伪狂犬病病毒云南变异毒株的分离鉴定及gE、gD、gC、TK基因序列分析

论文摘要

2013-2016年期间,从云南陆良、富源、寻甸及西双版纳规模猪场经Bartha-K61疫苗免疫猪群中发生流产的胎儿内脏组织病料中成功分离获得4株伪狂犬病病毒流行毒株,分别命名为FY-YN-2014、LL-YN-2014、XSBN-YN-2015和XD-YN-2014株。经TCID50测定、动物致病性试验、免疫保护试验及gE、gD、gC、TK基因序列分析,结果显示TCID50分别为10-6.083/100μL、10-5.75/100μL、10-6.583/100μL、10-6.5/100μL。采用Bartha-K61疫苗免疫过的经产母猪血清样品对XSBN-YN-2015分离毒株进行微量病毒中和试验,其结果显示gB抗体阳性、gE抗体阴性的血清样品的中和效价在1∶16～1∶32之间,用gB、gE抗体均为阳性的血清样品时,其中和效价在1∶64～1∶128之间。4株分离毒株接种昆明小白鼠、家兔2～5 d后,均出现奇痒的典型伪狂犬病临床症状。对健康非免疫断奶仔猪进行攻毒,同样出现伪狂犬病的典型发病症状,且能从脑及内脏组织中扩增出伪狂犬病病毒gE基因并成功回收分离到病毒株。在昆明小白鼠上的LD50分别是102.625TCID50、102.875TCID50、102.625TCID50、102.5TCID50。XSBN-YN-2015株在非免疫断奶仔猪（伪狂犬病病毒gE、gB抗体阴性）测得的LD50=105.33TCID50。XSBN分离毒株对免疫2次Bartha-K61疫苗的断奶仔猪的攻击试验结果显示,被攻击仔猪均出现高热、精神萎顿、厌食等临床表现,但1周后均能耐过并逐渐康复,提示Bartha-K61疫苗株免疫猪只对当前流行的伪狂犬病病毒云南变异毒株的攻击基本能够提供100%保护。4株伪狂犬病病毒云南流行毒株与近年来国内报道的TJ、HeN1、NH1201等变异毒株的gE、gC、gD及TK基因核苷酸及氨基酸序列均高度一致,同源性高达99%～100%,均分属于同一进化树分支,不过与早期的国内毒株SC、GDSH株,国外毒株Becker、Nia-1、CL15、Kaplan、Kolchis、Hercules、NIA3及疫苗株Bartha相比,均存在一定程度的变异,也未分属于同一进化分支,因此,4株伪狂犬病病毒云南流行毒株也属于变异毒株。

论文目录

1 材料与方法

1.1 样品

1.2 细胞、试剂及试验动物

1.3 引物设计

1.4 病料的处理

1.5 病毒基因组DNA的抽提

1.6 伪狂犬病病毒野毒（gE基因）的初步诊断检测

1.7 病毒的分离培养

1.8 分离毒株半数组织培养感染量（TCID50）的测定

1.9 微量病毒中和试验

1.10 易感动物接种试验

1.10.1 家兔接种试验

1.10.2 昆明小白鼠接种试验

1.10.3 本动物回归试验

1.11 疫苗免疫保护试验

1.12 gE、gD、gC、TK基因的序列分析

2 结果

2.1 伪狂犬病病毒PCR初步诊断检测结果

2.2 病毒分离培养

2.3 分离毒株TCID50的测定

2.4 微量病毒中和试验结果

2.5 易感动物接种试验结果

2.5.1 家兔接种试验结果

2.5.2 昆明小白鼠接种试验结果

2.5.3 本动物回归试验结果

2.6 疫苗免疫保护试验结果

2.7 分离株gE、gD、gC、TK全基因序列分析结果

2.7.1 gE全基因序列分析

2.7.2 gD全基因序列分析

2.7.3 gC全基因序列分析

2.7.4 TK全基因序列分析

3 讨论

文章来源

类型: 期刊论文

作者: 刘宁,苏琳琳,姚俊,王生奎,高林,何于雯,谢佳芮,马荣安,张以芳

关键词: 伪狂犬病病毒,变异毒株,分离鉴定,基因,序列分析

来源: 中国兽医学报 2019年09期

年度: 2019

分类: 农业科技,基础科学

专业: 生物学,畜牧与动物医学

单位: 云南农业大学动物医学院,云南省畜牧兽医科学院,普洱市思茅区动物防疫预防控制中心

基金: 云南省省本级财政专项(20161105560334)

分类号: S852.65

DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.09.04

页码: 1674-1683

总页数: 10

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伪狂犬病病毒云南变异毒株的分离鉴定及gE、gD、gC、TK基因序列分析

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