导读:本文包含了非经典分泌蛋白论文开题报告文献综述、选题提纲参考文献及外文文献翻译，主要关键词:蛋白,经典,根瘤菌,内质网,菜豆,途径,基体。
非经典分泌蛋白论文文献综述
张武,潘伟,马金田,郭涛[1]（2015）在《菜豆根瘤菌CFN42全基因组非经典分泌蛋白的预测与分析》一文中研究指出为了深入了解生物固氮的分子机理,利用Secretome P2.0和Signal P4.1对菜豆根瘤菌CFN42全基因组进行预测,结果发现,在5 963个蛋白质中,非经典分泌蛋白596个,约占总数的10%,主要涉及底物转运,毒力侵染,物质代谢等方面。在有功能描述的215个分泌蛋白中,识别了I、III、IV型分泌系统,这些蛋白质在侵染和根瘤发育方面发挥了重要作用;在381个假定蛋白中,通过结构域分析,发现了Tad、Cupin、Om PA和Csb D结构域,含有这些结构域的非经典分泌蛋白可能参与了根瘤菌的宿主专一性。在豆科植物-根瘤菌固氮体系中,非经典分泌蛋白发挥了重要作用。(本文来源于《大理学院学报》期刊2015年06期）
马峰[2]（2015）在《肺炎链球菌非经典分泌蛋白GAPDH的分泌机制及其与热休克蛋白DnaJ的相互作用研究》一文中研究指出目的明确肺炎链球菌非经典分泌蛋白GAPDH的分泌是否由细菌裂解引起,并确定GAPDH分泌必需结构域。同时,验证该蛋白与热休克蛋白的DnaJ的相互作用,为深入研究GAPDH的分泌机制奠定基础。方法原核表达GAPDH重组蛋白并制备其多克隆抗体,利用该多克隆抗体通过Western Blot评价GAPDH在肺炎链球菌中的保守性。缺失肺炎链球菌主要自溶酶LytA使其丧失自溶能力,通过Western Blot比较野生菌和LytA缺陷菌GAPDH的分泌是否存在差异。同时以只在细胞内表达的CodY蛋白为参照,鉴定肺炎链球菌对数生长早期GAPDH的分泌是否伴有细菌裂解。利用Jpred3软件分析GAPDH二级结构和功能结构域,利用Swiss-Model软件对GAPDH进行同源模建,根据生物信息学结果进行截短表达设计。利用分子克隆技术将不同GAPDH截短表达基因片段克隆到异位表达载体pJW-v25质粒,经测序鉴定后将重组质粒转化肺炎链球菌D39,采用0.15mm Zn2+诱导表达含有GFP标签的GAPDH。分离亚组份,采用Western Blot检测截短表达的GAPDH在肺炎链球菌的定位,初步确定分泌必需结构域。采用结构替代和氨基酸突变两种方法进一步验证分泌必需结构域在GAPDH分泌中的作用,并确定参与GAPDH分泌的关键性氨基酸。将肺炎链球菌GAPDH分泌必需结构域和枯草芽孢杆菌168菌株的GAPDH同源序列进行替换,评价该分泌必需结构域是否具有普遍性。在肺炎链球菌中,将GAPDH的结构域Ⅰ进行直接连接或柔性结构连接后,与GFP标签蛋白融合表达,观察融合蛋白的分泌及表面定位情况,以确定结构域Ⅰ能否作为一个信号肽介导蛋白质的分泌。在肺炎链球菌中异位表达枯草芽孢杆菌168菌株GAPDH,观察其分泌情况,探讨GAPDH在肺炎链球菌和枯草芽孢杆菌中是否具有共同的分泌途径。采用大肠杆菌双杂交系统、直接结合实验、生物膜干涉技术验证GAPDH和热休克蛋白DnaJ的相互作用,并初步探讨DnaJ对GADPH分泌的影响。结果获得了纯度达90%的GAPDH重组蛋白,并制备了效价达107的抗GAPDH多克隆抗体。Western blot结果显示,在对数生长早期二型肺炎链球菌荚膜型D39和荚膜缺陷型R6细胞壁及培养上清中均检测到GAPDH的表达,但是并没有检测到CodY的表达。同时,主要自溶酶LytA缺失后,培养上清依旧检测到GAPDH的表达,与野生菌相比无明显差异。提示,肺炎链球菌GAPDH的分泌不是由于细菌自溶引起。用Jpred3软件分析发现,GAPDH具有两个结构域：结构域Ⅰ和Ⅱ。结构域Ⅰ由N末端的1-150aa和C末端α螺旋(317-335aa)构成。结构域Ⅱ由151-316aa构成。对GAPDH进行同源建模,也发现GAPDH N末端和C末端在空间上相互靠近构成结构域Ⅰ。根据以上生物信息学结果我们设计了GAPDH截短表达。Western blot结果显示,结构域Ⅰ的N末端1-30aa和(或)C末端α螺旋缺失后,GAPDH都不能定位于细菌表面及分泌到培养上清,提示结构域Ⅰ是GAPDH在细胞表面定为及分泌的必需结构域。氨基酸突变结果显示,N末端的氨基酸3VKVGIN9、18GGG20和C末端325RTLEYF330突变后GAPDH的表面定位和胞外分泌都缺失,提示这些氨基酸是GAPDH的表面定位和分泌的关键氨基酸。此外10F突变后,GAPDH在上清中消失,但仍出现于细胞表面,提示该突变只影响了GAPDH在上清的分泌,并不影响GAPDH在细胞表面的定位；而322QLV324突变后,GAPDH不能定位到细胞表面,但是可以分泌到培养上清,提示该突变只影响了GAPDH在细胞表面的定位,并不影响GAPDH在上清的分泌。单独的结构域Ⅰ与GFP融合后,其只表达于胞内,上清中没有检测到融合蛋白,柔性结构连接的结构域Ⅰ也不能分泌到胞外,提示单独的结构域Ⅰ不能介导蛋白质的分泌。枯草芽孢杆菌168菌株GAPDH在肺炎链球菌中能够表达,但在细胞表面和上清中均检测不到该蛋白,提示其在肺炎链球菌中不能定位到细胞表面及分泌到胞外,表明GAPDH在枯草芽孢杆菌和肺炎链球菌中的分泌途径存在差异。大肠杆菌双杂交、ELISA直接结合实验和BLI生物膜干涉技术结果显示GAPDH和热休克蛋白DnaJ具有直接的相互作用。结论肺炎链球菌GAPDH的分泌并不是细菌自身裂解引起的,结构域Ⅰ的是其表面定位及分泌所必需的,但不足以使蛋白分泌到胞外。N末端氨基酸3VKVGIN9、18GGG20和C末端325RTLEYF330是GAPDH的表面定位和分泌的关键氨基酸。肺炎链球菌和枯草芽孢杆菌中的GAPDH分泌途径存在差异。另外,GAPDH和热休克蛋白DnaJ具有直接的相互作用。这些结果为进一步研究肺炎链球菌非经典分泌蛋白GAPDH的分泌奠定了坚实的实验基础和理论基础。(本文来源于《重庆医科大学》期刊2015-05-01）
张达矜,崔春萍,吴祖泽[3]（2007）在《非经典分泌蛋白研究进展》一文中研究指出在哺乳动物中,绝大多数细胞外蛋白的分泌是通过内质网/高尔基体依赖的分泌途径,也称作经典分泌途径来实现的。但是越来越多的细胞外蛋白被发现不依赖内质网/高尔基体分泌途径却可以分泌到细胞外。这些非经典分泌蛋白是生命过程中的重要分子,对分析和解决生物医学问题具有重要意义。(本文来源于《军事医学科学院院刊》期刊2007年05期）
刘刚,王清明,陈吉中,范国才,陈惠鹏[4]（2005）在《肝细胞生成素——一种非经典分泌蛋白》一文中研究指出肝细胞生成素(hepatopoietin ,HPO)是一种分泌蛋白.为了研究肝细胞生成素的分泌途径,利用SignalP软件分析了HPO的氨基酸序列,但HPO序列中没有经典分泌蛋白的信号肽.Western印迹实验证明,HPO能以双体形式从细胞中分泌出来.特异性体外阻断实验表明,布雷菲尔德菌素A(brefeldinA)和莫能菌素(monensin)都不能阻断HPO的分泌,说明HPO并不通过经典的内质网 高尔基体(ER -Golgi)途径分泌;优降糖(glyburide)对HPO的分泌没有抑制作用,说明HPO的分泌并不是由ABC1(ATP bindingcassette)转运子介导的;DNP和NH4Cl也不能刺激HPO的分泌,说明内体 溶酶体系统不参与HPO的分泌.上述结果表明,HPO是一种非经典分泌蛋白(non classicalsecretoryprotein) ,能以双体形式从细胞中分泌出来.但和已知的非经典分泌蛋白IL -1β不同,HPO的分泌并不是通过ABC1转运子介导的,内体 溶酶体系统也不参与其分泌.(本文来源于《中国生物化学与分子生物学报》期刊2005年03期）
非经典分泌蛋白论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的明确肺炎链球菌非经典分泌蛋白GAPDH的分泌是否由细菌裂解引起,并确定GAPDH分泌必需结构域。同时,验证该蛋白与热休克蛋白的DnaJ的相互作用,为深入研究GAPDH的分泌机制奠定基础。方法原核表达GAPDH重组蛋白并制备其多克隆抗体,利用该多克隆抗体通过Western Blot评价GAPDH在肺炎链球菌中的保守性。缺失肺炎链球菌主要自溶酶LytA使其丧失自溶能力,通过Western Blot比较野生菌和LytA缺陷菌GAPDH的分泌是否存在差异。同时以只在细胞内表达的CodY蛋白为参照,鉴定肺炎链球菌对数生长早期GAPDH的分泌是否伴有细菌裂解。利用Jpred3软件分析GAPDH二级结构和功能结构域,利用Swiss-Model软件对GAPDH进行同源模建,根据生物信息学结果进行截短表达设计。利用分子克隆技术将不同GAPDH截短表达基因片段克隆到异位表达载体pJW-v25质粒,经测序鉴定后将重组质粒转化肺炎链球菌D39,采用0.15mm Zn2+诱导表达含有GFP标签的GAPDH。分离亚组份,采用Western Blot检测截短表达的GAPDH在肺炎链球菌的定位,初步确定分泌必需结构域。采用结构替代和氨基酸突变两种方法进一步验证分泌必需结构域在GAPDH分泌中的作用,并确定参与GAPDH分泌的关键性氨基酸。将肺炎链球菌GAPDH分泌必需结构域和枯草芽孢杆菌168菌株的GAPDH同源序列进行替换,评价该分泌必需结构域是否具有普遍性。在肺炎链球菌中,将GAPDH的结构域Ⅰ进行直接连接或柔性结构连接后,与GFP标签蛋白融合表达,观察融合蛋白的分泌及表面定位情况,以确定结构域Ⅰ能否作为一个信号肽介导蛋白质的分泌。在肺炎链球菌中异位表达枯草芽孢杆菌168菌株GAPDH,观察其分泌情况,探讨GAPDH在肺炎链球菌和枯草芽孢杆菌中是否具有共同的分泌途径。采用大肠杆菌双杂交系统、直接结合实验、生物膜干涉技术验证GAPDH和热休克蛋白DnaJ的相互作用,并初步探讨DnaJ对GADPH分泌的影响。结果获得了纯度达90%的GAPDH重组蛋白,并制备了效价达107的抗GAPDH多克隆抗体。Western blot结果显示,在对数生长早期二型肺炎链球菌荚膜型D39和荚膜缺陷型R6细胞壁及培养上清中均检测到GAPDH的表达,但是并没有检测到CodY的表达。同时,主要自溶酶LytA缺失后,培养上清依旧检测到GAPDH的表达,与野生菌相比无明显差异。提示,肺炎链球菌GAPDH的分泌不是由于细菌自溶引起。用Jpred3软件分析发现,GAPDH具有两个结构域：结构域Ⅰ和Ⅱ。结构域Ⅰ由N末端的1-150aa和C末端α螺旋(317-335aa)构成。结构域Ⅱ由151-316aa构成。对GAPDH进行同源建模,也发现GAPDH N末端和C末端在空间上相互靠近构成结构域Ⅰ。根据以上生物信息学结果我们设计了GAPDH截短表达。Western blot结果显示,结构域Ⅰ的N末端1-30aa和(或)C末端α螺旋缺失后,GAPDH都不能定位于细菌表面及分泌到培养上清,提示结构域Ⅰ是GAPDH在细胞表面定为及分泌的必需结构域。氨基酸突变结果显示,N末端的氨基酸3VKVGIN9、18GGG20和C末端325RTLEYF330突变后GAPDH的表面定位和胞外分泌都缺失,提示这些氨基酸是GAPDH的表面定位和分泌的关键氨基酸。此外10F突变后,GAPDH在上清中消失,但仍出现于细胞表面,提示该突变只影响了GAPDH在上清的分泌,并不影响GAPDH在细胞表面的定位；而322QLV324突变后,GAPDH不能定位到细胞表面,但是可以分泌到培养上清,提示该突变只影响了GAPDH在细胞表面的定位,并不影响GAPDH在上清的分泌。单独的结构域Ⅰ与GFP融合后,其只表达于胞内,上清中没有检测到融合蛋白,柔性结构连接的结构域Ⅰ也不能分泌到胞外,提示单独的结构域Ⅰ不能介导蛋白质的分泌。枯草芽孢杆菌168菌株GAPDH在肺炎链球菌中能够表达,但在细胞表面和上清中均检测不到该蛋白,提示其在肺炎链球菌中不能定位到细胞表面及分泌到胞外,表明GAPDH在枯草芽孢杆菌和肺炎链球菌中的分泌途径存在差异。大肠杆菌双杂交、ELISA直接结合实验和BLI生物膜干涉技术结果显示GAPDH和热休克蛋白DnaJ具有直接的相互作用。结论肺炎链球菌GAPDH的分泌并不是细菌自身裂解引起的,结构域Ⅰ的是其表面定位及分泌所必需的,但不足以使蛋白分泌到胞外。N末端氨基酸3VKVGIN9、18GGG20和C末端325RTLEYF330是GAPDH的表面定位和分泌的关键氨基酸。肺炎链球菌和枯草芽孢杆菌中的GAPDH分泌途径存在差异。另外,GAPDH和热休克蛋白DnaJ具有直接的相互作用。这些结果为进一步研究肺炎链球菌非经典分泌蛋白GAPDH的分泌奠定了坚实的实验基础和理论基础。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
非经典分泌蛋白论文参考文献
[1].张武,潘伟,马金田,郭涛.菜豆根瘤菌CFN42全基因组非经典分泌蛋白的预测与分析[J].大理学院学报.2015
[2].马峰.肺炎链球菌非经典分泌蛋白GAPDH的分泌机制及其与热休克蛋白DnaJ的相互作用研究[D].重庆医科大学.2015
[3].张达矜,崔春萍,吴祖泽.非经典分泌蛋白研究进展[J].军事医学科学院院刊.2007
[4].刘刚,王清明,陈吉中,范国才,陈惠鹏.肝细胞生成素——一种非经典分泌蛋白[J].中国生物化学与分子生物学报.2005
论文知识图
