导读:本文包含了蛋白的原核表达论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:蛋白,病毒,基因,层析,番茄,纤毛,猪瘟。
蛋白的原核表达论文文献综述
官丽娟,邵钰,任伟杰,宫枫举,韩同福[1]（2019）在《非洲猪瘟病毒结构蛋白p54的原核表达与反应原性鉴定》一文中研究指出p54蛋白为非洲猪瘟病毒(ASFV)的主要结构蛋白之一,参与病毒对靶细胞的吸附与进入。为深入研究p54结构蛋白的抗原性,根据GenBank序列号(MK128995)对应的E183L基因序列,设计1对特异性引物扩增其整个CDS区,并克隆至pET-30a(+)载体,构建了表达p54蛋白的重组质粒pET-30a(+)-p54。用BL21(DE3)转化该质粒,经IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE电泳,可见重组质粒表达出1条分子量约为20 kDa的特异性条带,且重组表达蛋白以融合表达蛋白形式存在于上清。进一步通过His亲和层析法纯化目的蛋白,用ASFV阳性血清进行蛋白质免疫印迹反应,发现表达的重组p54蛋白能与ASFV阳性血清产生特异性反应,表明p54蛋白表达成功。本研究为ASFV抗体ELISA检测方法的建立奠定了基础。(本文来源于《中国动物检疫》期刊2019年12期）
张康,张璇,闫遵祥,王磊,张凯[2]（2019）在《牛病毒性腹泻病毒Core蛋白的原核表达及多克隆抗体制备》一文中研究指出为制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的Core蛋白及其多克隆抗体,根据Core蛋白的编码基因序列,设计合成一对特异性引物,利用RT-PCR扩增BVDV Core基因并定向插入Pet30a载体中,构建重组质粒Pet30a-Core,经酶切鉴定后转化大肠埃希菌TOP 10感受态细胞,筛选获得阳性重组菌,以IPTG进行诱导后成功表达出分子质量为20 ku的重组Core蛋白。将诱导表达的蛋白产物经融合蛋白的Ni柱亲和法进行纯化,利用纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,并利用间接ELISA法测出多克隆抗体效价达到1∶512 000。蛋白质印迹法(Western blot)和间接免疫荧光试验(IFA)证实,多克隆抗体可与细胞中的BVDV抗原发生反应,具有良好的免疫原性和特异性。本实验成功制备了BVDV重组Core蛋白的兔源多克隆抗体,为BVDV的检测及其Core蛋白功能研究奠定了基础。(本文来源于《浙江农业学报》期刊2019年11期）
陈蒙,袁赫海,张宇,刘海峰[3]（2019）在《山葡萄PAL基因原核表达载体的构建及表达蛋白纯化》一文中研究指出山葡萄苯丙胺酸解氨酶(PAL)是苯丙烷途径的关键酶,在果皮着色中能够调控花色苷合成途径。构建PAL基因原核表达重组质粒pET28a-PAL,并对重组蛋白表达条件进行优化,以山葡萄DNA扩增PAL并连接到p MD18-T,筛选得到阳性克隆后连接到pET28a原核表达载体上,重组质粒转化至E.coli BL21后经不同浓度的IPTG、不同诱导温度、不同诱导时间处理,通过DPS设计正交试验优化重组蛋白的表达条件,并将重组蛋白纯化。结果显示,正交试验不同处理下的蛋白表达差异显着(P<0.05),诱导因素的影响程度从强到弱分别为IPTG浓度、温度和时间。IPTG诱导浓度对其影响最显着(P=0.015<0.05),且IPTG浓度为0.6mmol·L-1,诱导温度为22℃,诱导时间为5h时,诱导重组蛋白PAL的效果最佳。成功构建其原核表达载体并使其在大肠杆菌中得到高效表达,为探究PAL蛋白的表达提供参考。(本文来源于《安徽农业大学学报》期刊2019年05期）
韩斐,赵睿骁,王刚,江明锋[4]（2019）在《定点突变的猪源性胰高血糖素样肽-2融合蛋白的原核表达与鉴定》一文中研究指出为提高胰高血糖素样肽-2(GLP-2)生产效率以适应畜牧生产应用的需求,本试验利用基因工程技术表达出定点诱变的p[Gly2]GLP-2。用甘氨酸取代GLP-2氨基末端第2位的丙氨酸后,再根据大肠杆菌的偏好性对p[Gly2]GLP-2序列进行优化并在目标肽序列N-端添加肠激酶识别位点,合成基因序列,通过KpnⅠ和XhoⅠ双酶切位点连接到pET-40b(+)构建原核重组表达载体p[Gly2]GLP-2-pET-40b(+),重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,诱导表达重组蛋白。优化后最适表达条件为:菌液D_(600 nm)值为0.6时,用0.2 mmol/L IPTG在37℃诱导培养5 h;最终得到p[Gly2]GLP-2重组蛋白表达量较高的基因工程菌株。通过镍离子亲和层析柱纯化及分梯度洗脱获得纯度较高的p[Gly2]GLP-2融合蛋白,本结果为后续p[Gly2]GLP-2功能性的研究及其在畜牧生产的应用奠定了基础。(本文来源于《中国畜牧兽医》期刊2019年11期）
常秋燕,郭富城,冶昡青,李凌浩,王悦萦[5]（2019）在《牛病毒性腹泻病毒N~(pro)蛋白的原核表达及裂解效率》一文中研究指出为了研究牛病毒性腹泻病毒N~(pro)蛋白的催化切割效率,首先扩增GSTZ毒株的N~(pro)基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+)上,使其在表达菌E.coli BL21 (DE 3)中表达,确定正确的N~(pro)基因碱基序列,然后构建含有切割位点的pET-28a-N~(pro)-GFP重组融合质粒,在原核表达系统中研究N~(pro)蛋白的切割效率。结果显示,GSTZ毒株的N~(pro)蛋白成功地在原核表达系统中表达,重组融合蛋白质N~(pro)-GFP在原核表达系统中的切割效率约为60.28%。(本文来源于《江苏农业学报》期刊2019年05期）
周佳兰,孙维越,Hadiatullah,Hadiatullah,董春明,樊振川[6]（2019）在《莱茵衣藻BBSome组分蛋白BBS4的原核表达、纯化及其多克隆抗体制备》一文中研究指出目的为了探讨巴德特-别德尔综合征(BBS)蛋白在纤毛信号传导中的作用,本文研究了莱茵衣藻BBS4蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体制备。方法利用莱茵衣藻bbs4基因的cDNA序列构建原核表达载体pET-28a(+)-bbs4和pMAL-c2X-bbs4,转入大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)后,诱导表达得到带有麦芽糖结合蛋白(MBP)和6×His标签的融合蛋白,用纯化后的带有6×His标签的融合蛋白免疫新西兰白兔,经耳源静脉采血,分离得到抗血清,间接ELISA法测得抗血清的效价,Western印迹法和免疫荧光实验对所制备抗体的特异性进行检测。结果成功构建了原核表达质粒pET-28a(+)-bbs4和pMAL-c2X-bbs4。6×His-BBS4和MBP-BBS4融合蛋白的相对分子质量分别为4.5×104和8.5×104,经纯化后得到纯度>85%、浓度>0.5 mg/ml的目的蛋白用于免疫,测定效价为51 200,经Western印迹法对C. reinhardtii CC-125检测有较高的特异性,实现了莱茵衣藻BBS4蛋白的原核表达和多克隆抗体的制备。结论成功制备了莱茵衣藻BBS4的多克隆抗体,为BBS4在纤毛病中作用的深入研究奠定了基础。(本文来源于《国际药学研究杂志》期刊2019年06期）
锡林高娃,韩甫鑫,杜长智,布日额[7]（2019）在《牛源无乳链球菌菌毛岛屿AP2蛋白抗原优势区的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立》一文中研究指出目的构建牛源无乳链球菌AP2蛋白原核表达质粒,表达AP2蛋白,并以此为包被抗原建立检测无乳链球菌抗体的ELISA方法。方法取pMD18-T-AP2和pET-30a(+)分别进双酶切,酶切片段连接后转染BL21(DE3)细胞,进行AP2的诱导表达及鉴定。以重组AP2为抗原建立检测无乳链球菌抗体的ELISA方法,并用无乳链球菌、化脓性链球菌、大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌感染兔血清进行检测。结果双酶切及PCR鉴定重组质粒构建正确。Western blot分析表明重组AP2蛋白具有反应原性,建立的间接ELISA抗原最佳包被浓度为25μg/ml,血清最佳稀释度为1∶160,酶标二抗最适稀释度为1∶70。抗体滴度检测显示重组AP2具有良好的免疫原性,3次免疫(56 d)的兔血清抗体滴度达1∶10 000。用该方法检测化脓性链球菌、大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌感染兔血清,均未出现交叉阳性反应。结论成功表达了重组无乳链球菌菌毛岛屿AP2蛋白,建立的间接ELISA方法稳定性高,特异性良好,可用于无乳链球菌感染检测。(本文来源于《中国病原生物学杂志》期刊2019年10期）
王会征,兰玉彬[8]（2019）在《辣椒疫霉菌葡聚糖酶抑制蛋白的原核表达、纯化及结晶》一文中研究指出葡聚糖酶抑制蛋白(GIP)是辣椒疫霉菌在病理环境下诱导产生的一类蛋白,是病原菌抗性蛋白的一种。本研究根据辣椒疫霉菌全基因组序列,通过生物信息学分析、序列比对获得葡聚糖酶抑制蛋白全长基因序列。以辣椒疫霉高致病菌株SD33全基因组为模板扩增GIP基因cDNA,并对其进行相关生物信息学分析。基因经测序验证后与载体pET28a(+)连接,构建好的重组质粒转化大肠杆菌(Escherichia coli Rosetta),用IPTG诱导表达重组蛋白6×His-GIP。重组蛋白在5 mol/L尿素变性环境下进行亲和层析纯化,对纯蛋白进行透析、复性、浓缩后进行分子排阻层析纯化,并对获得的纯蛋白进行蛋白结晶试验,为进一步阐明GIP作用机理奠定基础。(本文来源于《山东农业科学》期刊2019年10期）
邓杰,王炜哲,杨璐嘉,马占鸿[9]（2019）在《番茄褪绿病毒在宁夏地区的鉴定和CP蛋白原核表达》一文中研究指出引起番茄植株严重褪绿萎黄的番茄褪绿病毒(Tomato chlorosis virus,ToCV)首先于1989年在美国的番茄上发现,它不可以由机械摩擦方式进行传播,而是通过烟粉虱(Bemisia tabaci)、温室白粉虱(Trialeurodes vaporariorum)和纹翅粉虱(Trialeurodes abutilonea)在自然界中以半持久方式传播。ToCV至少可感染30种植物,包括蔬菜、园艺作物和杂草,感染番茄的症状与植物营养不良的症状非常相似。本研究采用Dovas等报道的ToC V特异性引物(ToC-F:5'-GGTTTGGATTTTGGTACTACATTCAGT-3';ToC-R:5-AAACTGCCTGCATGAAAAGTCT-3'),对采自宁夏主要设施番茄产区的疑似病毒症状的72个样品进行RT-PCR鉴定,扩增ToCV编码的HSP70h基因部分序列(450bp),并进行克隆和序列测定,电泳结果显示产生450bp大小的特异性条带,共检测到8份样品携带ToCV,PCR产物测序后进行Blast,与ToCV参考序列同源性高达98%,证实了鉴定的正确性,首次通过分子手段在宁夏地区鉴定出ToCV。由于ToCV是韧皮部病毒,难以直接从患病植株直接提取出足够的量和足够的纯度用于生产优质的多克隆抗血清。本研究将ToCV的CP蛋白克隆到pEASY-E1载体(全式金公司)中,构建了pEASY-E1_ToCV_CP质粒,并转化到大肠杆菌菌株BL21 (DE3)中进行表达,并使用Ni-NTA树脂(Qiagen)通过亲和层析进行蛋白质纯化,生产大量高品质抗原用于多克隆抗体的制备。结果表明pEASY-E1_ToCV_CP在32ku处有特异性蛋白表达,而且存在于上清液中,可溶性极好。优化了表达条件后发现使用0.1mmol/L的IPTG诱导、37℃培养12h可大量表达目蛋白,并摸索出最佳洗脱条件是用15倍柱体积的含有10mmol/L咪唑的洗涤缓冲液洗脱杂蛋白,再用含有50mmol/L咪唑的洗脱缓冲液洗脱可得到高纯度蛋白,结果经过Western Blot验证,可用于日后生产高纯度多克隆抗血清,开发ELISA试剂盒或者胶体金快速检测试纸条。(本文来源于《中国植物保护学会2019年学术年会论文集》期刊2019-10-23）
丁敏,黄爱军[10]（2019）在《柑橘叶斑驳病毒外壳蛋白基因的原核表达》一文中研究指出柑橘叶斑驳病毒(Citrus leaf blotch virus,CLBV)属β-线性病毒科柑橘病毒属,是一种正义单链RNA病毒,可侵染大多数的柑橘品种。CLBV在世界上很多个国家都有发现,在中国,该病毒于2016年首次在樱桃上被发现,2017年有报道称该病在柑橘上被发现。CLBV侵染柑橘属植物后,可引起金橘和枳壳芽接合部失调,橘橙叶片斑驳,香橼茎痘以及部分分离物可引起甜橙叶片明脉等症状。CLBV通常与以枳橙或柚子作为砧木上的接穗异常结合有关,柑橘的接穗与砧木的不亲和性会直接危害柑橘树的生长,进而造成柑橘产业重大的经济损失,因此对CLBV检测方法的研究尤为重要。目前,对CLBV的检测主要有指示植物鉴定、RT-PCR法及实时荧光定量RT-PCR。RT-PCR法虽然灵敏度高、特异性较强,在实验室比较常用,但前期样品处理以及RNA抽提较复杂,检测成本较高。赣南是中国最大的脐橙产区,且多以枳类做砧木,为更加方便快捷的检测CLBV在本地区的发生情况,本研究旨在建立CLBV的血清学检测体系。将CLBV外膜蛋白(coat protein,CP)基因全长克隆至表达载体pET30a (+),重组质粒转入BL21 (DE3)感受态中,经过小试不同温度和不同IPTG浓度诱导得出最适诱导条件,16℃条件下,经0.4mmol/L IPTG诱导可获得大量与预期大小一致的蛋白,蛋白大小为42ku。包涵体检测结果显示,上清液和沉淀中目的蛋白均有表达。对目的蛋白进行大量诱导表达,并通过镍柱亲和纯化,咪唑洗脱,所得纯化后的目的蛋白用Bradford法测定蛋白浓度,选择纯度和浓度均达到标准的目标蛋白用于多克隆抗体制备。目前,笔者已通过免疫家兔的方式获得了相应抗体,为后期的CLBV的血清学检测体系的建立打下了基础。(本文来源于《中国植物保护学会2019年学术年会论文集》期刊2019-10-23）
蛋白的原核表达论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
为制备牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的Core蛋白及其多克隆抗体,根据Core蛋白的编码基因序列,设计合成一对特异性引物,利用RT-PCR扩增BVDV Core基因并定向插入Pet30a载体中,构建重组质粒Pet30a-Core,经酶切鉴定后转化大肠埃希菌TOP 10感受态细胞,筛选获得阳性重组菌,以IPTG进行诱导后成功表达出分子质量为20 ku的重组Core蛋白。将诱导表达的蛋白产物经融合蛋白的Ni柱亲和法进行纯化,利用纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔制备多克隆抗体,并利用间接ELISA法测出多克隆抗体效价达到1∶512 000。蛋白质印迹法(Western blot)和间接免疫荧光试验(IFA)证实,多克隆抗体可与细胞中的BVDV抗原发生反应,具有良好的免疫原性和特异性。本实验成功制备了BVDV重组Core蛋白的兔源多克隆抗体,为BVDV的检测及其Core蛋白功能研究奠定了基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
蛋白的原核表达论文参考文献
[1].官丽娟,邵钰,任伟杰,宫枫举,韩同福.非洲猪瘟病毒结构蛋白p54的原核表达与反应原性鉴定[J].中国动物检疫.2019
[2].张康,张璇,闫遵祥,王磊,张凯.牛病毒性腹泻病毒Core蛋白的原核表达及多克隆抗体制备[J].浙江农业学报.2019
[3].陈蒙,袁赫海,张宇,刘海峰.山葡萄PAL基因原核表达载体的构建及表达蛋白纯化[J].安徽农业大学学报.2019
[4].韩斐,赵睿骁,王刚,江明锋.定点突变的猪源性胰高血糖素样肽-2融合蛋白的原核表达与鉴定[J].中国畜牧兽医.2019
[5].常秋燕,郭富城,冶昡青,李凌浩,王悦萦.牛病毒性腹泻病毒N~(pro)蛋白的原核表达及裂解效率[J].江苏农业学报.2019
[6].周佳兰,孙维越,Hadiatullah,Hadiatullah,董春明,樊振川.莱茵衣藻BBSome组分蛋白BBS4的原核表达、纯化及其多克隆抗体制备[J].国际药学研究杂志.2019
[7].锡林高娃,韩甫鑫,杜长智,布日额.牛源无乳链球菌菌毛岛屿AP2蛋白抗原优势区的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立[J].中国病原生物学杂志.2019
[8].王会征,兰玉彬.辣椒疫霉菌葡聚糖酶抑制蛋白的原核表达、纯化及结晶[J].山东农业科学.2019
[9].邓杰,王炜哲,杨璐嘉,马占鸿.番茄褪绿病毒在宁夏地区的鉴定和CP蛋白原核表达[C].中国植物保护学会2019年学术年会论文集.2019
[10].丁敏,黄爱军.柑橘叶斑驳病毒外壳蛋白基因的原核表达[C].中国植物保护学会2019年学术年会论文集.2019
论文知识图
