轮状病毒NSP5真核表达载体的构建、鉴定及功能研究

轮状病毒NSP5真核表达载体的构建、鉴定及功能研究

论文摘要

研究轮状病毒(Rotavirus,RV)非结构蛋白5(NSP5)在体外对RV复制的作用。以质粒pEGFP-N2为载体构建出可特异性表达重组蛋白NSP5的真核表达载体后,将重组质粒转染MA104细胞并分别通过免疫荧光和Western Blot检测NSP5在转染后不同时间的表达差异。随后,重组质粒转染组及对照组细胞分别接种相同剂量的RV,一定时间后根据GFP分布来确认重组蛋白NSP5在细胞内的迁移变化情况,并比较实验组和对照组之间的RV复制能力差异。结果发现,NSP5蛋白在重组质粒转染细胞48 h后表达达到顶峰。此外,GFP也显示NSP5蛋白随RV的感染从弥散状转变为点状聚集,且转染该重组质粒的细胞内RV复制水平明显高于对照细胞。说明了轮状病毒NSP5对病毒的复制具有明显促进作用,这也为深入了解RV的感染、复制及致病机理提供理论基础。

论文目录

  • 1 材料与方法
  •   1.1 材料
  •   1.2 方法
  •     1.2.1 引物设计
  •     1.2.2 NSP5基因扩增和鉴定
  •     1.2.3 pEGFP-N2-NSP5真核表达载体的构建
  •     1.2.4 pEGFP-N2-NSP5的真核细胞转染及其表达水平检测
  •       1)免疫荧光检测。
  •       2)Western Blot检测。
  •     1.2.5 pEGFP-N2-NSP5的真核细胞转染及其对RV复制影响的检测
  • 2 结果与分析
  •   2.1 NSP5基因的扩增及重组质粒的构建和鉴定
  •   2.2 pEGFP-N2-NSP5的表达定位及重组蛋白表达量与时间的关系鉴定
  •   2.3 瞬时转染pEGFP-N2-NSP5对RV复制的影响
  • 3 讨论与结论
  • 文章来源

    类型: 期刊论文

    作者: 陈林林,周艳,林晓晨,杜静,刘洋,汪艺,李鸿钧

    关键词: 轮状病毒,真核表达载体,病毒复制

    来源: 生物学杂志 2019年06期

    年度: 2019

    分类: 基础科学,医药卫生科技

    专业: 生物学,基础医学

    单位: 中国医学科学院北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室

    基金: 中国医学科学院与健康科技创新工程协同创新团队项目(2016-I2M-3-026),国家自然科学基金项目(31700154),云南省重大科技专项(生物医药)(2018ZF006),云南省科技计划项目(2016FB034)

    分类号: R373

    页码: 12-16

    总页数: 5

    文件大小: 3436K

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