:1.选取健康雄性8-10周龄SD大鼠12只,随机选取6只大鼠作为实验组,10%水合氯醛麻醉后,于上颌左侧第一磨牙近中颊根近中及颊侧牙龈注射含10g/L脂多糖(Escherichia coli lipopolysaccharides,E-LPS)的生理盐水50μl,每48小时注射1次,共4次,剩下6只大鼠作为空白对照组。8天后对比观察实验组和对照组大鼠上颌左侧第一磨牙牙龈及牙周组织炎症情况,并处死所有大鼠,取左上颌牙体-牙周组织联合标本,4%多聚甲醛固定,Micro-CT观察两组大鼠牙槽骨骨吸收情况,组织病理切片、苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色及破骨细胞计数检查牙周病模型制备的效果。2.选取健康雄性8-10周龄SD大鼠52只,随机分为叁组:A组:空白对照组(4只);B组牙周病正畸牙移动模型组(24只);C组正畸牙移动模型组(24只),其中,B组又分为B1组:LPS+正畸力+牛乳铁蛋白(12只);B2组:LPS+正畸力+生理盐水(12只),C组又分为C1组:正畸力+牛乳铁蛋白(12只);C2组:正畸力+生理盐水(12只)。B组大鼠根据实验一牙周病模型制备结果,于相同位置下注射含10g/L LPS的生理盐水50μl,每48小时注射1次,共4次。C组大鼠同时在相同部位注射等体积生理盐水。注射4次后各组均安装NiTi拉簧装置,力值20g,自正畸牙移动模型建立第2天开始对B2、C2组大鼠每日灌胃0.9%氯化钠溶液(1ml/100g)。同时,按照1ml/100g灌胃量,根据每只大鼠每天接受的牛乳铁蛋白剂量为85mg/Kg,将牛乳铁蛋白溶解于相应体积0.9%氯化钠溶液中对B1、C1组大鼠进行灌胃。在灌胃后的第5天、14天,B1、B2、C1、C2组各处死大鼠6只,共48只,A组大鼠适应性喂养一周后,直接处死取材,各组大鼠处死前取上颌左侧第一磨牙近中龈沟液,ELISA法定量检测龈沟液乳铁蛋白含量。取材固定,Micro-CT测量实验牙近中颊根牙槽骨骨密度、骨小梁等骨组织相关指标变化。HE染色观察实验牙压力侧牙周组织的变化和牙槽骨吸收情况。TRAP染色观察实验牙压力侧破骨细胞分布与数量。免疫组织化学染色法观察实验牙压力侧牙周组织中RANKL、OPG、TNF-α、COX-2的表达情况,应用Image-pro-plus6.0图像分析系统进行半定量分析。采用SPSS22.0统计软件对实验结果进行分析和处理。结果:1.成功建立了大鼠牙周病模型,局部注射大肠杆菌菌株LPS可有效制备大鼠牙周病骨吸收动物模型。2.成功建立了大鼠机械力诱导下的正畸牙移动模型。3.各组大鼠实验牙近中侧龈沟液中,均检测到乳铁蛋白的表达。牛乳铁蛋白灌胃组和生理盐水灌胃组分别和空白组相比,其中牛乳铁蛋白灌胃组龈沟液乳铁蛋白含量显着高于空白组,差异有统计学意义(P<0.05),生理盐水灌胃组和空白组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。4.Micro-CT结果显示:第5天和第14天,B1组骨小梁数量(TrabecularNumber,Tb.N)、骨小梁厚度(Trabecular Thickness,Tb.Th)高于B2组,骨表面积和骨体积的比值(Bone Surface/Bone Volume,BS/BV)、骨小梁分离度(Trabecular Separation/Spacing,Tb.Sp)低于B2组,差异具有统计学意义(P<0.05);C1组与C2组相比,Tb.N、Tb.Th、BS/BV和Tb.Sp差异无统计学意义(P>0.05)。5.HE染色结果显示:A组未见明显的破骨细胞和牙槽骨吸收;B组和C组均发生了较为明显的压力侧牙槽骨吸收,B2组较B1组牙槽骨吸收更为严重,表现为牙周膜纤维排列紊乱,牙槽骨表面不连续,破骨细胞及骨吸收陷窝形成,结缔组织内中性粒细胞、淋巴细胞等炎症细胞浸润,C1组和C2组相比没有明显区别。6.TRAP染色结果显示,A组TRAP染色阴性,未见明显的成熟破骨细胞。第5天和14天时,受牛乳铁蛋白影响,B1组成熟破骨细胞数显着低于B2组,差异有统计学意义(P<0.05);C1、C2组压力侧可见成熟破骨细胞,差异无统计学意义(P>0.05)。7.免疫组化结果显示:第5天和14天时,B1组RANKL、TNF-α表达量显著低于B2组(P<0.05),B1组OPG表达量高于B2组(P<0.05),于第5天达到峰值;C1、C2组相比,第5天和14天,RANKL、TNF-α、COX-2和OPG表达量相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:正畸力下,牛乳铁蛋白可能通过影响LPS/TLR4/TNF-α通路抑制牙周病相关骨吸收,但不影响机械力通过COX-2/PGE2通路引起的相关骨改建。(本文来源于《广西医科大学》期刊2019-05-01）
林庆宇,师一鸣,宋丽影,李雪纯,谭宏超[6]（2019）在《表达牛乳铁蛋白肽的重组鸡源乳酸杆菌抗IBDV感染的研究》一文中研究指出为探究表达牛乳铁蛋白肽的重组鸡源乳酸杆菌pPG-XLFEC/M11对雏鸡抵抗传染性法氏囊病病毒(IBDV)感染的作用,本研究利用IBDV CEF94株感染DF-1细胞,通过CCK-8法检测病毒感染后的细胞活性,利用qRT-PCR检测病毒载量,结果显示重组乳酸菌表达的牛乳铁蛋白肽可以抑制IBDV在DF-1细胞内的增殖;以重组乳酸菌pPG-XLFEC/M11饲喂雏鸡,利用IBDV强毒UK661株进行攻毒实验,结果显示饲喂重组菌的雏鸡相比于对照组,IBDV的感染对其组织器官的损伤较小,总免疫球蛋白IgG和SIgA含量增加,细胞因子IL-6、IL-8、TNF-α和IFN-γ以及TLR2的mRNA转录水平均显着升高,且提高了雏鸡的存活率。本实验结果表明,重组鸡源乳酸杆菌表达的牛乳铁蛋白肽可以增强机体的免疫应答水平,对雏鸡具有一定的抗IBDV感染的作用。本研究为表达牛乳铁蛋白肽的重组鸡源乳酸杆菌在生产中的应用以及为禽类疾病的预防奠定基础。(本文来源于《中国预防兽医学报》期刊2019年04期）
魏春,任郑,吴涛,钱晓芬,孙杰[7]（2019）在《重组牛乳铁蛋白功能片段在毕赤酵母中的表达及高密度发酵》一文中研究指出该研究合成了密码子优化后的牛乳铁蛋白功能片段(bovine lactoferrin functional fragment,Blf Ff),转入毕赤酵母GS115中重组表达并筛选抗性菌株,通过镍亲和层析纯化Blf Ff,以Western Blot、液质联用和ELISA对重组蛋白进行鉴定及检测。比较了5 L发酵罐生产中3种不同高密度发酵培养基对Blf Ff生产的影响。结果表明:重组转化子正确表达了Blf Ff。镍亲和层析中,150 mmol/L咪唑洗脱可得到电泳纯37 k Da的目标条带。在3种高密度发酵培养基中,RDM最优,诱导48 h,菌体湿细胞密度达到297 g/L,Blf Ff表达量为38. 1 mg/L。(本文来源于《食品与发酵工业》期刊2019年11期）
张恩鹏,吕自力,戴甜,郭爱珍,王亮[8]（2019）在《牛乳铁蛋白肽衍生肽结构设计及其在毕赤酵母中表达后的活性分析》一文中研究指出本研究通过抗菌肽数据库和生物信息学等工具对牛乳铁蛋白肽衍生肽(LfcinBD)的结构进行优化设计,将衍生肽LfcinB-W4的基因片段在毕赤酵母GS115表达。发酵实验结果表明当甲醇诱导浓度为2.5%,发酵时间为96 h时,发酵上清液对金黄色葡萄球菌和沙门氏菌具有很强的抑制作用,其效果与50 mg/mL的氨苄青霉素抑菌效果相当,高于LFcinB。发酵上清液冷冻干燥浓缩后,10倍的发酵上清浓缩液其抑菌效果为同体积50 mg/m L的氨苄青霉素的2.5倍。用Tricine-SDS-PAGE检测到相对分子质量约为3.2 kDa的衍生肽LFcinB-W4。实验通过生物信息学工具设计得到抑菌活性高于LFcinB的衍生肽,为下一步分析牛乳铁蛋白肽功能与结构关系奠定了基础。(本文来源于《食品工业科技》期刊2019年14期）
岳申申,肖月,李慕勤,姚海涛,张译丹[9]（2018）在《纯镁超声微弧氧化载牛乳铁蛋白复合膜层植入体的生物相容性》一文中研究指出目的探讨纯镁超声微弧氧化膜层载入牛乳铁蛋白,对其骨结合能力的影响。方法以纯镁微弧氧化(Microarc oxidation,MAO)(a)组为对照组,实验组分别是纯镁微弧氧化-硅烷(b)组,纯镁微弧氧化-硅烷载牛乳铁蛋白(c)组,分别分组植入大白兔下颌骨内。在不脱钙的情况下,通过扫面电镜观察植入后膜层的形貌,锥形束投照计算机重组断层影像设备(Cone beam CT,CBCT)观察镁基体与骨组织结合及其降解情况,甲苯胺蓝染色观察骨组织形成形态,采用能谱分析仪测定不同涂层的表面元素的情况。结果通过CBCT的观察其骨组织愈合较好的是8周的(c)组,(a)组较(b)组差,甲苯胺蓝染色骨组织生长的统计学分析,均表现出(c)组优于(b)组,(b)组优于(a)组。结论纯镁超声微弧氧化以硅烷为偶联载牛乳铁蛋白复合膜层,使镁基体具有更强促进骨结合的能力,增强生物相容性。(本文来源于《中国体视学与图像分析》期刊2018年04期）
刘景喜,史夏斌,靳文仲,季晨,曹学浩[10]（2018）在《牛乳铁蛋白肽对隐性乳房炎奶牛产奶量、体细胞及乳成分的影响》一文中研究指出本试验以年龄、胎次、泌乳天数、产奶量相近,体细胞数在50万～150万个·mL-1范围内的荷斯坦奶牛为研究对象,设置对照组和试验组,分别灌服生理盐水和牛乳铁蛋白肽,研究灌服牛乳铁蛋白肽对患隐性乳房炎奶牛产奶量、体细胞数及乳成分的影响。结果表明:(1)与0 d相比,30 d时试验组奶牛产奶量显着提高了8.54%(P<0.01),而对照组则显着降低了18.30%(P<0.01),且试验组奶牛产奶量比对照组高33.37%,差异显着(P<0.05);(2)与0 d相比,30 d时对照组和试验组奶牛体细胞数分别显着降低了75.09%(P<0.01)和83.72%(P<0.01),且后者较前者低32.92%,但差异不显着(P>0.05);(3)灌服牛乳铁蛋白肽后,奶牛乳成分指标中干物质含量、乳脂率、乳蛋白率和无脂固形物含量较灌服前均有一定程度的下降,而乳糖和尿素氮含量则有一定幅度的上升,但差异均未达显着水平(P>0.05)。综合而言,牛乳铁蛋白肽对隐性乳房炎的治疗有一定的辅助效果,可显着提高隐性乳房炎奶牛日产奶量并降低体细胞数。(本文来源于《天津农业科学》期刊2018年12期）
牛乳铁蛋白论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
乳铁蛋白(Lactoferrin,LF)作为一种铁结合糖蛋白,具有抗菌、抗癌、抗炎以及免疫活性,其生物学作用日益被关注。牛乳铁蛋白作为一种食物来源的蛋白质,可商业化生产并用作食品营养添加剂,有利于消费者机体健康。许多微量元素具有重要生物功能,在免疫系统中也发挥重要作用,提高机体的免疫功能。然而,尚未确定微量元素增补对乳铁蛋白的免疫和抗炎活性是否有影响作用。为此,本课题将牛乳铁蛋白分别增补铜/锌0.16、0.32和0.64mg/g蛋白质,然后评估乳铁蛋白及其铜锌增补乳铁蛋白的免疫和抗炎活性。采用小鼠脾细胞和小鼠巨噬细胞(RAW264.7)为体外模型,评估所选样品的免疫活性;另外,以脂多糖诱导的小鼠巨噬细胞(RAW264.7)为炎症模型,评估所选样品的其抗炎活性;最终,揭示铜锌增补对乳铁蛋白的免疫和抗炎活性的影响作用。通过利用CCK-8法,确定牛乳铁蛋白及铜锌增补乳铁蛋白在所选用的3个浓度下(10、20和40μg/mL)对脾细胞、ConA诱导的T淋巴细胞和LPS诱导的B淋巴细胞的增殖抑制作用大小,采用中性红法测定RAW264.7巨噬细胞吞噬作用,流式细胞仪测定T淋巴细胞亚群分型(CD4~+和CD8~+)的比例,ELISA法测定细胞因子含量(干扰素-γ、白细胞介素-2和白细胞介素-4,脾细胞;肿瘤坏死因子-α和白细胞介素-1β,巨噬细胞),最终确定铜锌增补对乳铁蛋白体外免疫活性的影响。结果表明,乳铁蛋白和铜锌增补乳铁蛋白对脾细胞、ConA诱导的T淋巴细胞和LPS诱导的B淋巴细胞均有一定的增殖抑制作用。低水平铜/锌增补(0.16mg/g蛋白质)和低剂量(10μg/mL)确实能够显着地减缓乳铁蛋白对脾细胞的抑制作用(P<0.05)。与乳铁蛋白相比,低水平铜锌增补的乳铁蛋白在低剂量下对巨噬细胞的刺激作用略微增加,提高ConA刺激的脾细胞中T淋巴细胞亚群CD4~+/CD8~+比例,同时,显着地明显促进脾淋巴细胞分泌细胞因子(IL-2、IL-4和IFN-γ)和RAW264.7巨噬细胞分泌细胞因子(IL-1β和TNF-α)(P<0.05)。然而,与在低剂量下的结果相比,大多数情况下,高水平铜锌增补(0.64 mg/g蛋白质)的乳铁蛋白在高剂量下对这些细胞产生相反的作用。整体上,铜锌增补乳铁蛋白能够减缓或增加乳铁蛋白对两种免疫细胞的影响。利用CCK-8法,确定牛乳铁蛋白及铜增补乳铁蛋白在所选用的4个浓度下(10、20、40和80μg/mL)对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞细胞活性的影响。测定乳酸脱氢酶(LDH)活力进行细胞毒性测定,采用Griess法测定巨噬细胞分泌的NO含量,DCFH-DA法测定RAW264.7巨噬细胞内的活性氧(ROS)水平,ELISA法测定RAW264.7巨噬细胞释放的PGE_2、TNF-α、IL-6和IL-1β含量,最终确定铜增补对乳铁蛋白抗炎活性的影响。结果表明,乳铁蛋白和铜增补乳铁蛋白对LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞分泌NO、PGE_2、TNF-α、IL-6和IL-1β炎性介质和细胞中ROS水平均有一定抑制作用,表明其具有抗炎活性。与乳铁蛋白相比,低水平铜增补并在低剂量下的乳铁蛋白的抗炎效果更为明显(P<0.05)。综上所述,铜锌增补能够降低或增强乳铁蛋白的免疫作用或抗炎活性,并且低水平铜锌增补、低剂量下产生更强的免疫作用和抗炎活性。所以,Cu~(2+)/Zn~(2+)含量是影响乳铁蛋白免疫作用或抗炎活性的重要因素之一。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
牛乳铁蛋白论文参考文献
[1].丁梦露,彭丽媛,韩菲菲,韩剑众.牛乳铁蛋白肽缓解肠粘膜屏障损伤功能研究[C].中国食品科学技术学会第十六届年会暨第十届中美食品业高层论坛论文摘要集.2019
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