导读:本文包含了卵黄高磷蛋白论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:卵黄,蛋白,磷酸,细胞,矿化,磁性,胶原蛋白。
卵黄高磷蛋白论文文献综述
李珊珊,黄茜[1]（2018）在《卵黄高磷蛋白对壳聚糖膜基质上MC3T3-E1细胞增殖的影响》一文中研究指出本研究制备了壳聚糖和氧化石墨烯/壳聚糖复合膜,并采用CCK-8法、Annexin V/PI双染法和PI染色检测了蛋黄中提取的卵黄高磷蛋白对MC3T3-E1细胞在该复合膜基质上的生理活动的影响。结果表明:壳聚糖膜对细胞无毒性影响,并通过提高S期细胞所占比例,使MC3T3-E1细胞活性提高了31.92%,抑制细胞凋亡,使凋亡率下降45.78%;氧化石墨烯/壳聚糖膜会提高细胞的凋亡率,氧化石墨烯含量越高,促进凋亡越明显,凋亡率在氧化石墨烯含量为2%时最高,为17.64%;在壳聚糖膜基质上,100μg/mL卵黄高磷蛋白对MC3T3-E1细胞促进增殖作用最显着(p<0.05),细胞活性提高81.59%,同时降低了细胞的凋亡比例;蛋白浓度为500μg/mL时,细胞活性下降4.47%,促进了细胞凋亡。综上所述,壳聚糖和低浓度卵黄高磷蛋白均能提高MC3T3-E1细胞的活性。(本文来源于《食品工业科技》期刊2018年24期）
李珊珊[2]（2018）在《卵黄高磷蛋白在壳聚糖膜上诱导钙离子矿化及作用机制研究》一文中研究指出卵黄高磷蛋白是在鸡蛋蛋黄中发现的一种酸性糖蛋白。由于该蛋白质中含有大量丝氨酸,且大部分被磷酸化,这种结构赋予卵黄高磷蛋白很强的乳化性、抗氧化性和与金属离子结合的能力。本课题以卵黄高磷蛋白作为研究对象,探讨了它在体外诱导、调控Ca~(2+)矿化的作用。在此基础上酶解蛋白得到卵黄高磷蛋白磷酸肽,研究了Ca~(2+)与多肽的相互影响,并在细胞水平上开展了进一步研究。主要研究内容和实验结果如下:(1)制备了壳聚糖及不同氧化石墨烯含量的壳聚糖复合膜,并采用扫描电镜、全反射红外光谱和溶胀率测试检测了复合膜的微观形貌、二级结构和溶胀性变化,将卵黄高磷蛋白作为诱导剂在复合膜上诱导模拟体液产生沉淀,沉淀用X射线衍射和扫描电镜观察。结果表明:氧化石墨烯会与壳聚糖发生共价结合,使壳聚糖膜表面变粗糙,横截面出现多层复合结构,溶胀性得到改善,复合膜溶胀率较壳聚糖膜降低27.90%。体外矿化结果表明:卵黄高磷蛋白能够促进Ca~(2+)在矿化过程中从无定型磷酸钙向羟基磷灰石转变;氧化石墨烯/壳聚糖膜模拟体液中均产生了矿化沉淀。结论:氧化石墨烯可以改善壳聚糖膜性质,卵黄高磷蛋白和氧化石墨烯均能促进模拟体液沉淀产生。(2)研究制备了壳聚糖和氧化石墨烯/壳聚糖复合膜,并采用CCK-8法、Annexin V/PI双染法和PI染色检测了蛋黄中提取的卵黄高磷蛋白对MC3T3-E1细胞在该复合膜基质上的生理活动的影响。结果表明:壳聚糖膜对细胞无毒性影响,并通过提高S期细胞所占比例从而使MC3T3-E1细胞活性提高了31.92%,同时,壳聚糖还能抑制细胞凋亡,凋亡率下降52.48%;而氧化石墨烯/壳聚糖膜组细胞凋亡率较高,氧化石墨烯含量越高,促进凋亡越明显,凋亡率在氧化石墨烯含量为2%时相比空白对照组上升11.31倍;在壳聚糖膜基质上,100μg/mL卵黄高磷蛋白对MC3T3-E1细胞促进增殖作用最显着,细胞活性提高81.59%,同时降低细胞的凋亡比例;蛋白浓度为500μg/mL时,细胞活性下降4.47%,促进细胞凋亡。结论分析,壳聚糖和低浓度卵黄高磷蛋白均能提高MC3T3-E1细胞活性。(3)为了进一步研究卵黄高磷蛋白与钙离子相互作用的活性位点,针对卵黄高磷蛋白难以被水解的情况,联合不同酶解技术制备得到不同水解度的卵黄高磷蛋白磷酸肽,并研究了磷酸肽与Ca~(2+)的结合能力。对比发现:采用处理剂和高温高压处理的卵黄高磷蛋白,其产物钙螯合率为68.57%,比卵黄高磷蛋白提高了62.9%;另一方面,未经预处理的卵黄高磷蛋白酶解10 h后产物与钙结合能力最高,为48.69%;与钙结合后,蛋白和多肽的微观形貌均出现颗粒状物质。结论:采用非酶处理能提高卵黄高磷蛋白与钙离子的螯合能力。(4)采用荧光、SEM、CD和FT-IR测定了不同处理方式下PV酶解产物与钙螯合后产物的微观结构、二级结构变化等。抗氧化活性能力评价显示,采用处理剂和高温高压处理后的PV的DPPH清除自由基能力最强,为52.98%。细胞实验显示,预处理后的PV能促进MC3T3-E1细胞的增殖,抑制其凋亡,上调细胞相关分化基因表达。(本文来源于《华中农业大学》期刊2018-06-01）
张振忠,马淑伟,郑明驿,王军,汝少国[3]（2018）在《鲫卵黄脂磷蛋白的纯化鉴定及其夹心ELISA的建立》一文中研究指出鲫(Carassius carassius)卵黄原蛋白(vitellogenin,Vtg)是检测水体环境雌激素活性常用的生物标志物。本研究利用凝胶过滤结合离子交换层析与选择性沉淀结合离子交换层析2种方法,从鲫卵巢匀浆液中纯化得到了卵黄脂磷蛋白(lipovitellin,Lv),经鉴定该蛋白含有糖、磷、脂基团,天然分子量约为521 kD,SDS变性电泳显示分子量为117 kD和103 kD的2个亚基。Western blot结果显示,金鱼(Carassius auratus)Lv抗体和斑马鱼(Danio rerio)Lv抗体都能与鲫Lv发生很好的交叉反应。利用纯化的鲫Lv与金鱼Lv抗体和斑马鱼Lv抗体建立了2种夹心ELISA,发现金鱼Lv和鲫Lv的结合曲线基本重合,并且利用鲫Lv与金鱼Lv抗体建立的夹心ELISA工作范围为15.6~1000 ng/mL,检出限约为6.8 ng/mL,显着低于利用斑马鱼Lv抗体建立的夹心ELISA,结合此前研究者建立的鲫Vtg竞争ELISA,为鲫Vtg指标的测定提供了可靠方法。(本文来源于《中国水产科学》期刊2018年01期）
介怡琳[4]（2017）在《卵黄高磷蛋白调控骨矿化的功能研究》一文中研究指出近年来研究发现磷酸化蛋白质在生物矿化过程中起着重要的作用,而卵黄高磷蛋白(PV)是目前自然界中磷酸化程度最高的蛋白质之一,已有部分研究证明了卵黄高磷蛋白具有矿化调节作用,但关于它调控矿化的活性位点及具体机制还不明确。本课题以卵黄高磷蛋白调控骨矿化的功能为核心,构建了不同的体外矿化模型,发现了卵黄高磷蛋白体外促进矿化的现象并探讨了其调控矿化的机制。首先构建静电纺丝胶原蛋白膜仿生溶液矿化体系,并研究卵黄高磷蛋白在此体系中的作用及调控机制;其次采用MC3T3-E1成骨细胞模型研究卵黄高磷蛋白磷酸化程度对成骨细胞矿化功能的影响及其机制;最后构建RAW264.7破骨细胞模型,研究卵黄高磷蛋白对破骨细胞活性和功能的影响。综合叁种不同的矿化体系研究卵黄高磷蛋白的矿化功能,对其矿化机制的阐释及应用做相应的理论支撑。建立了基于十倍模拟体液和电纺胶原纤维膜的体外矿化模型。探讨了各种矿化条件对羟基磷灰石成核和生长的影响。优化了矿化方式,矿化液的量,矿化液pH值,矿化过程和矿化时间等。扫描电镜结果显示,在动态矿化模式下,于pH5.7的十倍模拟体液下矿化3小时,纳米纤维膜表面能产生结晶均匀和晶形良好的无机矿物层,该矿物质经FTIR和XRD鉴定为羟基磷灰石,该晶体在电纺胶原纤维膜表面和内部均有分布。探讨了PV和牛血清蛋白(BSA)作为非胶原蛋白质(NCPs)对电纺胶原纤维膜矿化体系的调控作用。通过SEM观察PV,BSA调控下纺丝界面上矿物的形貌,形成部位,跟踪矿化物相变及晶体形成的时间。采用EDS、XRD、XPS等分析矿化物的化学组成、晶体结构,阐明PV,BSA在纺丝界面上调控磷酸钙矿物形成的效果和机制。该体系被证明是促进骨样磷酸钙涂层形成的快速有效的方法,即通过引入PV和BSA构建了一个良好有序的仿生矿化矿化体系:矿化过程中10×SBF中PV或BSA的存在均显着促进了电纺胶原纤维矿化体系中DCPD向HA转化,且PV比BSA更加快速地促进了矿化物相变过程。PV结合或吸附在矿物上,通过静电相互作用提高微观环境下Ca2+的浓度,从而促进矿化,HPLC跟踪不同时间溶液中PV含量,结果表明在矿化物相变后期,PV复溶至矿化溶液中。探索了不同磷酸化程度的PV对MC3T3-E1细胞增殖、分化和矿化的影响以及可能的作用机制。首先制备了不同脱磷酸化程度的卵黄高磷蛋白,其脱磷率分别22.67%、45.86%、59.24%、75.13%。然后分别通过CCK-8法和碱性磷酸酶测定法分析磷酸化程度对MC3T3-E1细胞的增殖和分化的影响;使用茜素红染色表征PV磷酸化程度对成骨细胞矿化的影响;通过RT-PCR分析MC3T3-E1细胞系中BMP-2,RANKL和OPG mRNA的表达。结果表明卵黄高磷蛋白的磷酸化是促进MC3T3-E1细胞增殖、分化、矿化的关键因素。即高磷酸化程度的PV(脱磷酸化度<45%)组的增殖活力,ALP活性、矿化节点数、BMP-2 mRNA、OPG/RANKL mRNA的比值较对照组均有显着性增加(P<0.05),且呈磷酸化程度依赖性,100μg/mL PV处理组的效果最好,而最大脱磷率的PV组,效果等于或明显低于对照组。研究了不同浓度PV(0、50、100、200和500μg/mL)对RAW264.7细胞增殖、周期、凋亡的影响,发现低浓度PV对RAW264.7细胞有促进增殖和抑制其凋亡的作用,100μg/mL PV时效果最好。CCK-8法表征增殖活力,发现100μg/mL PV浓度时增殖活力高出对照组64%-76%。通过分析PV作用24h、48h后对细胞周期的影响发现,不同浓度的PV均对细胞增殖均有促进作用,与对照组相比低浓度PV(50、100、200μg/mL)处理细胞后S期细胞百分数、增殖指数PI增加值更多。凋亡结果表明,50、100、200μg/mL PV组凋亡率都显着低于空白对照组,500μg/mL时凋亡率高于空白组。另外,TRAP染色细胞分化形态学及TRAP活性方面,不同浓度的PV均可显着减少破骨细胞数量,及降低TRAP活性(P<0.05),且呈浓度依赖性,200μg/mL为最佳抑制浓度。总之,PV并非通过抑制RAW264.7细胞生长而是显着地降低TRAP的活性,进而抑制RAW264.7细胞分化成为破骨细胞。(本文来源于《华中农业大学》期刊2017-06-01）
陈婵,黄茜,李珊珊,马美湖[5]（2017）在《Fe~(3+)修饰磁性纳米粒子的制备与表征及对卵黄高磷蛋白的吸附作用》一文中研究指出通过化学共沉法和表面功能化修饰得到硫酸软骨素钠和Fe~(3+)负载的磁性纳米粒子Fe_3O_4-CS@Fe~(3+)(CMNP@Fe~(3+)),并对该粒子的形貌等特性进行分析。透射电子显微镜观察显示CMNP@Fe~(3+)呈尺寸为20 nm的圆球形,分散性较好;磁滞回线结果表明该粒子具有超顺磁性;傅里叶变换红外光谱测定证明硫酸软骨素钠和Fe~(3+)已成功修饰在Fe_3O_4表面。利用磁性纳米粒子表面Fe~(3+)与卵黄高磷蛋白的强结合力,建立从蛋黄中磁性分离卵黄高磷蛋白的新方法,并对吸附过程的影响因素进行研究。结果发现当溶液pH 4.0、底物初始质量浓度10 mg/m L、吸附时间180 min时,磁性纳米粒子的吸附能力最强。利用动力学模型和等温吸附模型进行拟合,确定CMNP@Fe~(3+)吸附卵黄高磷蛋白的过程符合伪二级动力学模型和Freundlich等温吸附模型,并通过模型计算得到吸附平衡时卵黄高磷蛋白的理论吸附量为625.00 mg/g。该研究结果为鸡蛋中蛋白质实现磁性分离提供了依据。(本文来源于《食品科学》期刊2017年15期）
刘晴丽[6]（2016）在《卵黄高磷蛋白磷酸肽骨矿化作用研究》一文中研究指出卵黄高磷蛋白(PV)是自然界中磷酸化程度最高的蛋白之一,其丝氨酸的含量超过氨基酸总量的55%,其中80%的丝氨酸磷酸化,据报道其水解之后的磷酸肽具有更强的抗氧化等生物活性,基于实验室前期关于PV的工作基础,本论文主要以制备的卵黄高磷蛋白磷酸肽PPP4为研究对象,从最初观察其与钙的结合情况入手,进一步通过体外胶原蛋白矿化和细胞矿化研究对骨的矿化的影响,最后基于其在体外模型中能促进胶原纤维内部的矿化和成骨细胞细胞基质矿化的作用,为开发促进骨骼发育的功能食品奠定基础。主要研究内容及得到的结论如下:通过ITC研究发现了PPP4与钙离子有叁类结合位点,其焓变△H由负变正再变负,说明钙离子与PPP4的结合是先放热再吸热再放热的过程,叁类结合位点的△G<0,说明这叁类结合位点是热力学自发的行为。ISE拟合的两类结合常数均达到104mol-1,高亲和位点的结合常数为7.875×104,低亲和位点的结合常数为2.942×104,且具有低亲和位点数目(2.833)高于高亲和位点数(1.587)的特点。随着钙离子浓度的增加,PPP4的结构更加紧密,刚性结构增强,其中β-折迭比例增加了27.8%,β-转角减少37.5%,钙离子对PPP4的荧光猝灭呈自然对数增加的模式,猝灭作用逐步放缓。以体外胶原蛋白膜为基质,以PILP理论为指导,研究了PV和PPP4在钙磷仿生矿化体系中对胶原蛋白矿化的影响。首先制备了胶原蛋白膜,通过SEM/EDS、TEM/SAED和XRD的方法观察了胶原蛋白膜上矿物的沉积状况形貌、晶体的晶型、胶原蛋白矿化后的形貌以及矿物在胶原蛋白基质上的分布。发现PV和PPP4能够调控胶原纤维内部的矿化,促进ACP向HAP的转变,形成的磷灰石晶体在胶原纤维表面也有分布。矿化2d时,对照组的EDS显示Ca/P=1.67,羟磷灰石(HAP)已形成,而此时PPP4组的Ca/P=1.93,主要是无定型磷酸钙(ACP)。矿化14d后,PPP4和PV组有明显的羟磷灰石特征峰。荧光光谱的分析表面PV和PPP4在矿化溶液里面的微观结构并未发生剧烈变化。通过BSA组和空白对照组相比较发现PV和PPP4调控胶原纤维的矿化的发生是一个缓慢有序的过程。以PPP4钙结合实验以及其对胶原蛋白矿化的调控作用为基础,进一步以成骨细胞MC3T3-E1为模型,研究PPP4对其增殖、凋亡、早期分化和后期矿化的影响。PPP4浓度为100μg/mL时,细胞增殖活力与对照组相比增加了32%,PPP4浓度为200μg/m L时,增殖活力增加45%。检测PPP4对细胞凋亡的影响时发现添加不同浓度PPP4后,各组细胞凋亡比率均不超过10%。通过ALP和茜素红染色发现PPP4对成骨细胞分化的影响是缓慢的作用,高浓度长时间的作用反而不利于成骨细胞的分化。制备PPP4与钙的复合物,单因素研究确定其制备工艺为肽钙质量比3:1、反应时间50min、反应温度50℃、反应pH7.5。红外光谱显示PPP4的羧基、氨基和磷酸基团均参与了钙结合。DSC显示PPP4与钙结合之后其热稳定性无明显变化,均达到122℃。PPP4-Ca经过热和冻融处理后稳定性良好,钙保留率维持在98%,消化后钙保留率73.45%。(本文来源于《华中农业大学》期刊2016-06-01）
程晓燕[7]（2016）在《卵黄高磷蛋白对成骨/破骨细胞分化及成熟的影响》一文中研究指出正常的骨代谢是成骨细胞行使的骨形成与破骨细胞行使的骨吸收的一个动态平衡过程。当这个平衡失调,骨吸收大于骨形成时,就会导致骨质疏松。目前研究发现,骨桥蛋白、骨涎蛋白、牙本质基质蛋白、牙本质磷蛋白等许多磷蛋白在生物矿化、骨代谢过程中起着一定的调节作用,而卵黄高磷蛋白(phosvitin,PV)是一种高度磷酸化的蛋白,与这些蛋白有着相似的结构、组成,对于骨代谢的过程有一定的影响。本文从细胞水平的角度,探索卵黄高磷蛋白对骨代谢中成骨细胞的骨形成作用、破骨细胞的骨吸收作用以及相应的机制进行研究,具体研究内容和结果如下:(1)以小鼠前成骨细胞MC3T3-E1为研究对象,系统地研究卵黄高磷蛋白对成骨细胞生长、分化和矿化的影响以及其对成骨细胞代谢中重要基因BMP-2、Runx2mRNA表达的影响。本试验以含有50μg/mL抗坏血酸、100mmol/Lβ-甘油磷酸钠的完全培养基为成骨诱导液,采用MTT法、ALP活性的测定分别考察了卵黄高磷蛋白对成骨细胞的生长、分化的影响,研究结果表明,卵黄高磷蛋白(1-1000μg/mL)对成骨细胞的生长基本没有显着影响,但可以促进细胞的分化;通过Ⅰ型胶原蛋白含量的测定以及矿化骨结节的茜素红染色考察了卵黄高磷蛋白对成骨细胞矿化的影响,结果表明,卵黄高磷蛋白可能是通过促进钙的沉积和增加Ⅰ型胶原蛋白含量的合成、分泌,促进矿化骨基质的形成,从而促进骨形成。采用Real time RT-PCR技术研究卵黄高磷蛋白对MC3T3-E1细胞成骨细胞骨形成相关基因BMP-2、Runx2 mRNA表达的影响,结果表明,卵黄高磷蛋白可以促进细胞中BMP-2、Runx2基因mRNA的表达,从而促进成骨细胞的骨形成。(2)以RAW264.7细胞作为破骨前体细胞模型,研究卵黄高磷蛋白对破骨细胞的形成和骨吸收活性的影响。本试验采取含有50ng/mL RANKL的完全培养基作为破骨细胞诱导液,首先通过MTT法检测卵黄高磷蛋白对RAW264.7细胞生长的影响,发现在1-500μg/mL浓度范围内,卵黄高磷蛋白对RAW264.7细胞的生长几乎没有影响。本试验有采用抗酒石酸酸性磷酸酶染色及活性测定来研究卵黄高磷蛋白对破骨细胞分化的影响,结果表明,破骨细胞诱导液能够成功诱导破骨细胞的分化,且卵黄高磷蛋白(10μg/mL、50μg/mL、100μg/mL)可以剂量依赖性地抑制RAW264.7细胞的分化,表现为破骨细胞数量的减少以及抗酒石酸酸性磷酸酶活性的降低。采用Real time RT-PCR技术研究卵黄高磷蛋白对RAW264.7细胞破骨细胞骨分化过程中相关基因cathepsin K、MMP-9、RANK mRNA表达的影响,结果显示,一定浓度的卵黄高磷蛋白可以通过下调cathepsin K、MMP-9、RANK mRNA的表达,从而抑制破骨细胞的骨吸收活性。成骨细胞与破骨细胞的动态平衡才能保证骨代谢的正常。卵黄高磷蛋白对于骨代谢的影响是双方面的:它不仅能促进调控成骨细胞的骨形成,而且可以抑制破骨细胞的骨吸收,这为卵黄高磷蛋白对于骨代谢的作用提供一定的数据支持和理论基础。(本文来源于《天津商业大学》期刊2016-05-01）
刘瑜,王二雷,徐彩娜,刘静波[8]（2016）在《卵黄高磷蛋白磷酸肽的制备技术研究》一文中研究指出为优化卵黄高磷蛋白磷酸肽的水解工艺,首先进行脱磷酸化处理后,在单因素的基础上采用响应面法优化水解工艺,选取水解温度、水解p H和水解时间叁个因素进行试验,并在最佳工艺下对制得的卵黄高磷蛋白磷酸肽进行了氨基酸组分分析和阻止磷酸钙沉淀效果分析。结果表明,底物浓度为1%,碱浓度为0.1 mol/L,在此条件下脱磷20 min,脱磷效果最佳;最优的水解温度为50.0℃,水解时间为160 min,水解p H为8.5,在此条件下水解度为16.64%;卵黄高磷蛋白磷酸肽中氨基酸含量比粗蛋白中氨基酸提高近两倍,且丝氨酸含量占磷酸肽样品中所有氨基酸的31.35%;随着水解度的增加,卵黄高磷蛋白磷酸肽的浓度越高,其阻止磷酸肽沉淀效果越好,且存在一定的剂量依赖关系。(本文来源于《食品工业》期刊2016年03期）
张阳,翟颖红,许亚丽,王俊伟,杨严俊[9]（2016）在《利用TiO2/硅藻土复合材料富集卵黄高磷蛋白磷酸肽》一文中研究指出利用TiO_2/硅藻土复合材料对粗蛋黄水解多肽进行富集,研究p H值、吸附时间、初始多肽浓度和吸附温度因素对复合材料富集卵黄高磷蛋白磷酸肽能力的影响,研究磷酸肽的持钙效果。(本文来源于《现代食品》期刊2016年05期）
介怡琳,陈婵,刘晴丽,马美湖,黄茜[10]（2016）在《卵黄高磷蛋白调控生物矿化的研究进展》一文中研究指出近年来研究发现磷酸化蛋白质在生物矿化过程中起着重要的作用,而卵黄高磷蛋白是目前自然界中磷酸化程度最高的蛋白质之一,已有部分研究证明了卵黄高磷蛋白具有矿化调节作用,但关于它调控矿化的活性位点及具体机制还不明确。本文概述了生物矿化发生的环境、矿化原理、矿化过程及矿化调控等内容,对卵黄高磷蛋白调控生物矿化的相关假说及研究进展进行了探讨。(本文来源于《食品科学》期刊2016年09期）
卵黄高磷蛋白论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
卵黄高磷蛋白是在鸡蛋蛋黄中发现的一种酸性糖蛋白。由于该蛋白质中含有大量丝氨酸,且大部分被磷酸化,这种结构赋予卵黄高磷蛋白很强的乳化性、抗氧化性和与金属离子结合的能力。本课题以卵黄高磷蛋白作为研究对象,探讨了它在体外诱导、调控Ca~(2+)矿化的作用。在此基础上酶解蛋白得到卵黄高磷蛋白磷酸肽,研究了Ca~(2+)与多肽的相互影响,并在细胞水平上开展了进一步研究。主要研究内容和实验结果如下:(1)制备了壳聚糖及不同氧化石墨烯含量的壳聚糖复合膜,并采用扫描电镜、全反射红外光谱和溶胀率测试检测了复合膜的微观形貌、二级结构和溶胀性变化,将卵黄高磷蛋白作为诱导剂在复合膜上诱导模拟体液产生沉淀,沉淀用X射线衍射和扫描电镜观察。结果表明:氧化石墨烯会与壳聚糖发生共价结合,使壳聚糖膜表面变粗糙,横截面出现多层复合结构,溶胀性得到改善,复合膜溶胀率较壳聚糖膜降低27.90%。体外矿化结果表明:卵黄高磷蛋白能够促进Ca~(2+)在矿化过程中从无定型磷酸钙向羟基磷灰石转变;氧化石墨烯/壳聚糖膜模拟体液中均产生了矿化沉淀。结论:氧化石墨烯可以改善壳聚糖膜性质,卵黄高磷蛋白和氧化石墨烯均能促进模拟体液沉淀产生。(2)研究制备了壳聚糖和氧化石墨烯/壳聚糖复合膜,并采用CCK-8法、Annexin V/PI双染法和PI染色检测了蛋黄中提取的卵黄高磷蛋白对MC3T3-E1细胞在该复合膜基质上的生理活动的影响。结果表明:壳聚糖膜对细胞无毒性影响,并通过提高S期细胞所占比例从而使MC3T3-E1细胞活性提高了31.92%,同时,壳聚糖还能抑制细胞凋亡,凋亡率下降52.48%;而氧化石墨烯/壳聚糖膜组细胞凋亡率较高,氧化石墨烯含量越高,促进凋亡越明显,凋亡率在氧化石墨烯含量为2%时相比空白对照组上升11.31倍;在壳聚糖膜基质上,100μg/mL卵黄高磷蛋白对MC3T3-E1细胞促进增殖作用最显着,细胞活性提高81.59%,同时降低细胞的凋亡比例;蛋白浓度为500μg/mL时,细胞活性下降4.47%,促进细胞凋亡。结论分析,壳聚糖和低浓度卵黄高磷蛋白均能提高MC3T3-E1细胞活性。(3)为了进一步研究卵黄高磷蛋白与钙离子相互作用的活性位点,针对卵黄高磷蛋白难以被水解的情况,联合不同酶解技术制备得到不同水解度的卵黄高磷蛋白磷酸肽,并研究了磷酸肽与Ca~(2+)的结合能力。对比发现:采用处理剂和高温高压处理的卵黄高磷蛋白,其产物钙螯合率为68.57%,比卵黄高磷蛋白提高了62.9%;另一方面,未经预处理的卵黄高磷蛋白酶解10 h后产物与钙结合能力最高,为48.69%;与钙结合后,蛋白和多肽的微观形貌均出现颗粒状物质。结论:采用非酶处理能提高卵黄高磷蛋白与钙离子的螯合能力。(4)采用荧光、SEM、CD和FT-IR测定了不同处理方式下PV酶解产物与钙螯合后产物的微观结构、二级结构变化等。抗氧化活性能力评价显示,采用处理剂和高温高压处理后的PV的DPPH清除自由基能力最强,为52.98%。细胞实验显示,预处理后的PV能促进MC3T3-E1细胞的增殖,抑制其凋亡,上调细胞相关分化基因表达。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
卵黄高磷蛋白论文参考文献
[1].李珊珊,黄茜.卵黄高磷蛋白对壳聚糖膜基质上MC3T3-E1细胞增殖的影响[J].食品工业科技.2018
[2].李珊珊.卵黄高磷蛋白在壳聚糖膜上诱导钙离子矿化及作用机制研究[D].华中农业大学.2018
[3].张振忠,马淑伟,郑明驿,王军,汝少国.鲫卵黄脂磷蛋白的纯化鉴定及其夹心ELISA的建立[J].中国水产科学.2018
[4].介怡琳.卵黄高磷蛋白调控骨矿化的功能研究[D].华中农业大学.2017
[5].陈婵,黄茜,李珊珊,马美湖.Fe~(3+)修饰磁性纳米粒子的制备与表征及对卵黄高磷蛋白的吸附作用[J].食品科学.2017
[6].刘晴丽.卵黄高磷蛋白磷酸肽骨矿化作用研究[D].华中农业大学.2016
[7].程晓燕.卵黄高磷蛋白对成骨/破骨细胞分化及成熟的影响[D].天津商业大学.2016
[8].刘瑜,王二雷,徐彩娜,刘静波.卵黄高磷蛋白磷酸肽的制备技术研究[J].食品工业.2016
[9].张阳,翟颖红,许亚丽,王俊伟,杨严俊.利用TiO2/硅藻土复合材料富集卵黄高磷蛋白磷酸肽[J].现代食品.2016
[10].介怡琳,陈婵,刘晴丽,马美湖,黄茜.卵黄高磷蛋白调控生物矿化的研究进展[J].食品科学.2016
论文知识图
